新城疫作為危害全球養(yǎng)禽業(yè)的烈性傳染病之一,被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）劃定為A類傳染病。隨著NDV變異毒株的不斷出現(xiàn),非典型性新城疫不斷增多,雞只免疫帶毒現(xiàn)象普遍存在,因而大大限制了傳統(tǒng)疫苗的使用。而DNA疫苗為新型新城疫疫苗的研制提供了新的思路,融合蛋白（F）和血凝素-神經(jīng)氨酸酶蛋白（HN）基因作為新城疫病毒的主要保護性抗原基因,成為新城疫DNA疫苗的研究熱點。目前雞白痢沙門菌仍是危害我國養(yǎng)雞業(yè)的主要致病菌之一,傳統(tǒng)的藥物治療極易造成細菌耐藥性的產(chǎn)生。沙門菌經(jīng)基因工程減毒后,毒力顯著降低,但仍具有良好的侵襲力和免疫原性,可為該病的防控提供一定的思路。減毒沙門菌可通過自然感染途徑將真核質粒DNA攜帶進入宿主細胞內(nèi)進行表達,從而能夠有效地刺激機體產(chǎn)生黏膜免疫、細胞免疫和體液免疫應答,作為疫苗活載體具有廣闊的應用前景。因此,本研究構建了減毒雞白痢沙門菌平衡致死真核遞呈系統(tǒng)及攜帶NDV HN/F基因的重組減毒雞白痢沙門菌株,進一步研究了其生物學及免疫學特性。1.重組減毒雞白痢沙門菌平衡致死真核表達系統(tǒng)的構建及其特性本試驗以質粒pcDNA3.1-Zeo（+）為骨架,將氨芐抗性基因Amp替換為S... 

【文章來源】：河南科技大學河南省

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

NDV結構示意圖(自引文[12]

腫瘤壞死因子、白細胞介素等細胞因子，能夠特異性和選擇性地殺傷和裂解腫瘤細胞，而對正常的體細胞不具有殺傷作用。目前，DV 抗多種腫瘤細胞的特性進行了較為深入的研究，如消化道腫神經(jīng)母細胞瘤、肉瘤、惡性黑色素瘤、腎細胞瘤等，為腫瘤治療及作用機制的研究奠定了基礎[16]。2 NDV 的分子生物學特性1. NDV 基因組結構特征NDV 基因組全長約為 15 000 bp，為單股負鏈且不分節(jié)段的 RNA因(3'-N-P-M-F-HN-L-5')，依次編碼 6 種結構蛋白 N、 P、M、 F 2 種非結構蛋白 V 和 W。在 NDV 感染細胞時，基因組轉錄產(chǎn)A，沉降系數(shù)分別為 18 S、22-28 S 和 35 S，其中 35 S mRNA 較為 蛋白；18S mRNA 幾乎覆蓋整個基因組，可編碼 M、HN、F、N、最后一種 mRNA 由 P 基因經(jīng) RNA 剪輯后產(chǎn)生，編碼 2 種非結構蛋]。

NDV 的致病性依賴于 HN 和 F 蛋白的相互作用，且兩者均為 NDV 重要的宿主保護性抗原，因此兩者共同構成了 NDV 致病性分子基礎。在病毒感染過程中，HN 蛋白具有受體識別、神經(jīng)氨酸酶活性等功能，在一定程度上影響 NDV的毒力。F 蛋白的感染性取決于無活性前體 F0的裂解效率，前體 F0裂解位點能夠被宿主細胞蛋白酶特異性識別并裂解為 F1和 F2亞基。因此，F(xiàn) 蛋白的特異性裂解位點的裂解效率與病毒的毒力大小密切相關，常被作為衡量毒株毒力強弱的重要標志[76]。Marakami 等研究表明，單獨的 HN 或 F 蛋白不能誘導宿主細胞發(fā)生融合作用，致病力不明顯，只有同時存在 HN 和 F 蛋白時，宿主細胞中出現(xiàn)明顯的合胞體，具有較強的致病性[77]。Morrison 等研究表明，HN 蛋白能夠促 F 蛋白的細胞融合作用[78]。另有研究表明，雞只感染 NDV 后，F(xiàn) 和 HN 蛋白的活性直接決定著 NDV 的毒力，并影響著巨噬細胞的生物學活性[71,72]。圖 1-3 NDV 復制示意圖 (自引文[12])Fig. 1-3 Schematic representation of Newcastle disease virus replication (From:[12])

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3488427