發(fā)布時間：2021-11-09 12:44

　　海洋環(huán)境是復(fù)雜多變的,其中存在著巨大的微生物資源。這些海洋微生物不僅在海洋生態(tài)系統(tǒng)和生物地球化學(xué)循環(huán)中起著至關(guān)重要的作用,而且是新型生物活性物質(zhì)和先導(dǎo)化合物的重要來源之一。分離和鑒定海洋微生物資源,尤其是潛在的新物種的分離鑒定和研究是極其重要的。由于分離培養(yǎng)條件和技術(shù)的有限性,這些海洋微生物絕大多數(shù)是未被開發(fā)利用的,也沒有獲得菌株的純培養(yǎng)物,因此,需要對現(xiàn)有分離培養(yǎng)條件進(jìn)行改善和優(yōu)化,開發(fā)新的分離培養(yǎng)方法,分離純化出更多的以前未培養(yǎng)的微生物。本文以威海近海沉積物樣品為研究對象,利用夾心平板法分離海洋沉積物中的微生物,進(jìn)行微生物多樣性的研究,并結(jié)合16S rRNA基因高通量測序技術(shù)分析可培養(yǎng)細(xì)菌的區(qū)系變化,篩選出依賴型菌株,圍繞一株代表性菌株進(jìn)行基因組和轉(zhuǎn)錄組的分析,探究依賴型菌株和助長菌株的促生機(jī)制。將海洋沉積物樣品分為對照組A01、實(shí)驗(yàn)組A08、A38、A71和A72不同的處理組,進(jìn)行微生物的分離培養(yǎng)工作,并結(jié)合16S rRNA基因高通量測序,分析可培養(yǎng)細(xì)菌區(qū)系的變化。選用四株助長菌,利用夾心平板法總共分離到447株細(xì)菌,分布于5個門,116個屬,216個物種中,潛在新物種有156株... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１沉積物樣品采樣點(diǎn)??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｓｅｄｉｍｅｎｔ?ｓａｍｌｅ?ｓａｍｌｉｎｓｉｔｅ??

養(yǎng)基上，大約形成直徑７０ｍｍ的區(qū)域，置于２８°Ｃ培養(yǎng)箱培養(yǎng)２天后，即在底層培??養(yǎng)基表面長出菌苔后待用。上層培養(yǎng)基是改良的１／〗〇?２２１６Ｅ培養(yǎng)基，經(jīng)高溫滅菌??后冷卻至５０?°Ｃ左右后，倒入助長菌生長良好的底層培養(yǎng)基上，使得整個培養(yǎng)皿鋪??滿即可。２８?°Ｃ培養(yǎng)箱培養(yǎng)２天觀察夾心培養(yǎng)基的情況。如有助長菌生長到夾心培??養(yǎng)基最上層或是有其他雜菌的生長，則說明此培養(yǎng)基被污染。選取表面無任何菌株??生長的培養(yǎng)基作為微生物分離過程中的分離培養(yǎng)基使用。另外，設(shè)計了一組對照組，??即在底層培養(yǎng)基和上層培養(yǎng)基中間沒有任何助長菌的存在。夾心培養(yǎng)基的配制過??程如圖２－２所示。??

文???表２－４不同分離培養(yǎng)基可培養(yǎng)細(xì)菌菌落計數(shù)??Ｔａｂｌｅ?２－４?Ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ?ｏｆ?ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｍｅｄｉａ??不同處理組?菌落總數(shù)（／ｇ）???Ａ０１?１．６ｘｌ〇５??Ａ０８?２．５ｘｌ〇５??Ａ３?８?１．９ｘｌ０５??Ａ７１?９．５ｘｌ〇４??Ａ７２?１．４ｘｌ０５??泰Ｃ?Ｌａ?Ｘ?）??Ａ０１?Ａ０８?Ａ３８?Ａ７１?Ａ７２??圖２－３不同分離培養(yǎng)基的細(xì)菌菌落形態(tài)??Ｆｉｇ?２－３?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｃｏｌｏｎｙ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｉｓｏｌａｔｉｏｎ?ｍｅｄｉａ??表２－Ｓ潛在新物種的分類地位??Ｔａｂｌｅ?２－５?Ｔｈｅ?ｔａｘｏｎｏｍｉｃ?ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｐｏｔｅｎｔｉａｌ?ｎｏｖｅｌ?ｓｐｅｃｉｅｓ??菌株編號?比對結(jié)果?相似度系統(tǒng)發(fā)育類群（門）??對照組Ａ０１??Ｃ０２?Ｌｕｔｅｉｍｏｎａｓ?ｐａｄｉｎａｅ?９７．９５％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ０３?Ｈａｌｏｃｙｎｔｈｉｉｂａｃｔｅｒ?ｎａｍｈａｅｎｓｉｓ?９７．６９％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ０９?Ｌｕｔｅｉｍｏｎａｓ?ｐａｄｉｎａｅ?９８．０５％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??ＣＩＯ?Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ?ａｍｏｒｐｈａｅ?９８．２６％?Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ１１?Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ?ａｒｔｈｒｏｓｐｈａｅｒａｅ?９８．２１?％?Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ??Ｃ１２?Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｖｉ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]海洋放線菌Streptomyces sp.MDW-06中1個新的聚酮類化合物[J]. 王聰,邱子言,雷福厚,譚學(xué)才,姜明國,李浩,李小燕.  中國中藥雜志. 2019(10)
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[4]從環(huán)境中分離培養(yǎng)微生物:培養(yǎng)基營養(yǎng)水平至關(guān)重要[J]. 周楠,姜成英,劉雙江.  微生物學(xué)通報. 2016(05)
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[7]海洋微生物多樣性的研究進(jìn)展[J]. 孫昌魁,馮靜,馬桂榮.  生命科學(xué). 2001(03)



本文編號：3485368