脫水素（Dehydrin,DHN）屬于胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白第二家族（LEA-II）,是脫水脅迫響應(yīng)基因的主要一類。干旱,高鹽和低溫等非生物脅迫會導(dǎo)致植物體內(nèi)出現(xiàn)脫水脅迫,誘導(dǎo)脫水素大量表達,從而保護蛋白質(zhì)、核酸和細胞膜等。然而,植物體內(nèi)不同類型的DHN蛋白在植物生長發(fā)育及抵抗非生物脅迫過程中發(fā)揮的功能存在較大差異。新疆沙冬青（Ammopiptanthus nanus）,作為一種強抗逆沙漠植被,探究其抗逆分子機理將有助于我們改良農(nóng)作物抗逆性,從而為提高作物產(chǎn)量與質(zhì)量服務(wù)。在本課題組前期研究中,我們克隆獲得了一個新疆沙冬青脫水素（AnDHN）基因。為了明確AnDHN基因在新疆沙冬青抵抗非生物脅迫中的功能,我們構(gòu)建了AnDHN超表達載體,并將其轉(zhuǎn)入擬南芥中;以AnDHN轉(zhuǎn)基因擬南芥T3代純合體為試驗材料,進行多種非生物脅迫抗性分析,觀察轉(zhuǎn)基因擬南芥抗逆性,從而探究AnDHN基因在非生物脅迫中的功能。主要結(jié)果如下:1.本試驗采用in-fusion連接方法構(gòu)建了pCAMBIA1302-AnDHN-GFP重組質(zhì)粒,并利用瞬時表達的方法,將含有重組質(zhì)粒載體的農(nóng)桿菌注入煙草葉片中;同時,以PAD62M... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒的菌液PCR鑒定注:M:DL2000;1-3:重組質(zhì)粒

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文19圖2-1重組質(zhì)粒的菌液PCR鑒定注:M:DL2000;1-3:重組質(zhì)粒Fig.2-1BacterialPCRIdentificationofRecombinantPlasmidM:DL2000marker;Lane1-3:Recombinantplasmid圖2-2重組質(zhì)粒的測序結(jié)果Fig.2-2Theresultofrecombinantplasmidsequencing2.3.2重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌PCR檢測將pCAMBIA1302-AnDHN-GFP重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入GV3101農(nóng)桿菌感受態(tài)中，使用重組質(zhì)粒的特異性引物進行擴增，進行菌液PCR檢測，結(jié)果顯示電泳條帶大小符合目的片

第二章新疆沙冬青AnDHN基因的亞細胞定位20段（圖2-7），證明pCAMBIA1302-AnDHN-GFP表達載體已經(jīng)成功轉(zhuǎn)入GV3101農(nóng)桿菌感受態(tài)中，可以用于下一步煙草注射試驗。圖2-3重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌PCR檢測注:M:DL2000；1-3:重組質(zhì)粒Fig.2-3RecombinantplasmidtransformationofAgrobacteriumPCRdetectionM:DL2000marker;Lane1-3:Recombinantplasmid2.3.3AnDHN的亞細胞定位預(yù)測為了明確AnDHN蛋白在植物細胞中的功能和分布，本試驗使用SignalP4.1對AnDHN蛋白進行信號肽預(yù)測，利用targetP對AnDHN蛋白的亞細胞分布進行預(yù)測。結(jié)果表明：AnDHN蛋白并無明顯的信號肽，這暗示其不屬于分泌蛋白，不能夠進行獨立跨膜運輸；同時，targetP預(yù)測結(jié)果表明AnDHN蛋白可能分布于除了葉綠體，線粒體及高爾基體的其它亞細胞位置（圖2-8）圖2-4AnDHN亞細胞定位預(yù)測Fig.2-4PredictionofsubcellularlocalizationofAnDHN2.3.4AnDHN蛋白為膜蛋白通過綠色熒光蛋白和marker對AnDHN的亞細胞定位進行研究，首先選擇構(gòu)建好的表達載體pCAMBIA1302-AnDHN-GFP和PAD62細胞膜的位置標(biāo)記marker，等比例混合后，注射煙草煙進行瞬時表達，使用共聚焦顯微鏡觀察AnDHN蛋白的亞細胞定位情

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]小麥脫水素WDHN1基因的克隆及其功能分析[D]. 劉浩.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]茶樹脫水素基因結(jié)構(gòu)與表達差異分析[D]. 陳靜.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3480828