萊姆病（Lyme disease）是由蜱傳播的自然疫源性疾病。該病的典型臨床癥狀為游走性紅斑,主要侵害心臟、關(guān)節(jié)、神經(jīng),一旦感染,會(huì)對(duì)機(jī)體造成不可逆性損傷。小型哺乳類動(dòng)物是蜱蟲的主要宿主。隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展,人與寵物的頻繁接觸增加了人患萊姆病的潛在風(fēng)險(xiǎn),使得萊姆病成為全球廣泛關(guān)注的人獸共患病。由于萊姆病的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣,病原體分離困難且耗時(shí)長,因此該病常不能被及時(shí)確診,進(jìn)而錯(cuò)過最佳治療時(shí)間。目前,該病的檢測方法常選用出現(xiàn)時(shí)間早、抗原性強(qiáng)、持續(xù)性久的菌體蛋白作為檢測抗原,但這些菌體蛋白存在一定的異質(zhì)性,易造成檢測效果不佳,對(duì)我國萊姆病的預(yù)防和控制極為不利。因此,根據(jù)我國的實(shí)際流行情況,建立與流行致病基因型相匹配的檢測方法刻不容緩。在預(yù)防萊姆病的過程中,疫苗免疫是預(yù)防萊姆病最有效的方式,但國際上至今無人用商品化疫苗來預(yù)防萊姆病。當(dāng)前,萊姆病疫苗的研制主要集中在全菌疫苗、亞單位疫苗等,這些疫苗的安全性差、免疫原性低,因此圍繞綠色環(huán)保理念,研發(fā)安全高效的萊姆病新型疫苗已迫在眉睫。針對(duì)以上問題,本研究旨在建立用于檢測犬萊姆病的間接ELISA方法,以期為我國犬萊姆病檢測提供一種快速、有效的臨床診斷方法... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

典型螺旋體；（B）伯氏疏螺旋體[17]

第一篇文獻(xiàn)綜述第1章伯氏疏螺旋體概述11圖2伯氏疏螺旋體的防控策略[34]Figure2PreventionandcontrolstrategiesofBorreliaburgdorferi1.2.5萊姆病疫苗的研究進(jìn)展萊姆病的發(fā)生嚴(yán)重危害了國際公共衛(wèi)生的健康發(fā)展，而疫苗的研發(fā)有助于該病情的預(yù)防與控制[57]，因此研制萊姆病新型疫苗迫在眉睫。當(dāng)前無人用的商品化萊姆病疫苗，僅有一種含OspA的萊姆病疫苗（VLA15）進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段[34]。從動(dòng)物源頭預(yù)防萊姆病可能是阻止萊姆病蔓延的最佳方式之一。一方面，獸用萊姆病疫苗會(huì)切斷一部分傳染源，降低了人患萊姆病的風(fēng)險(xiǎn)，另一方面，獸用疫苗只對(duì)動(dòng)物免疫，避免了人用疫苗對(duì)機(jī)體造成的副作用，因此，獸用萊姆病疫苗對(duì)萊姆病的預(yù)防有極為重要的作用。目前，美國已批準(zhǔn)了幾種犬用萊姆病疫苗，但大多數(shù)犬用萊姆病疫苗是全菌疫苗，全菌疫苗中含有多種未知的菌體蛋白，會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生很大的副作用，同時(shí)干擾后續(xù)的診斷結(jié)果。并且有研究表明，萊姆病疫苗在犬體內(nèi)的有效程度會(huì)因外界因素的變化而導(dǎo)致高度可變[44]，因此研制獸用萊姆病疫苗仍處于十分嚴(yán)峻的的形勢。當(dāng)前，研制的疫苗主要包括全菌疫苗、DNA疫苗、亞單位疫苗、病毒載體疫苗等。全菌疫苗采用直接滅活菌體的方法研制，由于大量菌體蛋白的刺激，會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生許多無法控制的副作用，一般不推薦使用在人用萊姆疫苗中。早期萊姆病疫苗會(huì)通過基因工程手段構(gòu)建出DNA疫苗，但DNA疫苗會(huì)在機(jī)體內(nèi)持續(xù)復(fù)制增殖，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生了潛在的危害。亞單位疫苗多采用萊姆病抗原性較強(qiáng)的蛋

第一篇文獻(xiàn)綜述第2章病毒樣顆粒概述14圖3不同病毒樣顆粒的結(jié)構(gòu)示意圖[66]Figure3Schematicdiagramofdifferentvirus-likeparticles病毒樣顆粒疫苗的制備首先要考慮的是免疫原性，其次是蛋白的加工、翻譯、修飾及其表達(dá)量，最后還需要考慮影響生產(chǎn)成本的下游純化技術(shù)。VLPs主要有四大表達(dá)系統(tǒng)，分別是細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)。此外，植物表達(dá)系統(tǒng)、活生物（如桑蠶蛹）以及無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)也應(yīng)運(yùn)而生[68-70]。細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)主要是利用工程菌（大腸桿菌）原核表達(dá)病毒樣顆粒，通過密碼子優(yōu)化等方式表達(dá)出適應(yīng)細(xì)菌的蛋白，以期獲得成本低、蛋白產(chǎn)量高的VLPs[71]，但該方法無法翻譯、折疊蛋白，且表達(dá)出來的蛋白常常屬于不可溶性蛋白，往往會(huì)對(duì)下游純化造成困難[72]，在變性到復(fù)性的過程中也會(huì)影響蛋白本身的空間構(gòu)象，因此，該方法是生產(chǎn)無囊膜的單衣殼VLPs的主要選擇[73]。酵母表達(dá)系統(tǒng)可表達(dá)單一或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白的VLPs，該表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的蛋白雖可被加工、翻譯、修飾，但該表達(dá)系統(tǒng)與細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)相比，其生產(chǎn)過程更為復(fù)雜且產(chǎn)量不高。哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)與酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢相似，但是與酵母表達(dá)系統(tǒng)相比，蛋白的后期加工更好，表達(dá)程序更為簡單，產(chǎn)量更多。然而，在蛋白表達(dá)量方面仍無法與細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)相提并論。昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)基本具備以上表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢，既適用于無囊膜VLPs也適用于有囊膜VLPs[74-76]。該系統(tǒng)可以進(jìn)行加工、翻譯、修飾等過程，因此能表達(dá)一個(gè)或多個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白。該系統(tǒng)的表達(dá)程序簡單，生產(chǎn)周期短，常應(yīng)用于變異度高的病毒（如流感病毒）[77-80]，以期在一定程度上降低疾病的傳播風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，昆蟲桿狀病毒主要感染節(jié)肢動(dòng)物，不感染哺乳類動(dòng)物，因此對(duì)動(dòng)物的安全性也提供了保

【參考文獻(xiàn)】：
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