轉(zhuǎn)錄因子是調(diào)控基因表達(dá)的上游元件。近年來,隨著分子生物技術(shù)與植物基因工程研究的不斷深入,利用遺傳轉(zhuǎn)化將C₄光合作用途徑的轉(zhuǎn)錄因子基因轉(zhuǎn)入C₃植物中進(jìn)行基因表達(dá)的調(diào)控,以期提高C₃植物光合作用效率成為研究熱點(diǎn)。水稻,是一種重要的糧食作物和經(jīng)濟(jì)作物。本研究主要利用Gateway克隆技術(shù)構(gòu)建目的基因的表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將目的基因轉(zhuǎn)入水稻品種日本晴。對轉(zhuǎn)基因T0、T1代植株進(jìn)行農(nóng)藝性狀、光合作用及內(nèi)源生長素代謝相關(guān)基因的測定,以探究目的基因?qū)D(zhuǎn)基因植株的影響。具體研究內(nèi)容及試驗(yàn)結(jié)果如下:1.利用Gateway克隆技術(shù)的LR反應(yīng),將目的基因連接到目的載體上,構(gòu)建成用于遺傳轉(zhuǎn)化的表達(dá)載體,共構(gòu)建了20個(gè)目的基因的表達(dá)載體。2.利用熱激法將表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α。在含壯觀霉素的LB培養(yǎng)基對轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌進(jìn)行初篩后,選圓形、乳白色單菌落進(jìn)行PCR檢測載體上的目的基因和潮霉素基因。PCR產(chǎn)物經(jīng)測序、比對,驗(yàn)證載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α。3.利用試劑盒進(jìn)行大腸桿菌DH5α內(nèi)的質(zhì)粒提取,通過瓊脂糖凝膠電泳對質(zhì)粒提取結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。... 

【文章來源】：河北科技大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 課題背景
        1.1.1 研究背景
        1.1.2 選題意義
    1.2 植物葉片發(fā)育概述
        1.2.1 植物葉片的發(fā)育
        1.2.2 水稻葉片的形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能
        1.2.3 生長素對葉片發(fā)育影響
    1.3 植物轉(zhuǎn)錄因子的概述
        1.3.1 植物轉(zhuǎn)錄因子的基本結(jié)構(gòu)
        1.3.2 植物轉(zhuǎn)錄因子的功能
    1.4 Gateway技術(shù)的概述
        1.4.1 Gateway技術(shù)構(gòu)建表達(dá)載體的原理
        1.4.2 Gateway技術(shù)的應(yīng)用
    1.5 植物遺傳轉(zhuǎn)化的方法
        1.5.1 基因槍法
        1.5.2 花粉管通道法
        1.5.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)法
    1.6 水稻窄葉突變體研究的概述
        1.6.1 窄葉突變體的研究進(jìn)展
        1.6.2 窄葉突變體在育種上的應(yīng)用
第2章 表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.1 試驗(yàn)材料、試劑和儀器
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)試劑與儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.2 熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        2.2.3 大腸桿菌菌落PCR的篩選
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果及分析
        2.3.1 抗壯觀霉素的大腸桿菌單菌落篩選
        2.3.2 菌落PCR的檢測
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 根癌農(nóng)桿菌菌株AGL1的轉(zhuǎn)化
    3.1 試驗(yàn)材料、藥品和儀器
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)藥品及儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 表達(dá)載體質(zhì)粒DNA的提取
        3.2.2 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備
        3.2.3 液氮凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 質(zhì)粒提取結(jié)果與分析
        3.3.2 轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌的篩選及鑒定
    3.4 討論
        3.4.1 農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備
        3.4.2 農(nóng)桿菌感受態(tài)的轉(zhuǎn)化
    3.5 本章小結(jié)
第4章 水稻的遺傳轉(zhuǎn)化
    4.1 試驗(yàn)材料、試劑和儀器
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)試劑和儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化
        4.2.2 T0代轉(zhuǎn)基因植株的陽性檢驗(yàn)
        4.2.3 T0代轉(zhuǎn)基因植株的表型觀測
    4.3 結(jié)果及分析
        4.3.1 愈傷組織的誘導(dǎo)
        4.3.2 抗性愈傷的篩選
        4.3.3 胚性愈傷的預(yù)分化及分化
        4.3.4 壯苗及移栽
        4.3.5 T0代窄葉表型植株的陽性檢驗(yàn)
        4.3.6 T0代植株的表型觀測
    4.4 討論
        4.4.1 培養(yǎng)基的配制
        4.4.2 愈傷組織的選取
    4.5 本章小結(jié)
第5章 轉(zhuǎn)基因水稻的性狀檢測
    5.1 試驗(yàn)材料、試劑及儀器
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 試驗(yàn)試劑及儀器
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 轉(zhuǎn)基因水稻的陽性檢驗(yàn)
        5.2.2 轉(zhuǎn)基因水稻農(nóng)藝性狀的檢測
        5.2.3 轉(zhuǎn)基因水稻光合作用的測定
    5.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.3.1 轉(zhuǎn)基因水稻性狀分離比統(tǒng)計(jì)與分析
        5.3.2 轉(zhuǎn)基因水稻的陽性檢測
        5.3.3 轉(zhuǎn)基因水稻農(nóng)藝性狀的檢測
        5.3.4 轉(zhuǎn)基因水稻光合作用的分析
    5.4 討論
    5.5 本章小結(jié)
第6章 生長素相關(guān)基因的定量分析
    6.1 試驗(yàn)材料、試劑及儀器
        6.1.1 試驗(yàn)材料
        6.1.2 試驗(yàn)試劑及儀器
    6.2 試驗(yàn)方法
        6.2.1 水稻葉片總RNA的提取
        6.2.2 cDNA的合成
        6.2.3 生長素相關(guān)基因的qRT-PCR的測定
    6.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        6.3.1 RNA的質(zhì)量檢測
        6.3.2 qRT-PCR結(jié)果分析
    6.4 討論
        6.4.1 RNA的提取及檢測
        6.4.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    6.5 本章小結(jié)
結(jié)論
附錄
    附錄1
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用一步克隆方法快速高效構(gòu)建Gateway入門載體[J]. 張艷軍,趙利,李雨佳,趙江哲,張可偉.  浙江師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020(01)
[2]論水稻栽培現(xiàn)狀及高產(chǎn)栽培技術(shù)意見[J]. 金亮亮.  種子科技. 2019(10)
[3]我國水稻栽培現(xiàn)狀、高產(chǎn)栽培技術(shù)及展望[J]. 楊金鵬.  鄉(xiāng)村科技. 2019(19)
[4]植物葉緣和葉脈發(fā)育調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 鄭夢迪,王春陽,張寒,張彥,汪興軍.  生物資源. 2019(01)
[5]轉(zhuǎn)錄因子及其動態(tài)成像分析技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 何麗娜,趙艷霞,崔亞寧,玉猛,李曉娟,林金星.  電子顯微學(xué)報(bào). 2019(01)
[6]2個(gè)不同番茄品系fasciated基因克隆及表達(dá)載體構(gòu)建[J]. 劉爽.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(20)
[7]水稻轉(zhuǎn)錄因子基因OsSHR2的表達(dá)特征及其在營養(yǎng)生長中的調(diào)控作用[J]. 張占田,孫雅菲,艾昊,羅聞?wù)?馮冰,孫文獻(xiàn),徐國華,孫淑斌.  中國水稻科學(xué). 2018(05)
[8]植物葉緣形態(tài)的發(fā)育調(diào)控機(jī)理[J]. 柯錦秀,陳多,郭延平.  生物多樣性. 2018(09)
[9]中國自主知識產(chǎn)權(quán)植物轉(zhuǎn)化方法研究進(jìn)展[J]. 張虎,張鵬華,崔愛民,單皓,張久剛.  農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào). 2018(08)
[10]花椰菜ERF114基因的克隆及Gateway技術(shù)構(gòu)建表達(dá)載體[J]. 韓占品,任健,于瑋瑋,范夕玲,李慧.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(06)

碩士論文
[1]生長素極性運(yùn)輸調(diào)控早期葉原基近遠(yuǎn)軸極性建立的研究[D]. 史堅(jiān)敏.上海師范大學(xué) 2017
[2]水稻窄卷葉突變體nrl4的遺傳分析與基因定位[D]. 梁容.浙江大學(xué) 2017



本文編號：3424637