放線菌（Actinomycesbovis）是一類與人類生產(chǎn)和生活關(guān)系極為密切的重要微生物資源,是天然抗生素主要來源之一。特別是極端環(huán)境的放線菌,具有特殊的生理特性和代謝機制,能夠產(chǎn)生特殊的次級代謝產(chǎn)物,是尋找挖掘新型天然抗生素的重要來源。本研究以從新疆鹽堿地分離得到的一株具有高抑菌活性的絲狀菌作為出發(fā)菌株,在確定分類歸屬的基礎(chǔ)上,從生物學(xué)活性、發(fā)酵條件、抑菌物質(zhì)的分離純化等方面進行了探究,為進一步開發(fā)利用該菌株奠定了基礎(chǔ)。本論文主要研究結(jié)果如下:（1）形態(tài)學(xué)觀察、生理生化試驗和分子鑒定試驗,表明出發(fā)菌株隸屬于放線菌目,鏈霉菌屬（Streptomyces）的藍色類群,并命名為菌株XJ-16。XJ-16具有不耐溫、非嗜鹽和具有一定嗜堿性特征;酶譜分析表明XJ-16能夠分泌纖維素酶、脂肪酶、脲素酶、蛋白酶、過氧化氫酶和脂肪酶。（2）發(fā)酵液抑菌實驗表明,除了肺炎克雷伯菌S型沒有抑制作用外,XJ-16的發(fā)酵液對5株病原細(xì)菌指示菌具有較強的抑菌活性;除了對假絲狀酵母真菌—白色念珠菌有抑制作用,對5株病原真菌指示菌沒有有抑菌活性;XJ-16發(fā)酵液次級代謝產(chǎn)物抑菌活性物質(zhì)對酸堿耐受不同,對酸耐受較強、... 

【文章來源】：沈陽師范大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【圖文】：

技術(shù)路線圖

50μL各抗生素濃度，28℃培養(yǎng)5d。出現(xiàn)抑菌圈說明菌株對該抗生素敏感，反之不敏感。供試抗生素：鹽酸林可霉素、氯霉素、硫酸卡那霉素、氨芐青霉素鈉、大觀霉素，供試濃度均為10mg/mL、30mg/mL、50mg/mL、100mg/mL、200mg/mL。2.3結(jié)果與分析2.3.1菌株形態(tài)特征觀察2.3.1.1菌落和色素觀察XJ-16菌株在高氏1號培養(yǎng)基上生長速度快，24h就有白色氣生菌絲長出；48h后，產(chǎn)生藍色色素，72h后色素變?yōu)樗{紫色，第120h變成藍紫黑色。培養(yǎng)168h后，氣生菌絲由白色變成灰粉色再變成絨粉色，孢子絲白色，呈放射狀，菌落表面粗糙致密，如圖2-1（a）所示。菌株搖床培養(yǎng)7d后，菌株色素顏色是藍紫色色素，如圖2-1（b）所示。圖2-1菌株XJ-16菌落形態(tài)和菌株色素顏色觀察Fig.2-1ObservationoncolonymorphologyandpigmentcolorofstrainXJ-16a:菌落b:色素顏色

耐堿絲狀菌XJ-16的鑒定及生物學(xué)活性成份分析152.3.1.2菌絲形態(tài)顯微觀察采用插片法觀察菌株的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子形態(tài)。用物鏡40×、目鏡10×觀察到培養(yǎng)3天基內(nèi)菌絲呈分枝狀，分叉處呈直角向外伸出，氣生菌絲有1-2個螺旋，如圖2-2(a)所示；用目鏡10×，油鏡100×觀察培養(yǎng)7天的基內(nèi)菌絲有橫隔，基絲不斷裂，基內(nèi)菌絲有藍色和紫色色素，如圖2-2(b)所示；用目鏡10×，油鏡100×觀察培養(yǎng)7天孢子圓形，孢子形成孢子鏈，無孢子囊，如圖2-2(c)所示。圖2-2菌株XJ-16形態(tài)學(xué)觀察Figure2-2MorphologicalobservationofstrainXJ-16a:基絲和孢子絲b:基絲c:孢子和孢子鏈2.3.2菌株分子生物學(xué)鑒定提取菌株XJ-16的基因組DNA為模板，用通用引物27F和1492R，進行PCR擴增，凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物結(jié)果如圖2-3，與1kbMarker長度比較，菌株16SrDNA片段長為1500bp。將凝膠回收PCR產(chǎn)物送至上海生工生物公司測序，測序結(jié)果如圖2-4，根據(jù)測序結(jié)果，用MEGA7.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，判定該菌株的屬。將菌株的16S區(qū)序列的測序結(jié)果提交到GenBank數(shù)據(jù)庫，并進行BLAST相似性比對，從中選擇20株同源性從高到低的相似度序列，在MEGA7.0軟件abc

【參考文獻】：
期刊論文
[1]4種多重耐藥菌監(jiān)測結(jié)果分析[J]. 趙蓬波,魏卓,張兵,楊廣民.  中國實驗診斷學(xué). 2020(01)
[2]鏈霉菌的功能及其在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用[J]. 朱志炎,田志宏,李建雄.  熱帶亞熱帶植物學(xué)報. 2019(05)
[3]三株紅樹林來源鏈霉菌的鑒定及抗菌活性研究[J]. 鄭紅蕓,吳越,葉景靜,陳建宏,蔣蓮秀,何義,黃大林.  中國藥理學(xué)通報. 2019(07)
[4]多重耐藥菌醫(yī)院感染監(jiān)測及耐藥性分析[J]. 李辛.  現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué). 2019(02)
[5]嗜堿放線菌的分離方法[J]. 張永光,李陳紅,付夢媛,李文均.  生物資源. 2019(01)
[6]極端環(huán)境放線菌TRM45306的鑒定及次生代謝產(chǎn)物分析[J]. 張越鋒,呂玲玲,蔣偉權(quán).  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2018(10)
[7]枯草芽孢桿菌抑菌活性物質(zhì)鑒定、抑菌特性及發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 張雯,卞丹,沈燕秋,王文思,劉志彬,倪莉.  中國食品學(xué)報. 2017(12)
[8]土壤中放線菌的分離與應(yīng)用[J]. 詹慶,曹雅麗.  現(xiàn)代園藝. 2017(03)
[9]墨脫自然保護區(qū)嗜熱放線菌多樣性及生物活性初步研究[J]. 尹明遠(yuǎn),張格杰,何建清.  西南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2016(12)
[10]嗜鹽嗜堿放線菌的研究進展與展望[J]. 加蘇爾·阿不都克里木,旭格拉,塔衣爾,阿不都克里木·熱依木,木尼熱木·阿力木江,迪麗拜爾·托合提.  新疆師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2015(01)

博士論文
[1]利用組學(xué)方法分析嗜熱鏈霉菌高效降解轉(zhuǎn)化生物質(zhì)廢棄物的分子機制[D]. 孫曉萌.山東大學(xué) 2019
[2]死海放線菌新物種的多相分類鑒定及白色嗜鹽多孢菌AFM 10251嗜鹽機制的多組學(xué)研究[D]. 姜影影.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018
[3]番茄灰霉菌拮抗放線菌及抑菌活性物質(zhì)研究[D]. 朱茂山.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]新疆羅布泊鹽湖放線菌多樣性及多相分類[D]. 關(guān)統(tǒng)偉.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]抗黃瓜棒孢葉斑病放線菌的篩選及Streptomyces inhibens多相分類研究[D]. 金麗穎.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]天藍色鏈霉菌IclR家族轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白SCO2832的功能初步研究[D]. 張紫茜.山東大學(xué) 2019
[3]污水中纖維素降解菌的篩選與產(chǎn)酶特性的初步探究[D]. 聶艷.曲阜師范大學(xué) 2018
[4]紅海灘嗜堿放線菌分離鑒定及生物學(xué)活性研究[D]. 劉笑廷.沈陽師范大學(xué) 2017
[5]五株嗜鹽放線菌次級代謝產(chǎn)物的研究[D]. 孫明偉.山東大學(xué) 2016
[6]鏈霉菌SN-194的篩選及其次生代謝產(chǎn)物對植物病原真菌的抑制作用[D]. 鄒陳文翔.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[7]青藏高原土壤中低溫高效原油降解菌的篩選、鑒定及其降解特性的研究[D]. 王藝霖.蘭州交通大學(xué) 2015
[8]嗜酸放線菌701產(chǎn)纖溶酶深層發(fā)酵條件及其抗凝、溶栓性質(zhì)研究[D]. 蔡尤佳.齊齊哈爾大學(xué) 2012
[9]塔里木盆地土壤放線菌分布及抗動物病原菌菌株篩選的研究[D]. 饒麗娟.吉林大學(xué) 2005
[10]酸性土壤中嗜酸簽名稀有放線菌的多樣性及多相分類研究[D]. 崔慶鋒.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2004



本文編號：3357523