目的:人脂肪干細(xì)胞（Human adipose derived stem/stromal cells,hASCs）是骨組織工程中常用的種子細(xì)胞,在體內(nèi)和體外都具有良好的成骨特性。腫瘤蛋白p53誘導(dǎo)的核蛋白2（Tumor protein p53-induced nuclear protein 2,TP53INP2）與細(xì)胞自噬、糖尿病、腫瘤的發(fā)生發(fā)展、肥胖的調(diào)節(jié)及成脂分化的調(diào)控等密切相關(guān)。然而,TP53INP2對(duì)hASCs成骨分化的調(diào)節(jié)作用尚不清楚。因此,本課題旨在探索TP53INP2在hASCs成骨分化過(guò)程中的作用及其相關(guān)機(jī)制。方法:體外分離、培養(yǎng)并鑒定hASCs,同時(shí)檢測(cè)其多向分化的能力。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）、Western blot技術(shù)篩選沉默TP53INP2效率高的siRNA序列,構(gòu)建TP53INP2表達(dá)沉默的細(xì)胞模型。細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA后成骨誘導(dǎo)3、7天,qRT-PCR檢測(cè)成骨標(biāo)記物RUNX2、ALP、OCN、COL1A1的mRNA水平;Western blot檢測(cè)RUNX2蛋白的表達(dá)。利用Western ... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

hASCs顯微鏡下形態(tài)

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文14圖2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)hASCs表面免疫抗原Figure2.hASCsimmunophenotypesanalysisbyflowcytometry2.3hASCs多向分化潛能2.3.1成骨分化第三代hASCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)21天后，行茜素紅染色液染色。染色完成后在倒置相差顯微鏡下可見(jiàn)大量鈣結(jié)節(jié)形成（圖3A），證明hASCs可成骨分化。2.3.2成脂分化第三代hASCs經(jīng)成脂誘導(dǎo)8天后，行飽和油紅O染色液染色。染色完成后在倒置相差顯微鏡下可見(jiàn)大量被染為紅色的脂滴形成（圖3B），證明hASCs可成脂分化。2.3.3成軟骨分化第三代hASCs經(jīng)成軟骨誘導(dǎo)30天后，切片，AlcianBlue染色后，鏡下觀察見(jiàn)細(xì)胞團(tuán)內(nèi)大量藍(lán)色染色顆粒（圖3C），提示糖胺聚糖的形成，表明有軟骨基質(zhì)的形成，證明hASCs可成軟骨分化。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文15圖3：hASCs多向分化圖3.hASCs的多向分化A.茜素紅染色；B.飽和油紅O染色；C.阿爾辛蘭染色Figure3.MultilineagedifferentiationofhASCs.A.AlizarinRedSstaining;B.OilRedOstaining;C.AlcianBluestainingABC

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3314150