本文關(guān)鍵詞：微生物谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)菌株的篩選和誘變，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶廣泛的運(yùn)用在工業(yè)上、農(nóng)業(yè)上、食品加工業(yè)上以及化妝品工業(yè)上,能催化蛋白質(zhì)產(chǎn)生交聯(lián)作用,轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶具有的強(qiáng)大的粘合作用,被譽(yù)為“21世紀(jì)超級(jí)粘合劑”。自然界中很多微生物都能發(fā)酵生產(chǎn)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶,但是這些菌株產(chǎn)酶能力低、底物專一性差,這限制了其在工業(yè)中的運(yùn)用。本研究致力于從自然界中篩選出產(chǎn)轉(zhuǎn)谷氨酰酰胺酶的菌株,以此菌株作為原始菌株進(jìn)行分子生物學(xué)改造,以期提高其產(chǎn)轉(zhuǎn)谷氨酰酰胺酶的能力。本研究的主要研究內(nèi)容如下：(1)從土壤中篩選產(chǎn)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的菌株,比較其產(chǎn)酶的能力大小,選擇一株產(chǎn)酶能力較高的菌株作為原始菌株進(jìn)行誘變。對(duì)原始菌株進(jìn)行染色,顯微鏡下觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu),根據(jù)形態(tài)特征可初步斷定為放線菌。提取原始菌株的基因組,以此基因組為模板進(jìn)行16SrDNA菌種鑒定,判斷原始菌株與茂源鏈霉菌的親緣關(guān)系最接近。(2)以此菌株的基因組為模板擴(kuò)增轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶編碼基因,利用易錯(cuò)PCR技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶編碼基因進(jìn)行隨機(jī)突變。由于野生菌產(chǎn)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的產(chǎn)量低、酶活小、底物專一性差,希望通過易錯(cuò)PCR對(duì)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的編碼基因進(jìn)行改造,以期達(dá)到提高酶活的目的。(3)將易錯(cuò)PCR的獲得的片段和未誘變的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶編碼基因利用分子生物學(xué)手段導(dǎo)入大腸桿菌進(jìn)行過表達(dá)。茂源鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)酶的周期長,培養(yǎng)基復(fù)雜,而大腸桿菌具有易培養(yǎng),生長快,遺傳背景清楚等優(yōu)點(diǎn),將轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶基因?qū)氪竽c桿菌中進(jìn)行過表達(dá),可以達(dá)到降低生產(chǎn)成本、縮短發(fā)酵周期的目的。(4)將構(gòu)建好的重組菌株進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶,溫度、轉(zhuǎn)速、時(shí)間等發(fā)酵條件會(huì)影響微生物產(chǎn)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的能力,因此利用單因素法對(duì)大腸桿菌產(chǎn)酶的培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,尋找最優(yōu)的生產(chǎn)條件,為探索大腸桿菌產(chǎn)轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的發(fā)酵生產(chǎn)打下基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶 篩菌 菌株鑒定 易錯(cuò)PCR 過表達(dá) 發(fā)酵條件優(yōu)化
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q939.9
【目錄】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-4
• 中文文摘4-9
• 緒論9-25
• 第一節(jié) 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的簡述9-15
• 1.1 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的來源9-11
• 1.2 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的結(jié)構(gòu)11
• 1.3 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的反應(yīng)機(jī)理11-13
• 1.4 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的酶活檢測方法13-15
• 第二節(jié) 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的研究進(jìn)展15-17
• 2.1 動(dòng)植物中提取谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶15
• 2.2 微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶15-16
• 2.3 分子生物學(xué)手段改造谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)菌株16-17
• 第三節(jié) 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的應(yīng)用17-20
• 3.1 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶在肉制品中的應(yīng)用17-19
• 3.2 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶在水產(chǎn)品中的應(yīng)用19
• 3.3 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶在乳制品中的應(yīng)用19
• 3.4 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶在烘焙制品中的應(yīng)用19-20
• 第四節(jié) 工業(yè)微生物育種技術(shù)20-22
• 4.1 自然選育20-21
• 4.2 誘變育種21
• 4.3 基因工程21-22
• 第五節(jié) 本課題的研究目的及意義22-25
• 5.1 立題背景及意義22-23
• 5.2 本課題的研究內(nèi)容23-25
• 第一章 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)菌株的篩選25-37
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料26-27
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法27-28
• 1.3 結(jié)果與討論28-35
• 1.4 本章小結(jié)35-37
• 第二章 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)菌株的菌種鑒定37-49
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料38-39
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法39-42
• 2.3 結(jié)果與討論42-48
• 2.4 本章小結(jié)48-49
• 第三章 易錯(cuò)PCR法誘變谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶編碼基因49-59
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料50
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法50-52
• 3.3 結(jié)果與討論52-56
• 3.4 本章小結(jié)56-59
• 第四章 谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶基因的原核表達(dá)59-71
• 4.1 材料與方法60-62
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法62-64
• 4.3 結(jié)果與討論64-69
• 4.4 本章小結(jié)69-71
• 第五章 產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶菌株發(fā)酵條件優(yōu)化71-83
• 5.1 材料與方法71-72
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法72-74
• 5.3 結(jié)果與討論74-81
• 5.4 本章小結(jié)81-83
• 結(jié)論83-85
• 附錄 茂源鏈霉菌測序結(jié)果85-87
• 參考文獻(xiàn)87-95
• 攻讀學(xué)位期間承擔(dān)的科研任務(wù)與主要成果95-97
• 致謝97-99
• 個(gè)人簡歷99-101

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 丘振宇;潘力;許喜林;;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶生產(chǎn)菌株的誘變選育方案[J];現(xiàn)代食品科技;2006年03期

2 廖祥儒，朱新產(chǎn)，，趙軍;植物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶[J];生命的化學(xué)(中國生物化學(xué)會(huì)通訊);1996年05期

3 祖海珍,陸兆新,陳義華;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶產(chǎn)生菌的篩選和鑒定[J];淮海工學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2001年02期

4 錢鐳;任德財(cái);韓春然;張娜;劉穎;馬永強(qiáng);;聚丙烯膜固定化轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的條件優(yōu)化[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào);2014年01期

5 周楠迪,田亞平,華子安,張雅芬,堵國成,陳堅(jiān);微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的純化方法和酶學(xué)性質(zhì)研究[J];工業(yè)微生物;2004年03期

6 王璋,王灼維,莫湘筠;微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的生產(chǎn)菌種誘變和發(fā)酵生產(chǎn)分析[J];生物加工過程;2003年01期

7 劉曉秋,錢世鈞;醫(yī)學(xué)研究中的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶[J];中國生物工程雜志;2003年11期

8 王坤;楊慧林;王斌;潘力;;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶酶原在大腸桿菌中的重組優(yōu)化表達(dá)[J];食品工業(yè)科技;2012年07期

9 丁克毅;劉軍;Eleanor M.Brown;Maryann M.Taylor;;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(mTG)改性明膠的物理性質(zhì)研究[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào);2006年02期

10 丁克毅;;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶改性明膠高強(qiáng)度薄膜的制備[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào);2007年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 任江紅;秦立虎;;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶及其在乳品加工業(yè)中的應(yīng)用[A];首屆中國奶業(yè)大會(huì)論文集(下冊)[C];2010年

2 韓春然;李可;王強(qiáng);楊楠;馬永強(qiáng);;利用微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶回收大豆乳清廢水[A];2010年中國農(nóng)業(yè)工程學(xué)會(huì)農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨華南地區(qū)農(nóng)產(chǎn)品加工產(chǎn)學(xué)研研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蘇小玫;微生物谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)菌株的篩選和誘變[D];福建師范大學(xué);2015年

2 朱佳蕾;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶等添加劑對(duì)即食臘腸品質(zhì)影響的研究[D];仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院;2014年

3 王亮亮;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的試制與應(yīng)用[D];山東大學(xué);2014年

4 劉心偉;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶在乳蛋白間的交聯(lián)機(jī)理及應(yīng)用研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

5 祖海珍;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶對(duì)大豆分離蛋白和肌原纖維混合蛋白成膠性的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 王強(qiáng);轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的分離純化及膜固定化的研究[D];哈爾濱商業(yè)大學(xué);2011年

7 張華瑩;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶在羊毛生物改性中的應(yīng)用及研究[D];東華大學(xué);2008年

8 姜巍巍;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶對(duì)大豆蛋白表面疏水性及粘度的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 王坤;茂源鏈霉菌轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的異源表達(dá)研究[D];華南理工大學(xué);2013年

10 張宇;轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶基因的克隆表達(dá)及發(fā)酵條件優(yōu)化[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：微生物谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶生產(chǎn)菌株的篩選和誘變，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：331304