天然性抗病毒因子是一種具有抗病毒作用的宿主內(nèi)源性免疫因子,是宿主與病毒周而復(fù)始的斗爭中形成的抵抗病毒侵害的重要方式,在機(jī)體的免疫系統(tǒng)中扮演者重要的角色。研究表明,鋅指蛋白（Zinc-Finger Protein）也是一種天然宿主內(nèi)源性免疫因子,主要分布在動(dòng)植物和微生物中,它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素、干擾素的表達(dá),并直接調(diào)控淋巴細(xì)胞的生長和分化。雞CCCH型鋅指抗病毒蛋白（chZAP）是2002年通過體細(xì)胞克隆的功能基因組的方法篩選得到的宿主抗鼠白血病病毒（MLV）的蛋白因子,在鼠成纖維細(xì)胞中過表達(dá)chZAP能抑制MLV的復(fù)制。chZAP對(duì)引起人和動(dòng)物發(fā)生的烈性病如埃博拉病毒、馬爾堡病毒等有明顯的抑制作用,但對(duì)于皰疹病毒、以及黃熱病毒等并沒有表現(xiàn)出其活躍的抗病毒活性,這表明chZAP不具有廣譜抗病毒特性。盡管如此,關(guān)于其對(duì)禽類病毒的抗病毒活性知之甚少,對(duì)其結(jié)構(gòu)和功能更是有待研究�，F(xiàn)已證明,chZAP是通過降解病毒的mRNA來實(shí)現(xiàn)它的抗病毒作用,并且有研究表明其參與了T細(xì)胞的免疫反應(yīng),但其抗禽病毒譜卻至今未知。本研究通過真核表達(dá)雞chZAP,探究其對(duì)四種禽類經(jīng)典病毒的抗病毒作用,將為開... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

chZAPPCR產(chǎn)物電泳分析

真核表達(dá)的雞CCCH型鋅指抗病毒蛋白抗四種病毒感染研究24圖2重組質(zhì)粒pBacPAK8-chZAP雙酶切鑒定Fig.2IdentificationofpBacPAK8-chZAPrecombinantplasmiddigestedM:DL1000marker1、2:質(zhì)粒pBacPAK8-chZAP雙酶切產(chǎn)物M:DL1000marker1、2:ProductofplasmidpBacPAK8-chZAPrestrictionenzymedigestion3.3真核表達(dá)chZAP3.3.1P1代桿狀病毒的制備將sf9細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代，培養(yǎng)基為Sf-900ⅡSFM加10%FBS，培養(yǎng)條件為27℃，使用ErlenmeyerFlask125mlFlatCap或ErlenmeyerFlask250mlFlatCap培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)。按照說明書將含有目的基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至sf9細(xì)胞，生產(chǎn)P1代桿狀病毒。命名為pBacPAK8-chZAPP1，4℃保存。圖3重組桿狀病毒在Sf9昆蟲細(xì)胞中的增殖Fig.3ProliferationoftherecombinantbaculovirusesinSf9insectcells

真核表達(dá)的雞CCCH型鋅指抗病毒蛋白抗四種病毒感染研究24圖2重組質(zhì)粒pBacPAK8-chZAP雙酶切鑒定Fig.2IdentificationofpBacPAK8-chZAPrecombinantplasmiddigestedM:DL1000marker1、2:質(zhì)粒pBacPAK8-chZAP雙酶切產(chǎn)物M:DL1000marker1、2:ProductofplasmidpBacPAK8-chZAPrestrictionenzymedigestion3.3真核表達(dá)chZAP3.3.1P1代桿狀病毒的制備將sf9細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代，培養(yǎng)基為Sf-900ⅡSFM加10%FBS，培養(yǎng)條件為27℃，使用ErlenmeyerFlask125mlFlatCap或ErlenmeyerFlask250mlFlatCap培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)。按照說明書將含有目的基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至sf9細(xì)胞，生產(chǎn)P1代桿狀病毒。命名為pBacPAK8-chZAPP1，4℃保存。圖3重組桿狀病毒在Sf9昆蟲細(xì)胞中的增殖Fig.3ProliferationoftherecombinantbaculovirusesinSf9insectcells

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞傳染性法氏囊病的綜合防控[J]. 劉麗.  現(xiàn)代畜牧科技. 2020(03)
[2]豬細(xì)小病毒AV30 VP2基因在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)及其免疫原性鑒定[J]. 李茜,代軍飛,丁耀忠,ASHENAFI Kiros Wubshe,李國秀,馬炳,張杰.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2020(07)
[3]新城疫病毒7793 HN蛋白在昆蟲SF9細(xì)胞中的表達(dá)研究[J]. 林宇寧,張磊,梁瑩,樊曉暉.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020(01)
[4]雞馬立克氏病特點(diǎn)及科學(xué)防控[J]. 劉敬旺.  畜禽業(yè). 2020(01)
[5]禽新城疫的防控方案[J]. 趙麗月.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2019(11)
[6]雞新城疫病毒、雞細(xì)小病毒和禽流感病毒三重PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 奉彬,謝芝勛,鄧顯文,張艷芳,謝麗基,謝志勤,范晴,曾婷婷,羅思思,黃嬌玲.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2019(11)
[7]雞馬立克氏病病毒逃逸宿主天然免疫的利器：致瘤蛋白Meq[J]. Li Kai,Liu Yongzhen,Xu Zengkun.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2019(11)
[8]蛋雞馬立克氏病的流行病學(xué)、臨床特征、病理變化和預(yù)防措施[J]. 劉影.  現(xiàn)代畜牧科技. 2019(11)
[9]禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥及防控[J]. 吳偉偉.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2019(08)
[10]水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)、鑒定及免疫原性分析[J]. 齊家龍,高瑞雨,靳輸梅,高福蘭,楊旭,馬雁冰,劉存寶.  中國生物工程雜志. 2019(08)

博士論文
[1]雞CARD11蛋白對(duì)新城疫病毒的抑制作用[D]. 王文彬.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[2]基于轉(zhuǎn)錄組測序探究雞SOCS3蛋白在NDV逃逸宿主天然免疫中的作用機(jī)制[D]. 王相偉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[3]雞馬立克氏病病毒調(diào)控DNA受體信號(hào)通路逃避宿主天然免疫反應(yīng)的分子機(jī)制[D]. 劉永振.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2019
[4]羊口瘡病毒的分離鑒定與B2L和F1L基因在昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)中的表達(dá)及免疫原性分析[D]. 馮平.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018

碩士論文
[1]豬輪狀病毒VP7蛋白在Sf9昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)及應(yīng)用[D]. 黃曉星.揚(yáng)州大學(xué) 2019
[2]禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒誘導(dǎo)宿主天然免疫反應(yīng)及感染法氏囊轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究[D]. 孔正茹.揚(yáng)州大學(xué) 2019
[3]豬繁殖與呼吸綜合征病毒nsp4切割ZAP的機(jī)制研究[D]. 楊玉婷.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[4]禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒對(duì)雛雞局部黏膜免疫的影響[D]. 劉曉靜.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[5]三種鋅指蛋白在NDV、AIV感染中作用的初探[D]. 汪偉.廣西大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3257437