天然性抗病毒因子是一種具有抗病毒作用的宿主內源性免疫因子,是宿主與病毒周而復始的斗爭中形成的抵抗病毒侵害的重要方式,在機體的免疫系統(tǒng)中扮演者重要的角色。研究表明,鋅指蛋白（Zinc-Finger Protein）也是一種天然宿主內源性免疫因子,主要分布在動植物和微生物中,它可以調節(jié)細胞因子如白細胞介素、干擾素的表達,并直接調控淋巴細胞的生長和分化。雞CCCH型鋅指抗病毒蛋白（chZAP）是2002年通過體細胞克隆的功能基因組的方法篩選得到的宿主抗鼠白血病病毒（MLV）的蛋白因子,在鼠成纖維細胞中過表達chZAP能抑制MLV的復制。chZAP對引起人和動物發(fā)生的烈性病如埃博拉病毒、馬爾堡病毒等有明顯的抑制作用,但對于皰疹病毒、以及黃熱病毒等并沒有表現(xiàn)出其活躍的抗病毒活性,這表明chZAP不具有廣譜抗病毒特性。盡管如此,關于其對禽類病毒的抗病毒活性知之甚少,對其結構和功能更是有待研究�，F(xiàn)已證明,chZAP是通過降解病毒的mRNA來實現(xiàn)它的抗病毒作用,并且有研究表明其參與了T細胞的免疫反應,但其抗禽病毒譜卻至今未知。本研究通過真核表達雞chZAP,探究其對四種禽類經典病毒的抗病毒作用,將為開... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

chZAPPCR產物電泳分析

真核表達的雞CCCH型鋅指抗病毒蛋白抗四種病毒感染研究24圖2重組質粒pBacPAK8-chZAP雙酶切鑒定Fig.2IdentificationofpBacPAK8-chZAPrecombinantplasmiddigestedM:DL1000marker1、2:質粒pBacPAK8-chZAP雙酶切產物M:DL1000marker1、2:ProductofplasmidpBacPAK8-chZAPrestrictionenzymedigestion3.3真核表達chZAP3.3.1P1代桿狀病毒的制備將sf9細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代，培養(yǎng)基為Sf-900ⅡSFM加10%FBS，培養(yǎng)條件為27℃，使用ErlenmeyerFlask125mlFlatCap或ErlenmeyerFlask250mlFlatCap培養(yǎng)瓶進行培養(yǎng)。按照說明書將含有目的基因的質粒轉染至sf9細胞，生產P1代桿狀病毒。命名為pBacPAK8-chZAPP1，4℃保存。圖3重組桿狀病毒在Sf9昆蟲細胞中的增殖Fig.3ProliferationoftherecombinantbaculovirusesinSf9insectcells

真核表達的雞CCCH型鋅指抗病毒蛋白抗四種病毒感染研究24圖2重組質粒pBacPAK8-chZAP雙酶切鑒定Fig.2IdentificationofpBacPAK8-chZAPrecombinantplasmiddigestedM:DL1000marker1、2:質粒pBacPAK8-chZAP雙酶切產物M:DL1000marker1、2:ProductofplasmidpBacPAK8-chZAPrestrictionenzymedigestion3.3真核表達chZAP3.3.1P1代桿狀病毒的制備將sf9細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代，培養(yǎng)基為Sf-900ⅡSFM加10%FBS，培養(yǎng)條件為27℃，使用ErlenmeyerFlask125mlFlatCap或ErlenmeyerFlask250mlFlatCap培養(yǎng)瓶進行培養(yǎng)。按照說明書將含有目的基因的質粒轉染至sf9細胞，生產P1代桿狀病毒。命名為pBacPAK8-chZAPP1，4℃保存。圖3重組桿狀病毒在Sf9昆蟲細胞中的增殖Fig.3ProliferationoftherecombinantbaculovirusesinSf9insectcells

【參考文獻】：
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[3]豬繁殖與呼吸綜合征病毒nsp4切割ZAP的機制研究[D]. 楊玉婷.華中農業(yè)大學 2018
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本文編號：3257437