發(fā)布時間：2021-06-23 13:18

　　[目的]UFM修飾是一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾,在細(xì)胞發(fā)育和維持組織動態(tài)平衡都起著至關(guān)重要的作用。課題組通過對C57小鼠的肝臟組織進(jìn)行規(guī)模化的蛋白質(zhì)組學(xué)分析,結(jié)合自制的UFM1抗體,通過高分辨率質(zhì)譜鑒定UFM修飾蛋白和修飾位點(diǎn)。這次規(guī)�；b定內(nèi)源性UFM修飾蛋白的工作為人們研究UFM修飾的功能和機(jī)制提供更多實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法]1.根據(jù)UFM1的特性設(shè)計(jì)UFM1抗體。2.通過IP（免疫沉淀）和WB（免疫印跡）驗(yàn)證自制UFM1抗體的有效性和特異性。3.對C57小鼠的肝臟組織進(jìn)行質(zhì)譜前的處理,包括裂解,酶解和IP（免疫沉淀）。4.對數(shù)據(jù)進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。5.驗(yàn)證UFM修飾蛋白。[結(jié)果]1.自制UFM1抗體較商業(yè)化UFM1抗體相比其特異性和有效性都存在優(yōu)勢。2.通過高分辨率質(zhì)譜總共鑒定到178個UFM修飾蛋白的203個修飾位點(diǎn)。3.數(shù)據(jù)庫中鑒定到RPL26這一個已知的UFM修飾蛋白,修飾位點(diǎn)K132和K134與報(bào)道吻合。4.生物信息學(xué)分析表明UFM修飾不僅僅定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,在線粒體內(nèi)也有大量富集,可能與細(xì)胞代謝中的氧化還原過程存在著很密切的聯(lián)系。5.本課題組根據(jù)UFM修飾蛋白和位點(diǎn)的規(guī)律提出“Exx... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1自制UFM1抗體設(shè)計(jì)思路

第4章實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖4.1.2自制UFM1抗體的有效性驗(yàn)證注：自制UFM1兔多抗（3641和3642）顯示出比商業(yè)化UFM1兔單抗更高的親和力，具有更好的檢測效果。然后，為了驗(yàn)證自制UFM1抗體的特異性，本課題組使用siRNA小分子在293細(xì)胞中敲低人源UFSP2基因，同時使用與人源UFM1序列無同源性的siRNA作為陰性對照，將細(xì)胞裂解后分別使用自制的UFM1兔多抗（3641和3642）和商業(yè)化UFM1兔單抗進(jìn)行免疫印跡檢測UFM化蛋白，本課題組發(fā)現(xiàn)自制UFM1兔多抗（3641和3642）跟商業(yè)化UFM1兔單抗相比，自制UFM1兔多抗（3641和3642）的特異性稍稍好于商業(yè)化UFM1兔單抗，后面課題組會繼續(xù)完善自制UFM1抗體，爭取讓自制UFM1兔多抗（3641和3642）具有更好的特異性（圖4.1.3和4.1.4）。19

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文圖4.1.3商業(yè)化UFM1效果圖圖4.1.3自制UFM1抗體的特異性驗(yàn)證注：自制UFM1兔多抗（3641和3642）的特異性稍好于商業(yè)化UFM1兔單抗。20

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]UFMylation:A Unique & Fashionable Modification for Life[J]. Ying Wei,Xingzhi Xu.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(03)
[2]Mallory-Denk Bodies in chronic hepatitis[J]. Metin Basaranoglu,Nesrin Turhan,Abdullah Sonsuz,Gkcen Basaranoglu.  World Journal of Gastroenterology. 2011(17)
[3]Mallory-Denk body pathogenesis revisited[J]. Samuel W French,Fawzia Bardag-Gorce,Barbara A French,Joan Oliva.  World Journal of Hepatology. 2010(08)



本文編號：3245010