中國鹵蟲（Artemia sinica）又稱鹽水豐年蝦,是一種廣溫耐高鹽的小型甲殼動物。其主要分布在內蒙古和青藏高原的內陸鹽湖中。由于鹵蟲在發(fā)育過程中具有較強的抗逆能力,可以在缺氧、低溫、高鹽、干燥等不良環(huán)境中生存,使其作為極端生物而在生物學實驗中被廣泛應用。海藻糖酶的主要功能是將胞外與胞內的海藻糖水解成葡萄糖,為生物的生命活動提供能量。在體內激素的協(xié)同作用下,調控生物體內海藻糖和葡萄糖等糖類物質的濃度,從而有效的保護生物體內的細胞適應外界的不良環(huán)境。海藻糖對蛋白質、核酸等大分子具有保護作用,對生物具有對抗不良環(huán)境的抗逆保護作用。Trehalose在生物體內主要通過TPS/TPP通道合成,即尿苷二磷酸葡萄糖在海藻糖合成酶的催化作用下與6-磷酸葡萄糖產生6-磷酸海藻糖,通過海藻糖6-磷酸磷酸酯酶的催化作用生成Trehalose。海藻糖酶作為唯一能夠水解海藻糖的酶,已經被證明在真菌孢子萌發(fā),昆蟲滯育結束后以及飛行時表達量增加。鹵蟲在滯育時產生海藻糖并儲存于細胞中。當滯育結束后,在海藻糖酶的作用下將海藻糖水解成葡萄糖。但是對于其在鹵蟲滯育解除中的具體作用及調控機制的研究一直未見報道。因此,本... 

【文章來源】：遼寧師范大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 鹵蟲的分布及生物學特征
    1.2 鹵蟲的滯育
    1.3 海藻糖酶（Trehalase）
    1.4 研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 鹵蟲的孵化與培養(yǎng)
        2.1.2 實驗試劑
            2.1.2.1 總RNA的提取相關試劑（天根生化科技有限司）
            2.1.2.2 cDNA合成試劑（大連寶生物公司）
            2.1.2.3 PCR反應相關試劑（大連寶生物公司）
            2.1.2.4 核酸電泳相關試劑
            2.1.2.5 PCR產物的回收與克隆試劑
            2.1.2.6 Real-Time PCR相關試劑
            2.1.2.7 酶切及表達載體構建相關試劑
            2.1.2.8 蛋白純化試劑
            2.1.2.9 總蛋白提取試劑
        2.1.3 儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 鹵蟲總RNA的獲得
        2.2.2 合成cDNA
        2.2.3 Treahalase基因的擴增
        2.2.4 Trehalase 3’RACE反應
        2.2.6 PCR產物的回收與克隆
            2.2.6.1 PCR產物的回收與純化
            2.2.6.2 載體的連接與純化
            2.2.6.3 陽性克隆的篩選
            2.2.6.4 質粒的提取
        2.2.7 實時熒光定量PCR
        2.2.8 蛋白的原核表達
            2.2.8.1 構建PET表達載體
            2.2.8.2 小量誘導培養(yǎng)
            2.2.8.3 SDS-PAGE電泳
            2.2.8.4 重組蛋白表達及可溶性檢測
        2.2.9 重組蛋白的大量誘導及純化
        2.2.10 的生物信息學及生物統(tǒng)計學分析
3 結果
    3.1 鹵蟲總RNA的提取
    3.2 Treahalase基因序列的獲得
    3.3 Treahalase基因全長序列
    3.4 Trehalase的生物信息學分析
    3.5 Trehalase進化樹構建
    3.6 鹵蟲Trehalase的表達模式
        3.6.1 鹵蟲不同發(fā)育時期Trehalase的表達量
        3.6.2 鹵蟲在不同溫度條件下Trehalase的表達量
        3.6.3 鹵蟲在不同鹽度條件下Trehalase的表達量
    3.7 Trehalase ORF的擴增
    3.8 Trehalase重組蛋白的表達及純化
        3.8.1 Trehalase重組蛋白的誘導表達
        3.8.2 Trehalase重組蛋白的可溶性檢測
        3.8.3 Trehalase重組蛋白的純化
    3.9 蛋白在鹵蟲不同發(fā)育時期的表達
    3.10 酶活性檢測
4.討論
    4.1 中國鹵蟲Trehalase基因全長及進化特征
    4.2 Trehalase不同發(fā)育時期的表達量
    4.3 Trehalase在不同溫度、鹽度下的表達量
    4.4 Trehalase在滯育及滯育解除中的作用
    4.5 Trehalase原核表達重組蛋白與純化
    4.6 在不同溫度下的酶活性
結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]鹵蟲的生殖途徑和影響因素[J]. 鮑鷹,逄少軍.  海洋科學. 2007(02)
[3]鹵蟲的生物學研究[J]. 侯林,鄒向陽,姚鋒.  生物學通報. 2005(07)
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[5]鹵蟲的生物學特征及鑒別休眠卵質量的簡易方法[J]. 趙忠憲.  動物學雜志. 1990(03)



本文編號：3211233