中國鹵蟲（Artemia sinica）又稱鹽水豐年蝦,是一種廣溫耐高鹽的小型甲殼動(dòng)物。其主要分布在內(nèi)蒙古和青藏高原的內(nèi)陸鹽湖中。由于鹵蟲在發(fā)育過程中具有較強(qiáng)的抗逆能力,可以在缺氧、低溫、高鹽、干燥等不良環(huán)境中生存,使其作為極端生物而在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用。海藻糖酶的主要功能是將胞外與胞內(nèi)的海藻糖水解成葡萄糖,為生物的生命活動(dòng)提供能量。在體內(nèi)激素的協(xié)同作用下,調(diào)控生物體內(nèi)海藻糖和葡萄糖等糖類物質(zhì)的濃度,從而有效的保護(hù)生物體內(nèi)的細(xì)胞適應(yīng)外界的不良環(huán)境。海藻糖對蛋白質(zhì)、核酸等大分子具有保護(hù)作用,對生物具有對抗不良環(huán)境的抗逆保護(hù)作用。Trehalose在生物體內(nèi)主要通過TPS/TPP通道合成,即尿苷二磷酸葡萄糖在海藻糖合成酶的催化作用下與6-磷酸葡萄糖產(chǎn)生6-磷酸海藻糖,通過海藻糖6-磷酸磷酸酯酶的催化作用生成Trehalose。海藻糖酶作為唯一能夠水解海藻糖的酶,已經(jīng)被證明在真菌孢子萌發(fā),昆蟲滯育結(jié)束后以及飛行時(shí)表達(dá)量增加。鹵蟲在滯育時(shí)產(chǎn)生海藻糖并儲存于細(xì)胞中。當(dāng)滯育結(jié)束后,在海藻糖酶的作用下將海藻糖水解成葡萄糖。但是對于其在鹵蟲滯育解除中的具體作用及調(diào)控機(jī)制的研究一直未見報(bào)道。因此,本... 

【文章來源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 鹵蟲的分布及生物學(xué)特征
    1.2 鹵蟲的滯育
    1.3 海藻糖酶（Trehalase）
    1.4 研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 鹵蟲的孵化與培養(yǎng)
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.2.1 總RNA的提取相關(guān)試劑（天根生化科技有限司）
            2.1.2.2 cDNA合成試劑（大連寶生物公司）
            2.1.2.3 PCR反應(yīng)相關(guān)試劑（大連寶生物公司）
            2.1.2.4 核酸電泳相關(guān)試劑
            2.1.2.5 PCR產(chǎn)物的回收與克隆試劑
            2.1.2.6 Real-Time PCR相關(guān)試劑
            2.1.2.7 酶切及表達(dá)載體構(gòu)建相關(guān)試劑
            2.1.2.8 蛋白純化試劑
            2.1.2.9 總蛋白提取試劑
        2.1.3 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 鹵蟲總RNA的獲得
        2.2.2 合成cDNA
        2.2.3 Treahalase基因的擴(kuò)增
        2.2.4 Trehalase 3’RACE反應(yīng)
        2.2.6 PCR產(chǎn)物的回收與克隆
            2.2.6.1 PCR產(chǎn)物的回收與純化
            2.2.6.2 載體的連接與純化
            2.2.6.3 陽性克隆的篩選
            2.2.6.4 質(zhì)粒的提取
        2.2.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.8 蛋白的原核表達(dá)
            2.2.8.1 構(gòu)建PET表達(dá)載體
            2.2.8.2 小量誘導(dǎo)培養(yǎng)
            2.2.8.3 SDS-PAGE電泳
            2.2.8.4 重組蛋白表達(dá)及可溶性檢測
        2.2.9 重組蛋白的大量誘導(dǎo)及純化
        2.2.10 的生物信息學(xué)及生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 鹵蟲總RNA的提取
    3.2 Treahalase基因序列的獲得
    3.3 Treahalase基因全長序列
    3.4 Trehalase的生物信息學(xué)分析
    3.5 Trehalase進(jìn)化樹構(gòu)建
    3.6 鹵蟲Trehalase的表達(dá)模式
        3.6.1 鹵蟲不同發(fā)育時(shí)期Trehalase的表達(dá)量
        3.6.2 鹵蟲在不同溫度條件下Trehalase的表達(dá)量
        3.6.3 鹵蟲在不同鹽度條件下Trehalase的表達(dá)量
    3.7 Trehalase ORF的擴(kuò)增
    3.8 Trehalase重組蛋白的表達(dá)及純化
        3.8.1 Trehalase重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.8.2 Trehalase重組蛋白的可溶性檢測
        3.8.3 Trehalase重組蛋白的純化
    3.9 蛋白在鹵蟲不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)
    3.10 酶活性檢測
4.討論
    4.1 中國鹵蟲Trehalase基因全長及進(jìn)化特征
    4.2 Trehalase不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量
    4.3 Trehalase在不同溫度、鹽度下的表達(dá)量
    4.4 Trehalase在滯育及滯育解除中的作用
    4.5 Trehalase原核表達(dá)重組蛋白與純化
    4.6 在不同溫度下的酶活性
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]保濕眼膜對眼周皮膚滋潤作用的評價(jià)[J]. 程艷,董益陽,董美仙,王超,蘇寧,孫遠(yuǎn)濤,劉娟,鄭洪艷,劉瑋.  臨床皮膚科雜志. 2007(03)
[2]鹵蟲的生殖途徑和影響因素[J]. 鮑鷹,逄少軍.  海洋科學(xué). 2007(02)
[3]鹵蟲的生物學(xué)研究[J]. 侯林,鄒向陽,姚鋒.  生物學(xué)通報(bào). 2005(07)
[4]中國鹵蟲生物地理分布的研究[J]. 馬志珍.  現(xiàn)代漁業(yè)信息. 1993(09)
[5]鹵蟲的生物學(xué)特征及鑒別休眠卵質(zhì)量的簡易方法[J]. 趙忠憲.  動(dòng)物學(xué)雜志. 1990(03)



本文編號：3211233