雙生病毒（Geminivirus）是世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生的植物單鏈DNA病毒,并在作物上造成嚴(yán)重的危害。雙生病毒的C4能誘發(fā)產(chǎn)生病毒癥狀。本研究用三種雙生病毒為對象,包括云南番茄曲葉病毒（Tomato leaf curl Yunnan virus,TLCYnV）、中國番茄黃曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl China Virus,TYLCCNV）以及煙草曲莖病毒（Tobacco curly shoot virus,TbCSV）,研究了不同雙生病毒編碼的C4蛋白誘導(dǎo)癥狀差異的分子機制。通過馬鈴薯X病毒（Potato virus X,PVX）異源表達系統(tǒng)表達三種雙生病毒的C4蛋白,證明了不同雙生病毒編碼的C4蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生癥狀有所差異。利用酵母雙雜交技術(shù)以及共表達激光共聚焦技術(shù)證明了C4蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生癥狀的差異與C4蛋白和NbSKη相互作用能力緊密相關(guān),TLCYnV C4與NbSKη互作能力最強并且誘導(dǎo)產(chǎn)生嚴(yán)重癥狀。證實了TLCYnV C4的微型結(jié)構(gòu)域（第28-37位氨基酸）對于C4與NbSKη相互作用至關(guān)重要,將TLCYnV C4的微型結(jié)構(gòu)域替換至TYLCCNV C4和... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 雙生病毒的研究進展
        1.1.1 雙生病毒發(fā)展史
        1.1.2 雙生病毒的危害及其經(jīng)濟重要性
        1.1.3 雙生病毒分類及代表種介紹
            1.1.3.1 雙生病毒分類
            1.1.3.2 云南番茄曲葉病毒
            1.1.3.3 中國番茄黃曲葉病毒
            1.1.3.4 煙草曲莖病毒
    1.2 雙生病毒致病相關(guān)因子及致病機理
        1.2.1 C4/AC4
            1.2.1.1 抑制植物RNA沉默
            1.2.1.2 誘導(dǎo)植物病毒病癥狀
            1.2.1.3 抵抗宿主免疫反應(yīng)
            1.2.1.4 影響細(xì)胞間信號通路
        1.2.2 C2/AC2(L2/AL2)
        1.2.3 βC1
        1.2.4 BV1
        1.2.5 BC1
    1.3 SHAGGY/GSK3-like激酶的研究進展
    1.4 本研究的研究目的及研究意義
2 實驗材料與方法
    2.1 實驗設(shè)備
    2.2 常規(guī)實驗方法
        2.2.1 DNA分子克隆相關(guān)實驗技術(shù)
        2.2.2 PCR產(chǎn)物純化或者割膠酶切回收目的片段
        2.2.3 堿裂解法提取大腸桿菌質(zhì)粒
        2.2.4 限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
        2.2.5 載體去磷酸化
        2.2.6 連接
        2.2.7 同源重組
        2.2.8 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞熱擊轉(zhuǎn)化
        2.2.9 重組DNA分子電擊農(nóng)桿菌
        2.2.10 接種工作
        2.2.11 CTAB法大量提取植物基因組總DNA
        2.2.12 植物小量提取蛋白質(zhì)
        2.2.13 蛋白的SDS-PAGE及 Western-blot雜交
        2.2.14 酵母雙雜交技術(shù)
        2.2.15 原核表達蛋白及純化
3 雙生病毒C4誘導(dǎo)癥狀差異的研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗方法
            3.1.2.1 Renaturedblotoverlayassay
            3.1.2.2 Proteinbindingassay
            3.1.2.3 間接ELISA
            3.1.2.4 亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分離試驗(Subcellular Fractionation Assay)
            3.1.2.5 侵染性克隆的構(gòu)建方法
            3.1.2.6 流式細(xì)胞分析(Flowcytometricanalysis)
            3.1.2.7 地高辛標(biāo)記Southern-blot印跡雜交
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 不同雙生病毒C4誘導(dǎo)癥狀具有差異性
        3.2.2 不同雙生病毒C4 與本氏煙寄主因子NbSKη互作能力不同
        3.2.3 不同雙生病毒C4 對改變NbSKη亞細(xì)胞定位能力不同
        3.2.4 不同雙生病毒C4 蛋白與NbSKη蛋白體外結(jié)合能力不同
        3.2.5 TLCYnVC4第28-37 位氨基酸(Minidomain)是影響C4與NbSKη互作的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域
        3.2.6 TLCYnVC4-Minidomain突變體能夠改變NbSKη的亞細(xì)胞定位
        3.2.7 與NbSKη互作的野生型C4 及重組型C4 突變體具有使NbSKη核定位信號轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜的能力
        3.2.8 PVX表達含有TLCYnVC4-Minidomain的重組型雙生病毒C4加重病毒侵染癥狀
        3.2.9 PVX表達含有TLCYnVC4-Minidomain的重組型雙生病毒C4促進細(xì)胞分裂進程
        3.2.10 含有TLCYnVC4-Minidomain的重組型雙生病毒侵染性克隆增強病毒侵染力
    3.3 討論
4 全文小結(jié)
參考文獻
附錄 A 常用緩沖液及培養(yǎng)基配方
附錄 B 論文中所用術(shù)語縮寫及中英文對照
附錄 C 論文中病毒縮寫及中英文對照


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Science Letters:Expression of a begomoviral DNAβ gene in transgenic Nicotiana plants induced abnormal cell division[J]. 崔曉峰,李云琴,胡東維,周雪平.  Journal of Zhejiang University Science. 2005(02)
[2]Interaction between a Nanovirus-like Component and the Tobacco Curly Shoot Virus/Satellite Complex[J]. Pei-Jun WU Xue-Ping ZHOU~* Institute of Biotechnology Zhejiang University,Hangzhou 310029,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(01)
[3]AC2 and AC4 proteins of Tomato yellow leaf curl China virus and Tobacco curly shoot virus mediate suppression of RNA silencing[J]. CUI Xiaofeng & ZHOU Xueping Institute of Biotechnology,Zhejiang University,Hangzhou 310029,China.  Chinese Science Bulletin. 2004(24)
[4]Identification of a nanovirus-like DNA molecule associated with Tobacco curly shoot virus isolates containing satellite DNA[J]. XIE Yan*, WU Peijun*, TAO Xiaorong and ZHOU Xueping**(Institute of Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China).  Progress in Natural Science. 2004(08)



本文編號：3203589