糖酰胺酶（glycoamidase,EC 3.5.1.52）,全稱為peptide-N-（N-acetyl-β-glucosaminyl）asparagine amidase（PNGase）,水解糖肽或糖蛋白 N-連接糖鏈的 N-乙酰氨基葡萄糖與天冬酰胺殘基之間的酰胺鍵,釋放出完整的寡糖鏈。真核細(xì)胞生物體內(nèi),尤其是在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)周圍廣泛存在PNGase,其具有區(qū)分天然或變性糖蛋白的特性,與蛋白酶復(fù)合體依賴的蛋白降解系統(tǒng)協(xié)同作用,實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞質(zhì)中來自內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成的錯(cuò)誤折疊糖蛋白的去糖基化處理。在已鑒定出的真核生物PNGase同源蛋白中,經(jīng)序列分析顯示存在由Cys,His和Asp組成的催化三聯(lián)體,此催化三聯(lián)體為轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶樣超家族中的成員所共享,其成員表現(xiàn)出不同的生化活性,包括轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶、蛋白酶和PNGase等。所有這些催化活性都涉及酰胺鍵的形成或水解。作為真核PNGase的典型代表,釀酒酵母PNGase（yPnglp）研究最為透徹,研究者對其結(jié)構(gòu)、功能、與其他蛋白關(guān)聯(lián)等進(jìn)行了深入研究,還有研究者進(jìn)行了大腸桿菌重組表達(dá)和包涵體復(fù)性得到具有體外活性的重組yPnglp。同時(shí)有研究者發(fā)現(xiàn)來自于擬南... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 緒論
    1.1 蛋白糖基化簡介
        1.1.1 蛋白N-糖基化過程及結(jié)構(gòu)
        1.1.2 蛋白N-糖鏈的功能
    1.2 蛋白N-糖酰胺酶
        1.2.1 原核生物來源的蛋白N-糖酰胺酶(PNGase F)
        1.2.2 真核生物來源的蛋白N-糖酰胺酶(Png1p)
        1.2.3 酵母蛋白N-糖酰胺酶
    1.3 植物蛋白N-糖酰胺酶研究進(jìn)展
    1.4 本論文的目的和意義
第二章 擬南芥Png1p在大腸桿菌中的可溶性重組表達(dá)與性質(zhì)鑒定
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 菌株和載體
        2.2.2 主要試劑和試劑盒
        2.2.3 主要儀器
        2.2.4 主要培養(yǎng)基和試劑溶液的配置
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 目的基因的獲得
        2.3.2 構(gòu)建篩選大腸桿菌重組表達(dá)載體
        2.3.3 重組蛋白AtPng1p的表達(dá)
        2.3.4 重組蛋白的純化
        2.3.5 蛋白濃度及活性測定
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 重組AtPng1p的可溶性表達(dá),純化及鑒定
        2.4.2 重組AtPng1p的生化性質(zhì)研究
    2.5 討論及小結(jié)
第三章 釀酒酵母及萊茵綠藻Png1p的克隆、重組表達(dá)與活性鑒定
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 菌株和載體
        3.2.2 主要試劑和試劑盒
        3.2.3 主要儀器
        3.2.4 主要培養(yǎng)基和試劑溶液的配置
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 釀酒酵母yPng1p編碼基因的獲得
        3.3.2 萊茵綠藻PNGase編碼基因的獲得
        3.3.3 大腸桿菌重組表達(dá)載體的構(gòu)建及篩選
        3.3.4 重組蛋白表達(dá)
        3.3.5 重組蛋白純化
        3.3.6 蛋白濃度及活性測定
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 萊茵綠藻的培養(yǎng),總RNA提取及RT-PCR
        3.4.2 兩種重組Png1p的可溶性表達(dá)、純化及鑒定
        3.4.3 兩種重組可溶性表達(dá)Png1p的活性鑒定
    3.5 討論及小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
學(xué)位論文評閱及答辯情況表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Influence of Substrate Conformation on the Deglycosylation of Ribonuclease B by Recombinant Yeast Peptide:N-glycanase[J]. Shengjun WANG;Peng George WANG;and Qingsheng QI State Key Laboratory of Microbial Technology,Life Science Schooll,Shandong University,Jinan 250100,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(01)
[2]N-糖酰胺酶F在大腸桿菌中的高效表達(dá)及其脫糖基化作用研究[J]. 蘇移山,王圣鈞,王鵬,祁慶生.  生物工程學(xué)報(bào). 2005(06)



本文編號：3196690