植物的胚胎后發(fā)育取決于分生組織的活性,因此分生組織中細(xì)胞的命運(yùn)對(duì)植物的發(fā)育和株型至關(guān)重要。轉(zhuǎn)錄抑制因子通過(guò)與其他蛋白的互作,從而對(duì)基因的表達(dá)起相應(yīng)的抑制作來(lái)調(diào)節(jié)基因的功能。目前已報(bào)道的植物轉(zhuǎn)錄因子包括擬南芥TOPLESS （TPL）,玉米R(shí)AMOSA1 ENHANCER LOCUS2（REL2）和水稻ABERRANT SPIKELET AND PANICLEI（ASP1）均屬于轉(zhuǎn)錄抑制因子TUP1家族。這類轉(zhuǎn)錄因子能調(diào)控發(fā)育及生理反應(yīng)的多個(gè)方面,如穗、枝梗和小穗等的發(fā)育,同時(shí)對(duì)葉腋分生組織的維持起重要作用。本研究以普通小麥作為研究材料,通過(guò)電子克隆及PCR克隆等方法,分離得到小麥TaASP1基因序列,并對(duì)該基因的表達(dá)模式及功能進(jìn)行了初步的研究,為深入解析該基因在小麥形態(tài)發(fā)育和環(huán)境應(yīng)答等方面的作用奠定基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下：1. 以水稻OsASP1基因（GenBank登錄號(hào)：AK111830）的cDNA序列為模板,Blast檢索NCBI中小麥EST數(shù)據(jù)庫(kù),選取同源性較高的7對(duì)EST序列進(jìn)行拼接,獲得包含完整開放閱讀框（ORF）的3591bp序列；并以該序列為模板設(shè)計(jì)4對(duì)相互重疊特異引... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 分生組織的發(fā)育
    1.2 Groucho(GRO)/TUP1轉(zhuǎn)錄因子
    1.3 TOPLESS亞家族
        1.3.1 擬南芥TOPLESS(TPL)
        1.3.2 玉米R(shí)AMOSA1 ENHANCER LOCUS2(REL2)
        1.3.3 水稻ABERRANT SPIKELETAND PANICLE1(ASP1)
    1.4 立題依據(jù)
2 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 質(zhì)粒載體
        2.1.4 試劑
        2.1.5 培養(yǎng)基
        2.1.6 電泳緩沖液
        2.1.7 PCR引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小麥組織的收集
        2.2.2 小麥總RNA的提取
        2.2.3 小麥cDNA第一鏈的合成
        2.2.4 基因組DNA的提取
        2.2.5 小麥TaASP1的全長(zhǎng)cDNA的擴(kuò)增
        2.2.6 PCR產(chǎn)物末端加“A”
        2.2.7 PCR產(chǎn)物的回收純化
        2.2.8 膠回收產(chǎn)物與TA克隆載體的連接反應(yīng)
        2.2.9 與大腸桿菌的熱激轉(zhuǎn)化
        2.2.10 陽(yáng)性檢測(cè)及測(cè)序
        2.2.11 小麥TaASP1基因組DNA的擴(kuò)增
        2.2.12 生物信息學(xué)分析
        2.2.13 染色體定位分析
        2.2.14 熒光定量
        2.2.15 亞細(xì)胞定位
        2.2.16 TaASP1啟動(dòng)子功能的驗(yàn)證
3 結(jié)果與分析
    3.1 小麥TaASP1的全長(zhǎng)cDNA的PCR擴(kuò)增
    3.2 基因組DNA的克隆和序列分析
    3.3 基因的序列分析
    3.4 小麥TaASP1基因的生物信息學(xué)分析
        3.4.1 小麥TaASP1蛋白的理化性質(zhì)分析
        3.4.2 小麥TaASP1蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        3.4.3 小麥TaASP1基因編碼蛋白的疏親水性分析
        3.4.4 小麥TaASP1基因的同源性分析
    3.5 小麥TaASP1基因的染色體定位分析
    3.6 小麥TaASP1基因的熒光定量PCR分析
    3.7 小麥TaASP1基因的亞細(xì)胞定位
        3.7.1 載體構(gòu)建的過(guò)程
        3.7.2 基因槍轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞
    3.8 小麥TaASP1啟動(dòng)子功能的驗(yàn)證
        3.8.1 載體構(gòu)建的過(guò)程
        3.8.2 轉(zhuǎn)基因煙草的鑒定
4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]EST技術(shù)及其在基因全長(zhǎng)cDNA克隆上的應(yīng)用策略[J]. 何志穎,姚玉成.  國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè). 2002(02)
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博士論文
[1]一個(gè)水稻花發(fā)育突變體的基因克隆及功能分析[D]. 劉堅(jiān).浙江大學(xué) 2013
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[3]植物中2個(gè)DREB類轉(zhuǎn)錄抑制子的功能研究[D]. 董春娟.清華大學(xué) 2010
[4]水稻發(fā)育和農(nóng)藝性狀基因在不同時(shí)空差異表達(dá)的分子剖析[D]. 郭龍彪.浙江大學(xué) 2005
[5]普通小麥Myb和Dof轉(zhuǎn)錄因子家族基因的克隆和表達(dá)研究[D]. 陳榮敏.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]小麥Ramosa基因與穗分枝現(xiàn)象的相關(guān)性研究[D]. 韓攆法.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3190233