脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白是植物中大量存在的一類富含半胱氨酸的小分子堿性脂質(zhì)結(jié)合蛋白,能夠在體外結(jié)合多種疏水分子,據(jù)報道,LTPs可以跨膜轉(zhuǎn)運多種脂類物質(zhì),并且能夠參與生物和非生物脅迫響應(yīng)。我們以TI1068煙草作為轉(zhuǎn)化品系,利用生物信息學(xué)相關(guān)軟件對該基因進(jìn)行一個詳細(xì)的基本特征分析,通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化技術(shù)將NtLTP1轉(zhuǎn)入到TI1068煙草品系中,隨后我們對該基因的功能進(jìn)行探索。結(jié)果如下:1.對轉(zhuǎn)基因煙草植株進(jìn)行PCR檢測、qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn):轉(zhuǎn)基因煙草植株中NtLTP1基因的表達(dá)量得到了不同程度的提高,提高了約1.44².59倍。通過生物信息學(xué)相關(guān)軟件分析發(fā)現(xiàn)NtLTP1基因可以編碼114個氨基酸,其蛋白分子量為11.7309KDa,理論等電點（pI）為9.02,并且該蛋白具有標(biāo)志性的保守區(qū)域ECM以及4個α-螺旋（46.49%）,存在信號肽,是一種疏水性堿性蛋白。2.對野生型煙草和轉(zhuǎn)基因煙草種子進(jìn)行高鹽和干旱脅迫處理,結(jié)果表明,在高鹽和脫水的環(huán)境下,隨著濃度的增加,野生型煙草和轉(zhuǎn)基因煙草的萌發(fā)率均有所降低,但是仍然是轉(zhuǎn)基因煙草的萌發(fā)率高于野生型煙草,且轉(zhuǎn)基因煙草植株的根長較... 

【文章來源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白簡介
    1.2 脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白結(jié)構(gòu)
    1.3 脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白分類
    1.4 植物nsLTPs基因家族研究進(jìn)展
    1.5 脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白功能
        1.5.1 脂類物質(zhì)合成
        1.5.2 生殖器官及種子發(fā)育
        1.5.3 抗生物脅迫
        1.5.4 抗非生物脅迫
        1.5.5 脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白其他功能
    1.6 植物應(yīng)對環(huán)境脅迫的分子機(jī)制
        1.6.1 生物脅迫響應(yīng)機(jī)制
            1.6.1.1 植物固有免疫機(jī)制
            1.6.1.2 植物系統(tǒng)獲得性免疫機(jī)制
        1.6.2 非生物脅迫響應(yīng)機(jī)制
            1.6.2.1 干旱脅迫響應(yīng)機(jī)制
            1.6.2.2 鹽脅迫響應(yīng)機(jī)制
    1.7 本研究的目的意義及研究內(nèi)容
        1.7.1 本實驗的研究目的意義
        1.7.2 本實驗的研究內(nèi)容
第二章 NtLTP1 生物信息學(xué)分析及轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 實驗菌株及質(zhì)粒
        2.1.3 生物信息學(xué)分析所用到相關(guān)網(wǎng)站
        2.1.4 主要試劑及常用儀器
        2.1.5 引物合成
    2.2 實驗方法
        2.2.1 NtLTP1 生物信息學(xué)分析
        2.2.2 煙草植株DNA的提取
        2.2.3 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        2.2.4 煙草植株RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.5 TI1068 煙草NtLTP1 的相對表達(dá)量
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 NtLTP1 蛋白的一級結(jié)構(gòu)及其結(jié)構(gòu)域分析結(jié)果
        2.3.2 NtLTP1 蛋白質(zhì)氨基酸組成及其理化性質(zhì)分析結(jié)果
        2.3.3 NtLTP1 蛋白質(zhì)親疏水性分析結(jié)果
        2.3.4 NtLTP1 蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果
        2.3.5 NtLTP1 蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果
        2.3.6 NtLTP1 蛋白質(zhì)的信號肽分析結(jié)果
        2.3.7 NtLTP1 的磷酸化位點分析結(jié)果
        2.3.8 NtLTP1 的亞細(xì)胞定位分析結(jié)果
        2.3.9 NtLTP1 與其他LTPs氨基酸序列比對結(jié)果
        2.3.10 NtLTP1 基因系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果
        2.3.11 煙草轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
    2.4 討論
第三章 NtLTP1 基因在植物抗逆脅迫方面作用
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 供試植物病菌青枯病菌的分離
        3.1.3 主要試劑及常用儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 野生型和轉(zhuǎn)基因煙草種子高鹽和甘露醇脅迫處理
        3.2.2 煙草葉片抗青枯病實驗
        3.2.3 離體葉片滲透性實驗
            3.2.3.1 煙草葉片甲苯胺藍(lán)染色實驗
            3.2.3.2 煙草葉片測定失水率實驗
            3.2.3.3 離體煙草葉片葉綠素溶出實驗
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 高鹽脅迫對野生型和轉(zhuǎn)基因種子萌發(fā)率和根長影響
        3.3.2 脫水脅迫對野生型和轉(zhuǎn)基因種子萌發(fā)率和根長影響
        3.3.3 煙草葉片抗青枯病菌實驗結(jié)果
        3.3.4 離體葉片滲透性結(jié)果
            3.3.4.1 離體葉片甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果
            3.3.4.2 離體葉片失水率測定結(jié)果
            3.3.4.3 離體葉片葉綠素溶出實驗結(jié)果
    3.4 討論
第四章 NtLTP1 對葉面萜醇類物質(zhì)積累的影響
    4.1 實驗材料
        4.1.1 供試材料
        4.1.2 主要試劑及常用儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 葉面分泌物的提取
        4.2.2 最大吸收峰的確定
        4.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 煙草葉面分泌物最大吸收峰確定在235nm處
        4.3.2 標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液回歸方程的建立及葉面萜醇類物質(zhì)含量的測定
        4.3.3 回歸方程的誤差檢驗
    4.4 討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個人簡歷及聯(lián)系方式



本文編號：3176628