目的:LncPrep+96kb是一種新發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA,有兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本分別為2.2kb和2.8kb,表達(dá)于卵巢顆粒細(xì)胞中,但其在卵巢的功能尚不清楚。本課題將探究lncPrep+96kb 2.2kb在小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的作用和可能的機(jī)制。方法:通過(guò)原位雜交實(shí)驗(yàn),探究lncPrep+96kb在小鼠卵巢的時(shí)空表達(dá)情況。分離培養(yǎng)原代顆粒細(xì)胞,轉(zhuǎn)染lncPrep+96kb 2.2kb過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和敲除質(zhì)粒,CCK-8檢測(cè)lncPrep+96kb 2.2kb對(duì)細(xì)胞增殖的影響;收集培養(yǎng)基,通過(guò)放射免疫法檢測(cè)雌激素分泌量的變化;實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白印跡檢測(cè)芳香化酶的表達(dá)變化。通過(guò)RNA免疫共沉淀法鑒定lncPrep+96kb 2.2kb的特異性結(jié)合蛋白。通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)lncPrep+96kb 2.2kb與特異性結(jié)合蛋白EDF1的結(jié)合位點(diǎn)。突變結(jié)合位點(diǎn),觀察是否可以逆轉(zhuǎn)lncPrep+96kb 2.2kb對(duì)顆粒細(xì)胞雌激素合成及芳香化酶表達(dá)的影響。結(jié)果:原位雜交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)lncPrep+96kb主要表達(dá)于小鼠卵巢初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞中,隨著卵泡發(fā)育,表達(dá)減少。LncPrep+96kb 2... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 卵巢卵泡發(fā)育過(guò)程
    1.2 雌激素的合成與調(diào)控
    1.3 LncRNA在卵巢的研究
第2章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 試劑調(diào)配
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 原位雜交
        2.2.2 CRISPER/cas9 基因敲除質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.3 過(guò)表達(dá)載體及突變質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.4 原代顆粒細(xì)胞分離培養(yǎng)
        2.2.5 中抽質(zhì)粒
        2.2.6 原代顆粒細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.7 細(xì)胞活力檢測(cè)
        2.2.8 激素檢測(cè)
        2.2.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.10 蛋白印跡
        2.2.11 免疫共沉淀
        2.2.12 細(xì)胞免疫熒光
        2.2.13 數(shù)據(jù)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 LncPrep+96kb在小鼠卵巢時(shí)空特異性表達(dá)
    3.2 LncPrep+96kb對(duì)顆粒細(xì)胞增殖無(wú)影響
    3.3 LncPrep+96kb2.2kb減少了雌激素的合成并抑制芳香化酶的表達(dá)
    3.4 LncPrep+96kb 2.2kb與EDF1 結(jié)合并誘導(dǎo) EDF1 易位
    3.5 干擾EDF1 下調(diào)了芳香化酶的表達(dá)和抑制了雌激素的分泌
    3.6 LncPrep+96kb的1979-2077 位點(diǎn)是EDF1 的主要結(jié)合位點(diǎn)
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 進(jìn)一步工作的方向
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脯氨酰寡肽酶對(duì)顆粒細(xì)胞孕酮合成的影響[J]. 張亞瓊,李嘉恒,王藝舒,匡渤海,張春平.  南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版). 2017(05)
[2]轉(zhuǎn)錄因子EB與帕金森病[J]. 郝新梅,李玉娟.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2017(03)



本文編號(hào)：3159145