目的:LncPrep+96kb是一種新發(fā)現(xiàn)的長鏈非編碼RNA,有兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本分別為2.2kb和2.8kb,表達(dá)于卵巢顆粒細(xì)胞中,但其在卵巢的功能尚不清楚。本課題將探究lncPrep+96kb 2.2kb在小鼠卵巢顆粒細(xì)胞的作用和可能的機(jī)制。方法:通過原位雜交實(shí)驗(yàn),探究lncPrep+96kb在小鼠卵巢的時(shí)空表達(dá)情況。分離培養(yǎng)原代顆粒細(xì)胞,轉(zhuǎn)染lncPrep+96kb 2.2kb過表達(dá)質(zhì)粒和敲除質(zhì)粒,CCK-8檢測(cè)lncPrep+96kb 2.2kb對(duì)細(xì)胞增殖的影響;收集培養(yǎng)基,通過放射免疫法檢測(cè)雌激素分泌量的變化;實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白印跡檢測(cè)芳香化酶的表達(dá)變化。通過RNA免疫共沉淀法鑒定lncPrep+96kb 2.2kb的特異性結(jié)合蛋白。通過生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)lncPrep+96kb 2.2kb與特異性結(jié)合蛋白EDF1的結(jié)合位點(diǎn)。突變結(jié)合位點(diǎn),觀察是否可以逆轉(zhuǎn)lncPrep+96kb 2.2kb對(duì)顆粒細(xì)胞雌激素合成及芳香化酶表達(dá)的影響。結(jié)果:原位雜交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)lncPrep+96kb主要表達(dá)于小鼠卵巢初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞中,隨著卵泡發(fā)育,表達(dá)減少。LncPrep+96kb 2... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 卵巢卵泡發(fā)育過程
    1.2 雌激素的合成與調(diào)控
    1.3 LncRNA在卵巢的研究
第2章 材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 試劑調(diào)配
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 原位雜交
        2.2.2 CRISPER/cas9 基因敲除質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.3 過表達(dá)載體及突變質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.4 原代顆粒細(xì)胞分離培養(yǎng)
        2.2.5 中抽質(zhì)粒
        2.2.6 原代顆粒細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.7 細(xì)胞活力檢測(cè)
        2.2.8 激素檢測(cè)
        2.2.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.10 蛋白印跡
        2.2.11 免疫共沉淀
        2.2.12 細(xì)胞免疫熒光
        2.2.13 數(shù)據(jù)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 LncPrep+96kb在小鼠卵巢時(shí)空特異性表達(dá)
    3.2 LncPrep+96kb對(duì)顆粒細(xì)胞增殖無影響
    3.3 LncPrep+96kb2.2kb減少了雌激素的合成并抑制芳香化酶的表達(dá)
    3.4 LncPrep+96kb 2.2kb與EDF1 結(jié)合并誘導(dǎo) EDF1 易位
    3.5 干擾EDF1 下調(diào)了芳香化酶的表達(dá)和抑制了雌激素的分泌
    3.6 LncPrep+96kb的1979-2077 位點(diǎn)是EDF1 的主要結(jié)合位點(diǎn)
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 進(jìn)一步工作的方向
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脯氨酰寡肽酶對(duì)顆粒細(xì)胞孕酮合成的影響[J]. 張亞瓊,李嘉恒,王藝舒,匡渤海,張春平.  南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版). 2017(05)
[2]轉(zhuǎn)錄因子EB與帕金森病[J]. 郝新梅,李玉娟.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2017(03)



本文編號(hào)：3159145