低溫是限制林木、農作物分布及生長發(fā)育的主要因素,氣溫驟降對林木的損害巨大,造成極大的經濟損失。連翹（Forsythia）聲為木犀科連翹屬植物為落葉灌木,連翹主要分為東北連翹（Forsythiamandshurica）和金鐘連翹（Forsythia suspense）。高等植物質膜中脂肪酸不飽和度和冷敏感關系密切。甘油-3-磷酸酰基轉移酶（GPAT）是磷脂酰甘油（Phosph-atidglglycerol,PG）生物合成過程中的第一個�；セ�,直接決定植物膜PG的不飽和度。在抗冷植物中,GPAT優(yōu)先選擇18:1作為底物;在冷敏感植物中,GPAT優(yōu)先選擇16:0作為底物。由此導致二者生物膜的飽和度及其在低溫下的流動性不同,進而影響其耐冷性。本研究以連翹屬的兩個材料,金鐘連翹和東北連翹為研究材料。主要研究成果如下:（1）克隆了連翹屬GPAT基因,分別命名為FsGPAT和FmGPAT。序列分析表明兩個基因序列長度均為1347bp,編碼448個氨基酸。連翹屬GPAT基因具有GPAT基因家族的保守結構域GPAT_N結構域與LPLAT結構域。（2）連翹屬GPAT與擬南芥10個G... 

【文章來源】：沈陽農業(yè)大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1.1 低溫脅迫
    1.2 植物膜質與植物抗逆
    1.3 植物耐寒基因研究進展
    1.4 GPAT研究進展
    1.5 連翹研究進展
第二章 連翹屬GPAT基因克隆與序列分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 質粒與菌株
        2.1.3 酶與其他試劑
        2.1.4 溶液和培養(yǎng)基配制
        2.1.5 儀器及生物學軟件
    2.2 試驗方法
        2.2.1 連翹屬總RNA的提取
        2.2.2 反轉錄合成第一鏈cDNA
        2.2.3 金鐘連翹FsGPAT基因5'端克隆
        2.2.4 連翹屬GPAT基因全長克隆
    2.3 結果與分析
        2.3.1 連翹屬GPAT基因克隆
        2.3.2 連翹屬GPAT基因序列分析
        2.3.3 GPATN端結構域
        2.3.4 LPLAT結構域
        2.3.5 連翹GPAT蛋白亞細胞定位預測
        2.3.6 連翹GPAT蛋白質膜定位預測
        2.3.7 連翹GPAT蛋白結構預測
        2.3.8 同源性比對分析
    2.4 小結
第三章 FsGPAT基因載體構建及遺傳轉化
    3.1 材料
        3.1.1 菌種和載體
        3.1.2 酶和試劑
        3.1.3 溶液和培養(yǎng)基配制
        3.1.4 實驗儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 pCAMBIA-FsGPAT真核表達載體構建
        3.2.2 pCAMBIA1302-F sGPAT重組質粒轉化農桿菌LBA4404
        3.2.3 轉FsGPAT基因農桿菌侵染煙草
        3.2.4 轉FsGPAT基因煙草檢測
    3.3 結果與分析
        3.3.1 pCAMBIA1302-FsGPAT重組質粒
        3.3.2 轉FsGPAT基因轉農桿菌
        3.3.3 轉FsGPAT基因農桿菌PCR檢測
        3.3.4 轉FsGPAT基因煙草檢測
    3.4 小結
第四章 連翹屬GPAT表達量分析
    4.1 qPCR法分析連翹中GPAT相對表達量變化
        4.1.1 試驗方法
        4.1.2 結果分析
    4.2 酶聯(lián)免疫吸附法分析連翹中GPAT含量變化
        4.2.1 植物材料
        4.2.2 其他試劑
        4.2.3 實驗儀器
        4.2.4 試驗方法
        4.2.5 結果分析
    4.3 小結
第五章 結論
參考文獻
致謝
攻讀學位論文期間發(fā)表文章


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3147742