雞白痢沙門菌（Salmonella pullorum）是一種常見的禽類病原菌,可引起雛雞關(guān)節(jié)炎、腹瀉和食欲不振等一些急性系統(tǒng)性疾病,可以通過雞胚垂直傳播,還會通過糞便和飲用水經(jīng)消化道和呼吸道水平傳播。感染雞白痢沙門菌會導(dǎo)致雞的生產(chǎn)性能下降,明顯降低種蛋孵化率,或引起雞群的大規(guī)模發(fā)病和死亡,嚴(yán)重影響畜禽健康,造成重大經(jīng)濟損失。沙門菌是我國農(nóng)業(yè)部要求重點監(jiān)測的14種動物疫病病原菌之一,所有種畜禽場必須凈化。而且在食品安全方面,所有涉及的食品現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中,均不得檢出沙門菌,這也使沙門菌的凈化不僅僅涉及畜禽養(yǎng)殖行業(yè),更關(guān)乎食品安全和公共衛(wèi)生安全。近年來由于抗生素的濫用,雞白痢沙門菌已經(jīng)對多種抗生素產(chǎn)生耐藥性,日益成為影響家禽養(yǎng)殖業(yè)和公共衛(wèi)生安全的重要病原菌,嚴(yán)重制約養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展,影響公共衛(wèi)生安全。噬菌體作為一類能特異性識別裂解病原微生物的一種病毒,可利用其宿主特異性對特定微生物進行檢測。尾絲蛋白是噬菌體特異性識別宿主的物質(zhì)基礎(chǔ),篩選表達(dá)出噬菌體的尾絲蛋白在特定微生物檢測凈化等方面具有重要意義。本實驗對噬菌體YSP2進行純化濃縮后,使用蛋白質(zhì)多肽分子鑒定技術(shù)對其進行全蛋白質(zhì)譜分析,結(jié)果得到52個蛋... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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密度梯度離心后的噬菌體YSP2Fig.1-1BacteriophageYSP2afterdensitygradientcentrifugation

第二篇研究內(nèi)容第一章噬菌體YSP2的總蛋白質(zhì)譜分析及尾絲蛋白分析19菌屬的噬菌體具有極大相似性；而Chaperonin只與氨基酸數(shù)據(jù)庫中的噬纖維菌屬噬菌體具有相似性；Galactose-1-phosphateuridylyltransferase的確定則來自數(shù)據(jù)庫中的乳酸菌噬菌體。圖1-2噬菌體YSP2蛋白質(zhì)譜基峰Fig.1-2BasepeakofphageYSP2proteinspectrum

第二篇研究內(nèi)容第一章噬菌體YSP2的總蛋白質(zhì)譜分析及尾絲蛋白分析201.3.3尾絲蛋白氨基酸比對分析實驗前期根據(jù)噬菌體全基因測序結(jié)果，擴增ORF35、ORF44兩段假定尾絲蛋白基因，構(gòu)建原核表達(dá)載體，并驗證成功后構(gòu)建重組表達(dá)菌株，ORF35、ORF44理論擴增片段大小分別為2409bp、3777bp，電泳結(jié)果如圖1-3所示，條帶大小符合預(yù)期；之后經(jīng)過連接轉(zhuǎn)化后用BamHI、XhoⅠ酶切鑒定、PCR擴增驗證，酶切理論片段大小約為5329bp和2409bp、3777bp，酶切驗證電泳結(jié)果如圖1-4所示，PCR擴增驗證結(jié)果如圖1-5所示，條帶大小符合預(yù)期。但是在探究蛋白表達(dá)條件的實驗中一直沒能成功表達(dá)尾絲蛋白，在對基因片段進一步分析后，對比數(shù)據(jù)庫中相應(yīng)的氨基酸的功能，選擇了長度為1503bp的ORF35的截短片段35Q（圖1-6），并進行后續(xù)實驗。通過比對分析可知，35q可能為噬菌體YSP2的尾絲蛋白基因序列，該尾絲蛋白含有500個氨基酸，大約為55KDa。35Q與沙門菌噬菌體phaSE-2尾絲蛋白，沙門菌噬菌體vB_SenS_PHB07尾絲蛋白和檸檬酸桿菌噬菌體CF1DK-2017尾絲蛋白的同源性分別為83.40%，61.20%和60.40%（見圖1-7）。圖1-3ORF35、ORF44PCR擴增結(jié)果Fig.1-3ORF35,ORF44PCRamplificationproducts1：ORF35PCR擴增產(chǎn)物；2：ORF44PCR擴增產(chǎn)物；M：DL5000DNAmarker

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]利用蛋白質(zhì)組技術(shù)快速鑒定噬菌體結(jié)構(gòu)蛋白[J]. 趙飛揚,邢少貞,孫強,裴廣倩,米志強,安小平,童貽剛,任慧英.  中國抗生素雜志. 2017(09)
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碩士論文
[1]雞白痢沙門菌噬菌體裂解酶LySP2在畢赤酵母中的表達(dá)及其初步應(yīng)用[D]. 張楸楊.吉林大學(xué) 2018
[2]雞白痢沙門菌噬菌體的分離鑒定及其初步應(yīng)用[D]. 袁玉玉.吉林大學(xué) 2016



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