鐵皮石斛（Dendrobium offcinale Kimura et Migo）是蘭科石斛屬多年生草本植物,具有重要的藥用和觀賞價值,其種子發(fā)育成熟時,種胚仍舊停留在未分化的球形胚階段,種子萌發(fā)后通過原球莖發(fā)育途徑形成完整植株。其形態(tài)發(fā)生過程歷經(jīng)種胚活化以及原球莖的形成、成熟與退化等時期,總體上可以分為8個不同發(fā)育時期:種胚活化突破種皮、原球莖形成、原分生組織形成、頂端分生組織形成、橢球形原球莖、葉原基維管系統(tǒng)形成、根端分生組織形成、原球莖退化和苗的形成。對各時期原球莖核酸含量分析表明,前5個時期單個原球莖中核酸含量逐步上升,橢球形原球莖之后核酸含量大幅上升。內(nèi)參基因的運(yùn)用對于基因表達(dá)分析具有重要影響,本研究基于原球莖時期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報道,篩選了 26個表達(dá)最穩(wěn)定的基因和5個常用的管家基因作為測試基因。對測試基因表達(dá)穩(wěn)定性進(jìn)行初步評價分析,進(jìn)一步篩選出其中的19個基因作為候選內(nèi)參基因,并采用geNorm、NormFinder、BestKeeper 和 RefFinder 方法對候選內(nèi)參基因進(jìn)行表達(dá)穩(wěn)定性評價。結(jié)果表明傳統(tǒng)的管家基因在所有樣本中表達(dá)穩(wěn)定性較差,而基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的新型... 

【文章來源】：西南交通大學(xué)四川省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 植物種胚發(fā)生概述
        1.1.1 蘭科植物的種胚發(fā)育特征
        1.1.2 鐵皮石斛原球莖形態(tài)發(fā)生
    1.2 內(nèi)參基因
        1.2.1 內(nèi)參基因概念
        1.2.2 傳統(tǒng)內(nèi)參基因
        1.2.3 新型內(nèi)參基因
        1.2.4 內(nèi)參基因篩選及穩(wěn)定性評價方法
    1.3 LEA基因
        1.3.1 LEA基因發(fā)現(xiàn)起源
        1.3.2 LEA基因種類及特征
        1.3.3 LEA在物種進(jìn)化中的關(guān)系
        1.3.4 LEA的生物學(xué)功能
    1.4 本論文研究意義
第2章 鐵皮石斛原球莖形態(tài)發(fā)生
    2.1 材料與方法
        2.1.1 培養(yǎng)基的配置及接種
        2.1.2 掃描電鏡樣品制備
        2.1.3 原球莖不同時期材料的收集
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 原球莖不同發(fā)育時期形態(tài)特征
        2.2.2 種子及原球莖掃描電鏡觀察
        2.2.3 原球莖不同發(fā)育時期核酸含量分析
    2.3 討論
第3章 鐵皮石斛原球莖時期內(nèi)參基因的篩選及評價
    3.1 材料與方法
        3.1.1 植物材料的選取及處理
        3.1.2 總RNA的提取及cDNA合成
        3.1.3 測試內(nèi)參基因的選取及克隆
        3.1.4 RT-qPCR引物設(shè)計及擴(kuò)增
        3.1.5 內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性評價及最適內(nèi)參基因數(shù)目的選取
        3.1.6 原球莖發(fā)育階段和溫度脅迫下最穩(wěn)定內(nèi)參基因的驗(yàn)證
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 內(nèi)參基因的克隆
        3.2.2 引物擴(kuò)增特異性及擴(kuò)增效率
        3.2.3 候選內(nèi)參基因的選取及表達(dá)譜分析
        3.2.4 候選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性評價
        3.2.5 最合適內(nèi)參基因的選取
        3.2.6 傳統(tǒng)管家基因表達(dá)穩(wěn)定性驗(yàn)證
        3.2.7 原球莖發(fā)育階段和溫度脅迫下最優(yōu)內(nèi)參基因的驗(yàn)證
    3.3 討論
第4章 鐵皮石斛全基因組LEA基因的鑒定及分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 植物材料處理
        4.1.2 鐵皮石斛基因組數(shù)據(jù)的獲取及本地數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建
        4.1.3 模式物種LEA家族成員的獲取及本地blast比對
        4.1.4 HMMER鑒定LEA家族成員基因
        4.1.5 LEA結(jié)構(gòu)域、基因結(jié)構(gòu)及生化特征分析
        4.1.6 LEA定量PCR引物設(shè)計
        4.1.7 LEA定量PCR擴(kuò)增
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 鐵皮石斛RNA提取及cDNA合成
        4.2.2 LEA家族成員的鑒定與分類
        4.2.3 LEA基因結(jié)構(gòu)和蛋白基序特征分析
        4.2.4 LEA蛋白序列生化特征分析
        4.2.5 LEA RT-qPCR引物特異性驗(yàn)證
        4.2.6 LEA基因原球莖中表達(dá)模式分析
        4.2.7 LEA基因的脅迫響應(yīng)表達(dá)模式分析
    4.3 討論
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
附錄3
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]LEA蛋白及其在植物抗逆改良中的應(yīng)用[J]. 王艷蓉,張治國,吳金霞.  生物技術(shù)通報. 2015(03)
[2]蓖麻LEA基因家族的全基因組鑒定、分類及其進(jìn)化分析[J]. 鄒智,黃啟星,安鋒.  中國油料作物學(xué)報. 2013(06)
[3]實(shí)時熒光定量PCR分析中毛果楊內(nèi)參基因的篩選和驗(yàn)證[J]. 蘇曉娟,樊保國,袁麗釵,崔秀娜,盧善發(fā).  植物學(xué)報. 2013(05)
[4]LEA蛋白研究進(jìn)展[J]. 白永琴,楊青川.  生物技術(shù)通報. 2009(09)
[5]植物胚胎發(fā)育時期特異蛋白的研究進(jìn)展[J]. 梁文裕,陳偉,呂柳新.  福建農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2003(01)

碩士論文
[1]鐵皮石斛原球莖形態(tài)發(fā)生和NAC家族的生物信息學(xué)分析[D]. 鄒嘉欣.西南交通大學(xué) 2014
[2]石蒜離體再生體系優(yōu)化及花器官愈傷組織誘導(dǎo)初探[D]. 陳菁玨.浙江大學(xué) 2012



本文編號：3118690