CH25H基因在BPIV3復制中的作用及其機制的研究
發(fā)布時間：2021-04-01 04:27
牛副流行性感冒（Bovine parainfluenza）簡稱牛副流感,是由牛副流感病毒3型（Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3）引起的一種急性、接觸性的呼吸道傳染病,主要感染牛的呼吸器官,使得機體的免疫功能下降。該病傳播迅速,發(fā)病率高,病牛多表現(xiàn)為食欲不振、流涕、咳嗽、發(fā)熱和呼吸困難等臨床癥狀;也可與其他病毒混合感染,導致牛呼吸道疾病綜合征（Bovine respiratory disease complex,BRDC）,致使患病動物死亡率大大增加,嚴重威脅著世界養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展。針對該病,奶業(yè)發(fā)達國家目前主要以滅活疫苗和減毒疫苗免疫接種預(yù)防,而我國相關(guān)疫苗與診斷試劑的研發(fā)相對滯后,對該病尚無針對性的防治措施。因此,以我國主要流行株為研究對象,深入研究BPIV3的致病機制,篩選藥物靶標,將為加快研制有效的抗病毒藥物與疫苗提供理論基礎(chǔ)。膽固醇-25-羥化酶（Cholesterol-25-hydroxylase,CH25H）是一種大小為31.6kDa的多跨膜內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（Endoplasmic reticulum,ER）相關(guān)酶,其主要功能是以O(shè)...
【文章來源】：山東師范大學山東省
【文章頁數(shù)】：92 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
BPIV3基因組示意圖
山東師范大學碩士學位論文4圖1-2副流感病毒粒子示意圖[37]Fig.1-2Aschematicdiagramoftheparainfluenzavirion1.1.3BPIV3的理化性質(zhì)1.1.3.1形態(tài)及培養(yǎng)特性BPIV3病毒粒子呈現(xiàn)多形性，一般呈圓形或卵圓形，直徑為150~250nm，有時呈現(xiàn)更大的畸形粒子或長達數(shù)微米的纖絲狀粒子。病毒粒子的核衣殼卷曲于脂質(zhì)囊膜內(nèi)，呈螺旋對稱，螺旋數(shù)目有200~220個，直徑為14~18nm，呈左旋方向。病毒粒子核衣殼外由囊膜包裹，囊膜上有纖突（囊膜突起），直徑為8~10nm[38,39]。BPIV3能夠在雞胚以及培養(yǎng)的細胞中增殖，與其它副流感病毒不同的是，接種羊膜腔時生長良好，接種尿囊腔時不能生長。在牛、羊、馬、豬和駱駝的腎細胞培養(yǎng)物中形成不同形狀和大小的嗜酸性胞漿內(nèi)包涵體以及合胞體，并且每個包涵體外周均圍有一層透明帶[40]。1.1.3.2生化特性BPIV3對多種化學試劑和溫度比較敏感[20,29]。病毒和氯仿1:1混合室溫處理10min可使得病毒完全滅活；在4℃條件下用20%的乙醚處理病毒16h可使其滅活。-80℃條件下病毒能夠存活數(shù)年；病毒在55℃的條件下30min會完全滅活；在50℃的條件下處理30min可使得病毒的神經(jīng)氨酸酶活性和感染性大幅降低。
山東師范大學碩士學位論文7目前在多種哺乳類、魚類、鳥類上已經(jīng)克隆出CH25H基因。我們對哺乳類、鳥類等物種中代表動物的CH25H進行分子遺傳進化樹分析發(fā)現(xiàn)，不同哺乳動物之間具有種屬差異性，哺乳類與禽類各聚為一簇，斑馬魚與吐緩雞、綠頭鴨等禽類CH25H基因的序列相似性高達99%，哺乳動物中人與牛、羊等反芻動物CH25H基因的同源性比小鼠的高（圖1-3）。圖1-3不同物種CH25H基因進化樹分析Fig.1-3PhylogenetictreeanalysisofCH25Hgeneofdifferentspecies大多數(shù)脊椎動物的CH25H由270~274個氨基酸殘基組成，以人源CH25H基因為例，全長包括272個氨基酸殘基（aa1~272），主要分為2個結(jié)構(gòu)域：跨膜（Transmembrane，TM）結(jié)構(gòu)域（aa1~135）和FA（FAase）結(jié)構(gòu)域（aa136~272），F(xiàn)A結(jié)構(gòu)域包含3個組氨酸殘基簇：(142-Trp-His-Leu/Val-Leu-Val-His-His-148)、(157-Phe/Ile-His-Lys-Val/Met/Leu-His-His-162)、(238-His-His-Asp-Leu/Met-His-His-244)，而242、243位的組氨酸密碼子對CH25H的酶催化活性和羥基化反應(yīng)是必不可少的[52,57]。CH25HN端位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外，而3個活性位點組氨酸殘基簇位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)，表明CH25H是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)發(fā)揮其催化酶的催化作用[58]。1.2.2CH25H在脂肪代謝通路中的作用在脂肪代謝通路中CH25H主要是通過其羥基化作用催化膽固醇產(chǎn)生膽固醇
【參考文獻】：
期刊論文
[1]牛副流感病毒3型感染MDBK細胞后影響天然免疫基因表達的篩選與驗證[J]. 趙貴民,呂麗霞,王洪梅,喬軍,夏咸柱,何洪彬. 動物醫(yī)學進展. 2019(02)
[2]牛副流感病毒3型實驗室檢測方法研究進展[J]. 莊金秋,梅建國,張穎,莫玲,劉吉山. 中國奶牛. 2018(04)
[3]干擾素刺激基因的抗病毒機制[J]. 白思宇,楊倩,仇華吉. 微生物學報. 2018(03)
[4]牛副流感病毒3型（BPIV3）P蛋白磷酸化位點與功能性結(jié)構(gòu)域分析[J]. 趙貴民,侯佩莉,賈春濤,王洪梅,何洪彬. 中國獸醫(yī)學報. 2017(02)
[5]牛副流感的流行、危害及其防控[J]. 朱遠茂,馬磊,楊婷,宋文鳳,薛飛. 中國預(yù)防獸醫(yī)學報. 2016(08)
[6]我國牛副流感病毒3型血清學調(diào)查[J]. 王海勇,童欽,王煒,武華. 中國預(yù)防獸醫(yī)學報. 2014(02)
[7]牛副流行性感冒的流行與診斷[J]. 王英,侯寶香,張俊嬙. 養(yǎng)殖技術(shù)顧問. 2014(02)
[8]流行性感冒病毒[J]. 張愛君. 中國地方病防治雜志. 2009(03)
[9]共表達口蹄疫病毒衣殼前體蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛腎細胞株的篩選及穩(wěn)定性[J]. 李炯,劉艷紅,劉湘濤,尚佑軍,劉俊林,安芳蘭,殷宏. 微生物學報. 2008(11)
[10]副流感病毒核衣殼蛋白的基因克隆、原核表達與多克隆抗體制備[J]. 林斌,田新貴,唐啟慧,王長兵,游愛萍,周榮. 熱帶醫(yī)學雜志. 2008(04)
博士論文
[1]牛腺病毒3型和牛副流感病毒3型對實驗動物致病性的研究[D]. 史鴻飛.中國農(nóng)業(yè)科學院 2014
碩士論文
[1]牛副流感病毒3型C和V蛋白通過負調(diào)控IRF7拮抗Ⅰ型干擾素表達的研究[D]. 劉瑩.東北農(nóng)業(yè)大學 2017
[2]牛副流感病毒3型NM09株反向遺傳系統(tǒng)的建立[D]. 師新川.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012
本文編號：3112660
【文章來源】：山東師范大學山東省
【文章頁數(shù)】：92 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
BPIV3基因組示意圖
山東師范大學碩士學位論文4圖1-2副流感病毒粒子示意圖[37]Fig.1-2Aschematicdiagramoftheparainfluenzavirion1.1.3BPIV3的理化性質(zhì)1.1.3.1形態(tài)及培養(yǎng)特性BPIV3病毒粒子呈現(xiàn)多形性，一般呈圓形或卵圓形，直徑為150~250nm，有時呈現(xiàn)更大的畸形粒子或長達數(shù)微米的纖絲狀粒子。病毒粒子的核衣殼卷曲于脂質(zhì)囊膜內(nèi)，呈螺旋對稱，螺旋數(shù)目有200~220個，直徑為14~18nm，呈左旋方向。病毒粒子核衣殼外由囊膜包裹，囊膜上有纖突（囊膜突起），直徑為8~10nm[38,39]。BPIV3能夠在雞胚以及培養(yǎng)的細胞中增殖，與其它副流感病毒不同的是，接種羊膜腔時生長良好，接種尿囊腔時不能生長。在牛、羊、馬、豬和駱駝的腎細胞培養(yǎng)物中形成不同形狀和大小的嗜酸性胞漿內(nèi)包涵體以及合胞體，并且每個包涵體外周均圍有一層透明帶[40]。1.1.3.2生化特性BPIV3對多種化學試劑和溫度比較敏感[20,29]。病毒和氯仿1:1混合室溫處理10min可使得病毒完全滅活；在4℃條件下用20%的乙醚處理病毒16h可使其滅活。-80℃條件下病毒能夠存活數(shù)年；病毒在55℃的條件下30min會完全滅活；在50℃的條件下處理30min可使得病毒的神經(jīng)氨酸酶活性和感染性大幅降低。
山東師范大學碩士學位論文7目前在多種哺乳類、魚類、鳥類上已經(jīng)克隆出CH25H基因。我們對哺乳類、鳥類等物種中代表動物的CH25H進行分子遺傳進化樹分析發(fā)現(xiàn)，不同哺乳動物之間具有種屬差異性，哺乳類與禽類各聚為一簇，斑馬魚與吐緩雞、綠頭鴨等禽類CH25H基因的序列相似性高達99%，哺乳動物中人與牛、羊等反芻動物CH25H基因的同源性比小鼠的高（圖1-3）。圖1-3不同物種CH25H基因進化樹分析Fig.1-3PhylogenetictreeanalysisofCH25Hgeneofdifferentspecies大多數(shù)脊椎動物的CH25H由270~274個氨基酸殘基組成，以人源CH25H基因為例，全長包括272個氨基酸殘基（aa1~272），主要分為2個結(jié)構(gòu)域：跨膜（Transmembrane，TM）結(jié)構(gòu)域（aa1~135）和FA（FAase）結(jié)構(gòu)域（aa136~272），F(xiàn)A結(jié)構(gòu)域包含3個組氨酸殘基簇：(142-Trp-His-Leu/Val-Leu-Val-His-His-148)、(157-Phe/Ile-His-Lys-Val/Met/Leu-His-His-162)、(238-His-His-Asp-Leu/Met-His-His-244)，而242、243位的組氨酸密碼子對CH25H的酶催化活性和羥基化反應(yīng)是必不可少的[52,57]。CH25HN端位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外，而3個活性位點組氨酸殘基簇位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)，表明CH25H是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)發(fā)揮其催化酶的催化作用[58]。1.2.2CH25H在脂肪代謝通路中的作用在脂肪代謝通路中CH25H主要是通過其羥基化作用催化膽固醇產(chǎn)生膽固醇
【參考文獻】：
期刊論文
[1]牛副流感病毒3型感染MDBK細胞后影響天然免疫基因表達的篩選與驗證[J]. 趙貴民,呂麗霞,王洪梅,喬軍,夏咸柱,何洪彬. 動物醫(yī)學進展. 2019(02)
[2]牛副流感病毒3型實驗室檢測方法研究進展[J]. 莊金秋,梅建國,張穎,莫玲,劉吉山. 中國奶牛. 2018(04)
[3]干擾素刺激基因的抗病毒機制[J]. 白思宇,楊倩,仇華吉. 微生物學報. 2018(03)
[4]牛副流感病毒3型（BPIV3）P蛋白磷酸化位點與功能性結(jié)構(gòu)域分析[J]. 趙貴民,侯佩莉,賈春濤,王洪梅,何洪彬. 中國獸醫(yī)學報. 2017(02)
[5]牛副流感的流行、危害及其防控[J]. 朱遠茂,馬磊,楊婷,宋文鳳,薛飛. 中國預(yù)防獸醫(yī)學報. 2016(08)
[6]我國牛副流感病毒3型血清學調(diào)查[J]. 王海勇,童欽,王煒,武華. 中國預(yù)防獸醫(yī)學報. 2014(02)
[7]牛副流行性感冒的流行與診斷[J]. 王英,侯寶香,張俊嬙. 養(yǎng)殖技術(shù)顧問. 2014(02)
[8]流行性感冒病毒[J]. 張愛君. 中國地方病防治雜志. 2009(03)
[9]共表達口蹄疫病毒衣殼前體蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛腎細胞株的篩選及穩(wěn)定性[J]. 李炯,劉艷紅,劉湘濤,尚佑軍,劉俊林,安芳蘭,殷宏. 微生物學報. 2008(11)
[10]副流感病毒核衣殼蛋白的基因克隆、原核表達與多克隆抗體制備[J]. 林斌,田新貴,唐啟慧,王長兵,游愛萍,周榮. 熱帶醫(yī)學雜志. 2008(04)
博士論文
[1]牛腺病毒3型和牛副流感病毒3型對實驗動物致病性的研究[D]. 史鴻飛.中國農(nóng)業(yè)科學院 2014
碩士論文
[1]牛副流感病毒3型C和V蛋白通過負調(diào)控IRF7拮抗Ⅰ型干擾素表達的研究[D]. 劉瑩.東北農(nóng)業(yè)大學 2017
[2]牛副流感病毒3型NM09株反向遺傳系統(tǒng)的建立[D]. 師新川.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012
本文編號：3112660
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