發(fā)布時(shí)間：2021-03-28 00:11

　　放線菌天然產(chǎn)物在人類(lèi)的疾病史上發(fā)揮著非常重要的作用,為人類(lèi)貢獻(xiàn)了許多抗生素。遺傳操作在放線菌天然產(chǎn)物藥物研究中扮演了極其重要的角色,而傳統(tǒng)的同源重組方式往往由于周期長(zhǎng)、依賴于篩選標(biāo)記、篩選量大等劣勢(shì),極大地增加了工作量,同時(shí)也限制了其應(yīng)用范圍。因此,我們迫切需要完善放線菌的遺傳操作體系,以更有效率地對(duì)放線菌次級(jí)代謝潛能進(jìn)行挖掘研究。本實(shí)驗(yàn)室一直以來(lái)致力于放線菌天然產(chǎn)物挖掘,并且構(gòu)建"萬(wàn)株基因組"庫(kù)用于研究。本研究這對(duì)兩種特殊的稀有放線菌海洋疣孢菌MS100137和嗜甲基擬無(wú)支酸菌,構(gòu)建了基于CRISPR/Cas9的遺傳操作體系,并將其初步應(yīng)用于次級(jí)代謝產(chǎn)物的相關(guān)研究。主要取得了以下幾點(diǎn)結(jié)果:1.利用遺傳學(xué)手段初步解析proximicin生物合成機(jī)制（1）在海洋疣孢菌中建立了高效的CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù),成功刪除掉了長(zhǎng)達(dá)90kb的片段,效率高于75%;（2）應(yīng)用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)對(duì)MS100137中NRPS基因簇進(jìn)行刪除工作,發(fā)現(xiàn)C17和C12與proximicins的生物合成相關(guān),這兩個(gè)基因簇均含有大量的未知功能基因,預(yù)示著其中有新的機(jī)制;（3）通過(guò)對(duì)MS1... 

【文章來(lái)源】：安徽大學(xué)安徽省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 微生物天然產(chǎn)物研究現(xiàn)狀
    1.2 NRPS天然產(chǎn)物生物合成
    1.3 放線菌基因組編輯的技術(shù)手段
        1.3.1 同源重組
        1.3.2 Cre/loxp系統(tǒng)
        1.3.3 I-SceI核酸內(nèi)切酶
    1.4 CRISPR/Cas9技術(shù)在放線菌中的應(yīng)用
    1.5 稀有放線菌及其代謝產(chǎn)物
    1.6 研究?jī)?nèi)容和意義
第二章 利用CRISPR系統(tǒng)初步解析proximicin生物合成機(jī)制
    2.1 研究背景
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 海洋疣孢菌中CRISPR/Cas9技術(shù)的建立及大片段基因刪除
        2.3.2 新穎proximicins檢測(cè)
        2.3.3 proximicin合成基因簇初步解析
        2.3.4 Proximicins生物合成機(jī)制推測(cè)
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 嗜甲基擬無(wú)支酸菌中amychelin新類(lèi)似物的獲得以及菌株底盤(pán)構(gòu)建
    3.1 研究背景
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
T的生理特征">        3.3.1 A.methanolica 239^T的生理特征
T的建立及attB位點(diǎn)引入">        3.3.2 CRISPR/Cas9方法在A.methanolica 239^T的建立及attB位點(diǎn)引入
        3.3.3 新化合物的分離及結(jié)構(gòu)解析
        3.3.4 活性鑒定
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章和專利



本文編號(hào)：3104499