本文關(guān)鍵詞：中華蜂內(nèi)共生放線菌的分離、多樣性及抗菌活性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：放線菌是一類具有重大實(shí)用價(jià)值的微生物資源。因其能產(chǎn)生豐富的生物活性物質(zhì)如：抗生素、酶抑制劑、有機(jī)酸、維生素等,使其在醫(yī)藥領(lǐng)域、農(nóng)業(yè)領(lǐng)域、食品領(lǐng)域等有著極為廣泛的應(yīng)用。所以探索新型的能產(chǎn)生良好生物活性物質(zhì)的放線菌資源是進(jìn)行放線菌研究的重要內(nèi)容。昆蟲(chóng)是自然界中種類最多的生物種群,且其都有與微生物共生的現(xiàn)象,可以預(yù)見(jiàn)昆蟲(chóng)體內(nèi)放線菌在種類和功能上都會(huì)具有豐富的多樣性。然而目前人們對(duì)昆蟲(chóng)內(nèi)共生放線菌資源的探索還較少,因此具有很大的開(kāi)發(fā)潛力。本實(shí)驗(yàn)以中華蜂(Apis cerana cerana Fabricius)作為研究對(duì)象,目的在于探索中華蜂可培養(yǎng)內(nèi)共生放線菌的分離方法,研究其內(nèi)共生放線菌的物種多樣性和抗菌活性,挖掘更多有價(jià)值的微生物資源。本實(shí)驗(yàn)選用以濃度為0.2%的C102(二氧化氯)為消毒劑作用60s的表面消毒方法,采用7種不同的分離培養(yǎng)基對(duì)中華蜂體內(nèi)放線菌進(jìn)行分離,共計(jì)得到161株菌,其中腐殖酸HV培養(yǎng)基培養(yǎng)出了48株菌,分出的菌株數(shù)量居于首位,而稀有放線菌出菌率最高的為M7培養(yǎng)基。根據(jù)菌落的形態(tài)和細(xì)胞特征觀察結(jié)果,從分離得到的161株內(nèi)共生放線菌中選取84株代表菌株進(jìn)行多樣性和抗菌活性研究。對(duì)84株代表菌株,選用Hha Ⅰ、HaeⅢ、Msp Ⅰ、HinfⅠ四種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行16S rRNA-RFLP分析,酶切后形成18種16S rRNA遺傳類型,樹(shù)狀圖顯示代表菌株在57%的相似性上聚在一起,在93%的相似水平上,代表菌株分成了10個(gè)遺傳群,其中群2為優(yōu)勢(shì)菌群,包含50株菌。綜合菌株形態(tài)特征和16S rRNA基因酶切圖譜分析,從10個(gè)遺傳群中選取了16株代表菌株測(cè)定16S rRNA基因序列,結(jié)果表明從中華蜂樣品中分離得到的放線菌分屬于3個(gè)目、4個(gè)科中的4個(gè)屬,包括鏈霉菌亞目(Suborder Streptomycineae)中鏈霉菌科(Streptomycetaceae)的鏈霉菌屬(Streptomyces);小單孢菌亞目(Suborder Micromonosporineae)中小單孢菌科(Micromonosporacea)的小單孢菌屬(Micromonospora);棒桿菌亞目(Suborder Corynebacterineae)中戈登氏菌科(Gordoniaceae)的戈登氏菌屬(Gordonia)和擬諾卡氏菌科(Nocardiopsaceae)的擬諾卡氏菌屬(Nocardiopsis)。SCAUEB4、 SCAUED23、SCAUEB32這3株為潛在新種,需進(jìn)一步研究。選用2種病原真菌和2種病原細(xì)菌對(duì)84株代表菌株進(jìn)行抗菌活性初探,結(jié)果表明31.0%、48.8%、27.4%、16.7%的代表菌株分別對(duì)大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、玉米彎孢病菌(Curvullaria lunata)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)有不同程度的抗菌活性,71.4%的代表菌株對(duì)至少1種病原菌展現(xiàn)出抑菌效果,而其中的14.3%對(duì)3種及3種以上的病原菌表現(xiàn)出了不同程度抑菌效果,展現(xiàn)出了廣譜的抗菌活性。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,分離方法的選擇對(duì)昆蟲(chóng)體內(nèi)放線菌的分離效果影響較大;此外中華蜂體內(nèi)放線菌具有豐富的多樣性,展現(xiàn)出了很好的抗菌活性,其在發(fā)現(xiàn)新型生物活性物質(zhì)中具有很大的潛力。
【關(guān)鍵詞】：中華蜂 內(nèi)共生放線菌 分離 多樣性 抗菌活性
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q939.132
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 1 前言10-20
• 1.1 昆蟲(chóng)內(nèi)共生菌研究進(jìn)展10-12
• 1.1.1 昆蟲(chóng)內(nèi)共生菌簡(jiǎn)介10
• 1.1.2 昆蟲(chóng)內(nèi)共生菌生物多樣性10-11
• 1.1.3 昆蟲(chóng)內(nèi)共生菌與宿主的關(guān)系及作用11-12
• 1.2 昆蟲(chóng)內(nèi)共生放線菌研究現(xiàn)狀12-18
• 1.2.1 放線菌簡(jiǎn)介13-14
• 1.2.2 放線菌在微生物系統(tǒng)學(xué)中的地位14-15
• 1.2.3 昆蟲(chóng)內(nèi)共生放線菌的分離方法15-17
• 1.2.4 昆蟲(chóng)內(nèi)共生放線菌多樣性研究方法17-18
• 1.3 蜜蜂內(nèi)共生菌的研究進(jìn)展18-19
• 1.4 本研究的目的和意義19-20
• 2 材料與方法20-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料20-22
• 2.1.1 樣品20
• 2.1.2 培養(yǎng)基及抑菌劑的選擇20-21
• 2.1.3 病原菌株21-22
• 2.1.4 供試試劑及主要儀器22
• 2.2 中華蜂內(nèi)共生放線菌的分離22-23
• 2.2.1 樣品的預(yù)處理22
• 2.2.2 最適表面消毒方法的選取22-23
• 2.2.3 中華蜂內(nèi)共生放線菌的分離純化及保藏23
• 2.3 中華蜂內(nèi)共生放線菌多樣性分析23-25
• 2.3.1 內(nèi)共生放線菌的形態(tài)觀察23
• 2.3.2 代表菌株基因組DNA提取23-24
• 2.3.3 代表菌株16S rRNA基因的PCR擴(kuò)增24-25
• 2.3.4 代表菌株的16S rRNA PCR-RFLP指紋圖譜分析25
• 2.3.5 16S rRNA基因全序列測(cè)定25
• 2.3.6 16S rRNA序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建25
• 2.4 內(nèi)共生放線菌抗菌活性初探25-26
• 2.4.1 細(xì)菌指示菌的抗菌活性實(shí)驗(yàn)25-26
• 2.4.2 病原真菌的指示菌的抗菌活性實(shí)驗(yàn)26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析26-44
• 3.1 最適表面消毒方法的確定26-29
• 3.2 中華蜂內(nèi)共生放線菌的分離29
• 3.3 內(nèi)共生放線菌形態(tài)特征29-32
• 3.4 代表菌株基因組DNA提取32
• 3.5 代表菌株16S rRNA基因PCR擴(kuò)增32-33
• 3.6 代表菌株16S rRNA PCR-RFLP分析結(jié)果33-39
• 3.7 代表菌株16S rRNA基因序列分析結(jié)果39-41
• 3.8 中華蜂內(nèi)共生菌抗菌活性41-44
• 4 討論44-46
• 4.1 中華蜂內(nèi)共生放線菌分離方法44-45
• 4.2 中華蜂內(nèi)共生放線菌多樣性45-46
• 4.3 中華蜂內(nèi)共生放線菌的抗菌活性46
• 5 結(jié)論46-47
• 6 展望47-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文54

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本文編號(hào)：307813