發(fā)布時間：2017-04-13 21:38

  本文關(guān)鍵詞：USP15、USP21抑制劑篩選及去泛素化酶活性檢測系統(tǒng)改進，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蛋白質(zhì)的泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾方式,被泛素分子修飾的蛋白在去泛素化酶的作用下可以水解掉所帶的泛素。在過去的5到10年間,許多研究結(jié)果都表明去泛素化酶在體內(nèi)的許多生理過程中起到了重要作用,而去泛素化酶的異常與包括腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、血液疾病、感染在內(nèi)的多種人類疾病相關(guān)。因此,許多科研機構(gòu)和醫(yī)藥公司都在努力尋找去泛素化酶的抑制劑。泛素特異性水解酶USP15被報道可以調(diào)節(jié)TGF-p信號通路,促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。還可以通過穩(wěn)定MDM2,負(fù)調(diào)控T細(xì)胞的活性,以及調(diào)節(jié)p53的功能,抑制USP15的活性,可以誘導(dǎo)腫瘤的凋亡,以及促進抗腫瘤T細(xì)胞應(yīng)答。因此,USP15被認(rèn)為是一個非常好的抗腫瘤治療靶點。此外,也有文章指出,抑制USP15的活性,也可以作為治療帕金森的一個途徑。然而,到目前為止,并沒有發(fā)現(xiàn)一個特異性針對USP15的抑制劑,PR-619雖然可以很好的抑制USP15的活性,但PR-619是一個廣譜的去泛素化酶抑制劑,缺乏特異性導(dǎo)致其應(yīng)用受到了極大的限制。泛素特異性水解酶USP21被報道可以負(fù)調(diào)控NF-KB信號通路和RIG-Ⅰ介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素信號通路,可以去H2A的單泛素化進而調(diào)控下游因子的轉(zhuǎn)錄,還可以穩(wěn)定GATA3進而上調(diào)FOXP3在Treg細(xì)胞中的水平。此外,我們實驗室也發(fā)現(xiàn)了USP21在固有免疫以及干細(xì)胞干性維持中具有重要作用。然而,與USP15一樣,雖然PR-619可以抑制USP21的去泛素化酶活性,但缺乏特異性,目前特異性針對USP21的抑制劑也沒有被報道。在本文中,我們應(yīng)用Ub-Nanoluc去泛素化酶活性檢測系統(tǒng)分別對USP15和USP21進行了小分子抑制劑的篩選,并在體外水平證明了篩選出的小分子化合物確實分別可以抑制USP15和USP21的去泛素化酶活性。為了篩選去泛素化酶的抑制劑,研究人員開發(fā)出了多種檢測去泛素化酶活性的方法。我們實驗室利用一種新型穩(wěn)定靈敏度高的報告基因Nanoluc開發(fā)出了一套檢測去泛素化酶活性的方法,但是由于所用固相載體為Ni-NTA beads,操作十分繁雜。為了簡化操作,提高方法的通量性,在本文的研究中,我們將固相載體換成了鎳包被的96孔白板。改進后的方法操作更為簡便,更適合于高通量的篩選工作。綜上所述,本文篩選了去泛素化酶USP15和USP21的小分子抑制劑,并在體外水平證明了其抑制作用。此外,本文還對基于Nanoluc報告基因的去泛素化酶活性檢測系統(tǒng)進行了改進,使其操作更為便捷易行,更適合于高通量的篩選工作。
【關(guān)鍵詞】：USP15 USP21 抑制劑 去泛素化酶活性檢測
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q503
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一章 研究背景及文獻綜述11-27
• 第一節(jié) 去泛素化酶概述11-21
• 第二節(jié) 去泛素化酶活性檢測方法概述21-25
• 第三節(jié) 去泛素化酶抑制劑研究進展25-27
• 第二章 材料與方法27-51
• 第一節(jié) 實驗材料27-32
• 第二節(jié) 常用實驗試劑的配制32-40
• 第三節(jié) 實驗方法40-51
• 第三章 結(jié)果與分析51-83
• 第一節(jié) 去泛素化酶USP15抑制劑的篩選51-62
• 第二節(jié) 去泛素化酶USP21抑制劑篩選62-69
• 第三節(jié) 通量化去泛素化酶活性檢測系統(tǒng)的改進69-83
• 第四章 總結(jié)與討論83-85
• 附錄Ⅰ USP15抑制劑初篩85-92
• 附錄Ⅱ 化合物對Nanoluc讀值的影響92-93
• 附錄Ⅲ 縮略詞93-94
• 附錄Ⅳ 科研成果94-95
• 參考文獻95-103
• 致謝103-104

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;動物所有關(guān)泛素鏈形成機制研究取得新進展[J];江西飼料;2014年01期

2 陳季武;鄭麗娜;王幫正;李曉濤;;泛素化介導(dǎo)的非蛋白質(zhì)降解功能[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2012年07期

3 瞿蘇;王友群;;泛素非經(jīng)典通路的研究[J];醫(yī)學(xué)綜述;2006年17期

4 何冰;宋曉峰;;基于蛋白質(zhì)序列的泛素化位點預(yù)測研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2012年18期

5 盧亮;李棟;賀福初;;蛋白質(zhì)泛素化修飾的生物信息學(xué)研究進展[J];遺傳;2013年01期

6 呂永坤;周景文;劉龍;;氮代謝調(diào)控相關(guān)蛋白質(zhì)泛素化修飾篩選[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報;2014年06期

7 陳雨晗;張令強;賀福初;;去泛素化酶與基因表達調(diào)控[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2014年02期

8 喻海燕;宋曉峰;;蛋白質(zhì)泛素化位點單核苷酸多態(tài)性的研究進展[J];計算機與應(yīng)用化學(xué);2014年02期

9 杜秋麗;李莉;;植物泛素化系統(tǒng)[J];濟寧學(xué)院學(xué)報;2011年03期

10 宋春雷;劉紅林;;組蛋白的泛素化與去泛素化修飾[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2007年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 艾永興;趙程程;鄭海南;吳山力;張玉靜;;病毒編碼的泛素化酶與去泛素化酶的研究進展[A];全國動物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2012年

2 豐蕾;李德峰;王大成;;楊樹菇泛素接合酶E2(UbcA1)的晶體結(jié)構(gòu)研究[A];中國晶體學(xué)會第四屆全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文摘要集[C];2008年

3 徐輝明;;Wwp2催化轉(zhuǎn)錄因子Oct-4的泛素化修飾[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2005年學(xué)術(shù)大會、青年學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

4 趙程程;鄭海南;吳山力;吳涵;張玉靜;艾永興;;UAF1與去泛素化酶USP家族相互作用的研究進展[A];全國動物生理生化第十二次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2012年

5 張浩;李瑋妮;陳立涵;韓白玉;程龍;徐小潔;葉棋濃;;ERbeta類泛素化修飾及其生物學(xué)意義[A];生命的分子機器及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)——2012年全國生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要集[C];2012年

6 李亭亭;關(guān)俊宏;鄭曉峰;;組蛋白的Neddylation拮抗泛素化并參與DNA損傷修復(fù)的調(diào)控[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

7 廖兵;;Wwp2呈劑量依賴性調(diào)節(jié)Oct-4的泛素化修飾[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2005年學(xué)術(shù)大會、青年學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

8 李志強;張浩;張根堂;于如同;;腦膠質(zhì)瘤中NEDD4-1調(diào)節(jié)鳥苷酸交換因子CNrasGEF泛素化作用的研究[A];2011中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

9 高明;李小光;董雯;金蕊;馬航航;楊平勛;胡美茹;李譯;郝一;宋倫;;核糖體小亞基蛋白S7通過調(diào)控MDM2依賴GADD45泛素化降解反應(yīng)介導(dǎo)砷化物誘導(dǎo)的促細(xì)胞凋亡效應(yīng)[A];中國毒理學(xué)會第六屆全國毒理學(xué)大會論文摘要[C];2013年

10 李永濤;吳舒娟;錢偉;金梅林;;HSP27通過K48泛素化途徑降解TRAF3蛋白負(fù)調(diào)控Ⅰ型干擾素信號通路[A];細(xì)胞—生命的基礎(chǔ)——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 記者 李嬋;“鉆”進細(xì)胞的人[N];北京科技報;2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王慧;去泛素化酶CYLD通過下調(diào)Nrf2調(diào)節(jié)心臟重構(gòu)和功能障礙[D];山東大學(xué);2015年

2 周紫章;Usp7/HAUSP通過去泛素化Ci/Gli調(diào)控Hh信號通路[D];南京大學(xué);2015年

3 郭曰帥;精子發(fā)生相關(guān)泛素化修飾的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

4 張還添;PRMT5的轉(zhuǎn)錄調(diào)控及其泛素化-蛋白酶體降解機制研究[D];暨南大學(xué);2015年

5 霍英;后期促進復(fù)合物合成泛素鏈的機理[D];吉林大學(xué);2009年

6 嚴(yán)晶;SCYL1-BP1蛋白及XPC蛋白對p53-MDM2反饋調(diào)節(jié)環(huán)影響的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

7 王占新;針對禽白血病病毒整合酶的抗病毒機制及泛素化修飾研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 高天順;泛素偶聯(lián)系統(tǒng)的生物信息學(xué)研究[D];華中科技大學(xué);2014年

9 張蕾;維甲酸受體α（RARα）泛素化降解的調(diào)控機制研究[D];浙江大學(xué);2013年

10 李偉;多聚泛素化參與鼻咽癌及肺癌發(fā)病的分子機制研究[D];中南大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 游含宇;CKS對人肝癌細(xì)胞HepG2增殖與凋亡的調(diào)控作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 馮志霞;UCH-L1對HDAC6介導(dǎo)的tau蛋白功能性聚集體形成的影響[D];華中師范大學(xué);2015年

3 李洪昌;抑癌蛋白PTEN的去泛素化酶0TUD3轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及表型分析[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

4 李潔;UBE2O在c-Maf泛素化降解過程中的功能研究[D];蘇州大學(xué);2015年

5 陳靜靜;去泛素化酶對PTEN蛋白穩(wěn)定性調(diào)控的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

6 郭賽賽;PIM1激酶線性泛素化修飾及其功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 于素;E3泛素連接酶FBW7對KLF10蛋白穩(wěn)定性調(diào)控及生物學(xué)功能的研究[D];華東師范大學(xué);2013年

8 程曉牧;USP15、USP21抑制劑篩選及去泛素化酶活性檢測系統(tǒng)改進[D];華東師范大學(xué);2015年

9 喻海燕;單核苷酸多態(tài)性影響蛋白質(zhì)泛素化修飾的研究[D];南京航空航天大學(xué);2014年

10 陳霞;家族性肌萎縮側(cè)索硬化動物模型腰段脊髓泛素表達特征[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：USP15、USP21抑制劑篩選及去泛素化酶活性檢測系統(tǒng)改進，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：304514