蕪菁花葉病毒（Turnip Mosaic Virus,TuMV）是馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus）的一員,該屬病毒大多是以蚜蟲進(jìn)行非持久方式傳播,在多種作物如甘藍(lán)和白菜等均造成重大危害與損失。TuMV為單分子線形正義單鏈RNA（single-stranded RNA,ssRNA）病毒,編碼一個多聚蛋白,并且該多聚蛋白經(jīng)蛋白酶水解后分為10種病毒蛋白,包括P1、P3、6K1、6K2、HC-Pro、NIa-Vpg、NIa-Pro、NIb、CI、CP以及在P3編碼區(qū)域中的P3N-PIPO蛋白。其中膜蛋白6K2被證實(shí)與病毒的復(fù)制囊泡相關(guān),通過參與病毒的復(fù)制與運(yùn)動進(jìn)而達(dá)到利于病毒侵染的目的。本研究通過探究本氏煙中一個未知功能蛋白NbP3IPH與TuMV之間的關(guān)系,分析其在抵抗TuMV侵染過程中的功能與作用。首先我們通過對NbP3IPH序列和定位情況進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)NbP3IPH定位于細(xì)胞核和細(xì)胞膜以及葉綠體,并通過預(yù)測軟件預(yù)測該序列的前32位氨基酸為葉綠體信號肽;并且感染TuMV后誘導(dǎo)NbP3IPH下調(diào)表達(dá);其次利用煙草脆裂病毒（Tobacco rattle virus,TRV）介導(dǎo)的基因沉默... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 蕪菁花葉病毒（Turnip Mosaic Virus,TuMV）
        1.1.1 TuMV編碼蛋白的功能研究
        1.1.2 TuMV的復(fù)制與運(yùn)動研究進(jìn)展
        1.1.3 TuMV組分與寄主蛋白的互作研究
        1.1.4 TuMV與介體昆蟲的研究
    1.2 植物抗病毒途徑研究進(jìn)展
        1.2.1 RNA沉默參與植物抗病毒病
        1.2.2 植物激素參與植物抗病毒病
        1.2.3 自噬途徑參與植物抗病毒病
    1.3 研究目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 供試植株
        2.1.2 供試菌株及載體
    2.2 試劑與儀器
        2.2.1 試劑
        2.2.2 儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 Trizol法提取植物總RNA
        2.3.2 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        2.3.3 克隆載體的構(gòu)建
        2.3.4 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.5 實(shí)時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）
        2.3.6 蛋白雜交檢測（Western blot）
        2.3.7 亞細(xì)胞定位
        2.3.8 酵母雙雜交（Yeast two hybrid,Y2H）
        2.3.9 雙分子熒光互補(bǔ)（Bimolecular Fluorescence complementation, Bi FC）
        2.3.10 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）
第三章 NbP3IPH在TuMV侵染過程中的功能研究
    3.1 NbP3IPH的定位分析
    3.2 TuMV侵染后誘導(dǎo)NbP3IPH下調(diào)表達(dá)
    3.3 系統(tǒng)沉默NbP3IPH促進(jìn)TuMV侵染
    3.4 局部超表達(dá)NbP3IPH抑制TuMV侵染
第四章 NbP3IPH對TuMV 6K2功能的影響
    4.1 NbP3IPH與TuMV 6K2互作
    4.2 NbP3IPH通過自噬途徑降解TuMV 6K2蛋白
    4.3 NbP3IPH、TuMV 6K2與自噬相關(guān)基因ATGs相互作用關(guān)系
第五章 結(jié)論與討論
    5.1 結(jié)論
        5.1.1 NbP3IPH在TuMV侵染過程中的功能分析
        5.1.2 NbP3IPH對TuMV 6K2功能的影響
    5.2 討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位論文期間發(fā)表文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大白菜蕪菁花葉病毒病抗性等位性研究[J]. 滿衛(wèi)萍,張志剛,劉栓桃,王榮花,王立華,許念芳,徐文玲,劉賢嫻,劉辰,李巧云,趙智中.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2019(12)
[2]甘藍(lán)抗蕪菁花葉病毒育種研究進(jìn)展[J]. 呂紅豪,邢苗苗,楊麗梅,莊木,張揚(yáng)勇,王勇,方智遠(yuǎn).  園藝學(xué)報(bào). 2019(09)
[3]Salicylic Acid and its Function in Plant Immunity[J]. Chuanfu An and Zhonglin Mou Department of Microbiology and Cell Science,University of Florida,Gainesville,FL 32611,USA.  Journal of Integrative Plant Biology. 2011(06)



本文編號：3040601