發(fā)布時間：2021-02-12 06:34

　　間充質(zhì)干細胞（Mesenchymal stem cell, MSCs）是一類具有自我更新能力,低免疫原性,廣泛的免疫調(diào)控能力和多向分化潛能的多功能干細胞。母胎界面是MSCs的一個重要來源,并且母胎界面相關(guān)功能的改變：如螺旋動脈重鑄障礙,滋養(yǎng)層細胞浸潤過淺,免疫平衡失調(diào)等都會影響妊娠的正常進行。因此,母胎界面處的MSCs對于正常的妊娠過程可能具有重要的調(diào)節(jié)功能。目前人們已經(jīng)成功從來源于母胎界面的多種組織,如臍帶組織、胎盤組織和蛻膜組織中成功分離培養(yǎng)出MSCs。MicroRNAs（miRNAs）是一類由內(nèi)源基因編碼的長度約為22個核苷酸的單鏈非編碼小RNA,通過與其靶基因mRNA的非翻譯區(qū)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達,進而參與調(diào)控多種生物過程。MiRNAs的差異表達或遺傳改變都會影響其對靶基因的表達調(diào)控,涉及到許多疾病包括子癇前期的發(fā)病機制。前期我們通過miRNAs芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn),與正常孕產(chǎn)婦相比,miR-30a在子癇前期患者母胎界面的蛻膜中表達存在差異。臍帶作為連接母體和胎兒的重要組織,在胎兒的生長發(fā)育階段發(fā)揮關(guān)鍵作用。可是,迄今還不清楚,miR-30a在子癇前期患者和正常孕婦的臍帶組... 

【文章來源】：南京大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
前言
第一章 MiR-30a對臍帶MSCs生長狀況影響的分析
    1.1 引言
    1.2 實驗材料
        1.2.1 實驗對象
        1.2.2 主要試劑
        1.2.3 主要儀器設(shè)備
    1.3 實驗方法
        1.3.1 臍帶組織來源間充質(zhì)干細胞的獲取與分離培養(yǎng)
?2000轉(zhuǎn)染MSCs高表達miR-30a">        1.3.2 Lipofectamine^?2000轉(zhuǎn)染MSCs高表達miR-30a
        1.3.3 流式細胞術(shù)檢測MSCs表面標(biāo)志的表達
        1.3.4 Annexin V/PI雙染法檢測細胞凋亡
        1.3.5 CCK-8法檢測細胞活力
        1.3.6 細胞周期的檢測
        1.3.7 實時熒光定量PCR分析相關(guān)因子mRNA表達水平
        1.3.8 Western blot檢測相關(guān)蛋白的表達水平
        1.3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    1.4 實驗結(jié)果與分析
        1.4.1 成功獲取臍帶組織來源MSCs
        1.4.2 MiR-30a在子癇前期患者的臍帶組織及MSCs中異常高表達
        1.4.3 高表達miR-30a對MSCs形態(tài)及表型沒有影響
        1.4.4 高表達miR-30a對MSCs細胞凋亡與活力沒有影響
        1.4.5 高表達miR-30a引起MSCs細胞周期的阻滯
        1.4.7 討論
第二章 MiR-30a調(diào)控MSCs免疫調(diào)節(jié)功能的機制
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗對象
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要儀器設(shè)備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 臍帶MSCs的分離與培養(yǎng)
        2.3.2 MicroRNA片段與干擾片段的轉(zhuǎn)染
        2.3.3 實時熒光定量PCR分析相關(guān)基因mRNA的表達水平
        2.3.4 Western blot檢測相關(guān)蛋白的表達
        2.3.5 ELISA檢測MSCs培養(yǎng)上清中IL-6的表達
        2.3.6 Dual Luciferase Reporter Gene Assay檢測miR-30a與TAB3的3'UTR的靶向關(guān)系
        2.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2.4 實驗結(jié)果與分析
        2.4.1 高表達miR-30a抑制IL-1β誘導(dǎo)的IL-6、COX2和IL-8的表達
        2.4.2 高表達miR-30a減弱MSCs對巨噬細胞的免疫抑制作用
        2.4.3 高表達miR-30a抑制IL-1β介導(dǎo)的NF-κB和JNK通路的活化
        2.4.4 高表達miR-30a抑制TAB3的表達
        2.4.5 TAB3是miR-30a調(diào)控MSCs免疫抑制功能的關(guān)鍵靶點
        2.4.6 討論
結(jié)論
參考文獻
附錄
碩士期間科研成果
致謝
感謝以下基金的資助



本文編號：3030407