DTMUV非編碼亞基因組RNA的鑒定及其影響病毒致病性的分子機制研究
發(fā)布時間：2021-02-11 14:03
鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus,DTMUV）在感染鴨后可導致鴨生產(chǎn)性能下降,病程后期可引起典型的神經(jīng)癥狀,嚴重情況下可導致發(fā)病動物死亡,這給我國養(yǎng)鴨業(yè)帶來嚴重的危害,此外,國內(nèi)外已多次報導坦布蘇病毒感染人的事件,這同樣給我國公共衛(wèi)生安全帶來一定的挑戰(zhàn)。坦布蘇病毒粒子包含囊膜,其基因組長度大約為11 kb,只含有一個開放閱讀框,該閱讀框可編碼3種結(jié)構(gòu)蛋白和7種非結(jié)構(gòu)蛋白;此外,在開放閱讀框的5’和3’端各包含一個非編碼區(qū),其中5’端非編碼區(qū)由94個核苷酸組成,而3’端非編碼區(qū)由618個核苷酸組成,兩個非編碼區(qū)雖然不被編碼成病毒蛋白,但卻有著豐富的生物學功能,兩者在病毒基因組的復制及翻譯等過程中發(fā)揮調(diào)控作用。研究表明,某些黃病毒在復制過程中,隨著病毒基因組的不斷復制,基因組的3’非編碼區(qū)會產(chǎn)生一些長度約為0.3-0.5 kb的亞基因組RNA（subgenomic RNA,sgRNA）,這類RNA具有豐富多樣的生物學功能。sgRNA的積累是黃病毒屬病毒特有的一個現(xiàn)象,該類產(chǎn)物的形成往往是由病毒基因組3’UTR（Untranslated region,UTR）自身保守的高級...
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省
【文章頁數(shù)】：79 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
TMUV病毒粒子結(jié)構(gòu)圖（引自陳浩，2015）
polyA尾巴。開放閱讀框兩端存在高度保守的非編碼區(qū)（Untranslatedregions，UTR），其中5’端非編碼區(qū)長度為94nt，3’非編碼區(qū)長度為618nt（Westawayetal.,1985;NakayamaandTakasaki,1999;陳浩,2015）。1.1.3坦布蘇病毒的蛋白結(jié)構(gòu)和功能坦布蘇病毒唯一的一個開放閱讀框只編碼一個多聚蛋白，該多聚蛋白包含3425個氨基酸殘基，后經(jīng)病毒絲氨酸蛋白酶和宿主信號肽酶水解為10個蛋白片段，其中包含3種結(jié)構(gòu)蛋白（C，prM/M和E）和7種非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B以及NS5）（如圖1-2）（王振忠,2018;陳浩,2015）。圖1-2TMUV病毒基因組結(jié)構(gòu)圖（引自張秋艷，2019）Fig1-2OrganizationoftheTMUVgenomeandexpressionofproteinsC蛋白相對保守，大小約為12KDa，它是由大分子前體蛋白在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上經(jīng)酶加工而成，C蛋白包含大量堿性氨基酸，約占總量24%（潘異哲,2014）。衣殼蛋白是病毒核衣殼組裝過程中的重要原件，并且C蛋白通過與病毒RNA組裝成核衣殼顆粒，以此保護病毒核酸不被RNA酶降解或者免受其他外界因素的破壞，除此以外，它還可以誘導體液免疫和細胞免疫（BykandGamarnik,2016）。一般情況下，這些C蛋白分散于脂滴周圍，在病毒感染后的早期可與脂滴發(fā)生作用，研究發(fā)現(xiàn)這一過程極有可能與基因組的包被有關(guān)，在某些細胞中，基因組翻譯時起始密碼的選擇可由C蛋白編碼序列中的cHP結(jié)構(gòu)介導，而這在病毒復制過程是十分重要的（OliveiraEdsonRAetal.,2017;SamsaMarceloMetal.,2009）。prM蛋白共包含167個氨基酸殘基，分子量大小大約為19KDa。它作為M蛋白的前體蛋白，只包含一個弗林蛋白酶切割位點，弗林酶在病毒粒子成熟過程中具有重要作用，在酸性環(huán)境中，可將位于高爾基體上的prM蛋白水解成M段和pr段，此過程有利于成熟坦布蘇病毒粒子的裝配
tikhuntetal.,2008）。在經(jīng)酶作用后的prM蛋白，pr段將被分泌至細胞外，而M段會穿插于細胞膜脂質(zhì)雙分子層中，以此參與病毒囊膜的形成（顏丕熙,2012）。E蛋白對于坦布蘇病毒來說是一種主要的糖蛋白，同時也是最大的結(jié)構(gòu)蛋白，它存在于病毒粒子表面，分子量達到54KDa左右，作為主要的抗原遞呈蛋白，可誘導機體產(chǎn)生特異性抗體，在病毒吸附、組裝以及受體結(jié)合等方面同樣發(fā)揮著重要的作用（DengYQetal.,2011;仲華等,2007;張琳等,2012）。E蛋白可形成3個獨立的結(jié)構(gòu)域，從X射線晶體學來劃分，包括domainⅠ/Ⅱ/Ⅲ（DⅠ/DⅡ/DⅢ）（如圖1-3）（Chenetal.,2005;DowdKAandPiersonTC,2011;FritzRetal.,2008）。其中DⅠ包含3個不連續(xù)的片段，該區(qū)域的二硫鍵可形成β折疊結(jié)構(gòu)，用以連接DⅡ以及DⅢ。DⅡ較為保守，是由DⅠ投射的兩個擴展循環(huán)組成，呈指樣結(jié)構(gòu)，該區(qū)域參與形成E蛋白二聚體，在病毒融合過程中，可以與靶細胞的細胞膜相互作用。位于E蛋白羧基端的DⅢ，結(jié)構(gòu)類似于IgG，其作用為與受體結(jié)合，大部分抗體均可識別DⅢ上的抗原表位（DengYQetal.,2011;李焱等,2010;寇甜甜等,2014）。圖1-3黃病毒E蛋白二聚體帶狀結(jié)構(gòu)（引自DowdKA,2011）圖中表示E蛋白的三個結(jié)構(gòu)域以及E-DⅡ的遠端融合環(huán)，其中棕色球表示N連碳水化合物修飾Fig1-3RibbondiagramoftheflavivirusEproteindimerIndividualdomainsoftheEproteinareindicated,asisthefusionloopatthedistalendofE-DⅡ.TheN-linkedcarbohydratemodificationsonEareshownasbrownspheres.NS1蛋白的分子量約為40KDa，是一個多功能糖蛋白，不僅可被糖基化修飾，也可以形成二聚體分泌到胞外。NS1功能具有多樣性，在病毒早期復制中發(fā)揮重要作
【參考文獻】：
期刊論文
[1]鴨坦布蘇病毒的血凝性[J]. 王小蕾,劉月煥,段會娟,劉立新,楊志遠,趙際成,潘潔,劉瑞華,趙文奇,田方杰,呂金寶,林健. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2019(23)
[2]一例鴨坦布蘇病的診治[J]. 江敏生,陳盛絮. 中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2018(02)
[3]鴨坦布蘇病毒分離鑒定及全基因組序列分析[J]. 王賓賓,閆大為,倪欣濤,李雪松,滕巧泱,楊健美,陳鴻軍,劉芹防,李澤君. 中國動物傳染病學報. 2017(06)
[4]實時熒光定量TaqMan RT-PCR檢測鴨坦布蘇病毒方法的建立及初步應用[J]. 劉洋,霍斯琪,王傳彬,楊林,張倩,劉玉良,馬英,顧小雪. 中國家禽. 2017(20)
[5]一例蛋鴨黃病毒病診治[J]. 劉波,劉娜,孔令靜,張棟,宦者威,陳月鋒,谷桂平,楊俊青. 中國畜禽種業(yè). 2017(06)
[6]鴨坦布蘇病毒的分離和PCR鑒定[J]. 曹宗喜,賀冬梅,葉保國,張艷,楊少雄,陳朝喜,林哲敏. 江蘇農(nóng)業(yè)科學. 2017(05)
[7]鴨坦布蘇病毒E基因重組桿狀病毒的構(gòu)建與間接ELISA檢測方法的建立[J]. 王善輝,謝金文,強成魁,呂顏枝,李云龍. 中國家禽. 2016(01)
[8]鴨胚中鴨坦布蘇病毒的分離與鑒定[J]. 李芳韜,江蕾,王雪梅,郭柳川,王兆山,刁有祥. 中國家禽. 2015(24)
[9]一例蛋鴨黃病毒病的診治[J]. 劉強,顧海豐. 湖北畜牧獸醫(yī). 2015(03)
[10]H9亞型禽流感病毒和鴨坦布蘇病毒二重PCR檢測方法的建立[J]. 趙虹,謝芝勛,謝麗基,劉加波,鄧顯文,謝志勤,龐耀珊,范晴,羅思思. 中國畜牧獸醫(yī). 2014(10)
博士論文
[1]黃病毒復制缺陷病毒的構(gòu)建及sfRNA產(chǎn)生機制研究[D]. 張秋艷.中國科學院大學(中國科學院武漢病毒研究所) 2019
[2]坦布蘇病毒感染對鴨胚成纖維細胞生物學功能的影響及其機制研究[D]. 于觀留.山東農(nóng)業(yè)大學 2019
[3]鴨坦布蘇病毒細胞適應毒免疫原性及致弱分子基礎(chǔ)研究[D]. 章麗嬌.中國農(nóng)業(yè)大學 2017
[4]坦布蘇病毒ZC株感染性克隆的構(gòu)建和部分3’非編碼區(qū)功能的初步研究[D]. 陳浩.山東農(nóng)業(yè)大學 2015
[5]坦布蘇病毒的分離鑒定及重組腺病毒介導shRNA抑制坦布蘇病毒在體外復制的研究[D]. 唐熠.山東農(nóng)業(yè)大學 2013
碩士論文
[1]鴨坦布蘇病毒NS1蛋白互作宿主蛋白的篩選及驗證[D]. 王振忠.山東農(nóng)業(yè)大學 2018
[2]鴨坦布蘇病毒NS1蛋白的原核表達與應用[D]. 潘異哲.江西農(nóng)業(yè)大學 2014
[3]鴨坦布蘇病毒的分離、致病性及細胞適應研究[D]. 張玥.東北農(nóng)業(yè)大學 2013
[4]鴨坦布蘇病毒分離鑒定及其生物學特性的研究[D]. 顏丕熙.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012
本文編號：3029220
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省
【文章頁數(shù)】：79 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
TMUV病毒粒子結(jié)構(gòu)圖（引自陳浩，2015）
polyA尾巴。開放閱讀框兩端存在高度保守的非編碼區(qū)（Untranslatedregions，UTR），其中5’端非編碼區(qū)長度為94nt，3’非編碼區(qū)長度為618nt（Westawayetal.,1985;NakayamaandTakasaki,1999;陳浩,2015）。1.1.3坦布蘇病毒的蛋白結(jié)構(gòu)和功能坦布蘇病毒唯一的一個開放閱讀框只編碼一個多聚蛋白，該多聚蛋白包含3425個氨基酸殘基，后經(jīng)病毒絲氨酸蛋白酶和宿主信號肽酶水解為10個蛋白片段，其中包含3種結(jié)構(gòu)蛋白（C，prM/M和E）和7種非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B以及NS5）（如圖1-2）（王振忠,2018;陳浩,2015）。圖1-2TMUV病毒基因組結(jié)構(gòu)圖（引自張秋艷，2019）Fig1-2OrganizationoftheTMUVgenomeandexpressionofproteinsC蛋白相對保守，大小約為12KDa，它是由大分子前體蛋白在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上經(jīng)酶加工而成，C蛋白包含大量堿性氨基酸，約占總量24%（潘異哲,2014）。衣殼蛋白是病毒核衣殼組裝過程中的重要原件，并且C蛋白通過與病毒RNA組裝成核衣殼顆粒，以此保護病毒核酸不被RNA酶降解或者免受其他外界因素的破壞，除此以外，它還可以誘導體液免疫和細胞免疫（BykandGamarnik,2016）。一般情況下，這些C蛋白分散于脂滴周圍，在病毒感染后的早期可與脂滴發(fā)生作用，研究發(fā)現(xiàn)這一過程極有可能與基因組的包被有關(guān)，在某些細胞中，基因組翻譯時起始密碼的選擇可由C蛋白編碼序列中的cHP結(jié)構(gòu)介導，而這在病毒復制過程是十分重要的（OliveiraEdsonRAetal.,2017;SamsaMarceloMetal.,2009）。prM蛋白共包含167個氨基酸殘基，分子量大小大約為19KDa。它作為M蛋白的前體蛋白，只包含一個弗林蛋白酶切割位點，弗林酶在病毒粒子成熟過程中具有重要作用，在酸性環(huán)境中，可將位于高爾基體上的prM蛋白水解成M段和pr段，此過程有利于成熟坦布蘇病毒粒子的裝配
tikhuntetal.,2008）。在經(jīng)酶作用后的prM蛋白，pr段將被分泌至細胞外，而M段會穿插于細胞膜脂質(zhì)雙分子層中，以此參與病毒囊膜的形成（顏丕熙,2012）。E蛋白對于坦布蘇病毒來說是一種主要的糖蛋白，同時也是最大的結(jié)構(gòu)蛋白，它存在于病毒粒子表面，分子量達到54KDa左右，作為主要的抗原遞呈蛋白，可誘導機體產(chǎn)生特異性抗體，在病毒吸附、組裝以及受體結(jié)合等方面同樣發(fā)揮著重要的作用（DengYQetal.,2011;仲華等,2007;張琳等,2012）。E蛋白可形成3個獨立的結(jié)構(gòu)域，從X射線晶體學來劃分，包括domainⅠ/Ⅱ/Ⅲ（DⅠ/DⅡ/DⅢ）（如圖1-3）（Chenetal.,2005;DowdKAandPiersonTC,2011;FritzRetal.,2008）。其中DⅠ包含3個不連續(xù)的片段，該區(qū)域的二硫鍵可形成β折疊結(jié)構(gòu)，用以連接DⅡ以及DⅢ。DⅡ較為保守，是由DⅠ投射的兩個擴展循環(huán)組成，呈指樣結(jié)構(gòu)，該區(qū)域參與形成E蛋白二聚體，在病毒融合過程中，可以與靶細胞的細胞膜相互作用。位于E蛋白羧基端的DⅢ，結(jié)構(gòu)類似于IgG，其作用為與受體結(jié)合，大部分抗體均可識別DⅢ上的抗原表位（DengYQetal.,2011;李焱等,2010;寇甜甜等,2014）。圖1-3黃病毒E蛋白二聚體帶狀結(jié)構(gòu)（引自DowdKA,2011）圖中表示E蛋白的三個結(jié)構(gòu)域以及E-DⅡ的遠端融合環(huán)，其中棕色球表示N連碳水化合物修飾Fig1-3RibbondiagramoftheflavivirusEproteindimerIndividualdomainsoftheEproteinareindicated,asisthefusionloopatthedistalendofE-DⅡ.TheN-linkedcarbohydratemodificationsonEareshownasbrownspheres.NS1蛋白的分子量約為40KDa，是一個多功能糖蛋白，不僅可被糖基化修飾，也可以形成二聚體分泌到胞外。NS1功能具有多樣性，在病毒早期復制中發(fā)揮重要作
【參考文獻】：
期刊論文
[1]鴨坦布蘇病毒的血凝性[J]. 王小蕾,劉月煥,段會娟,劉立新,楊志遠,趙際成,潘潔,劉瑞華,趙文奇,田方杰,呂金寶,林健. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2019(23)
[2]一例鴨坦布蘇病的診治[J]. 江敏生,陳盛絮. 中國畜牧獸醫(yī)文摘. 2018(02)
[3]鴨坦布蘇病毒分離鑒定及全基因組序列分析[J]. 王賓賓,閆大為,倪欣濤,李雪松,滕巧泱,楊健美,陳鴻軍,劉芹防,李澤君. 中國動物傳染病學報. 2017(06)
[4]實時熒光定量TaqMan RT-PCR檢測鴨坦布蘇病毒方法的建立及初步應用[J]. 劉洋,霍斯琪,王傳彬,楊林,張倩,劉玉良,馬英,顧小雪. 中國家禽. 2017(20)
[5]一例蛋鴨黃病毒病診治[J]. 劉波,劉娜,孔令靜,張棟,宦者威,陳月鋒,谷桂平,楊俊青. 中國畜禽種業(yè). 2017(06)
[6]鴨坦布蘇病毒的分離和PCR鑒定[J]. 曹宗喜,賀冬梅,葉保國,張艷,楊少雄,陳朝喜,林哲敏. 江蘇農(nóng)業(yè)科學. 2017(05)
[7]鴨坦布蘇病毒E基因重組桿狀病毒的構(gòu)建與間接ELISA檢測方法的建立[J]. 王善輝,謝金文,強成魁,呂顏枝,李云龍. 中國家禽. 2016(01)
[8]鴨胚中鴨坦布蘇病毒的分離與鑒定[J]. 李芳韜,江蕾,王雪梅,郭柳川,王兆山,刁有祥. 中國家禽. 2015(24)
[9]一例蛋鴨黃病毒病的診治[J]. 劉強,顧海豐. 湖北畜牧獸醫(yī). 2015(03)
[10]H9亞型禽流感病毒和鴨坦布蘇病毒二重PCR檢測方法的建立[J]. 趙虹,謝芝勛,謝麗基,劉加波,鄧顯文,謝志勤,龐耀珊,范晴,羅思思. 中國畜牧獸醫(yī). 2014(10)
博士論文
[1]黃病毒復制缺陷病毒的構(gòu)建及sfRNA產(chǎn)生機制研究[D]. 張秋艷.中國科學院大學(中國科學院武漢病毒研究所) 2019
[2]坦布蘇病毒感染對鴨胚成纖維細胞生物學功能的影響及其機制研究[D]. 于觀留.山東農(nóng)業(yè)大學 2019
[3]鴨坦布蘇病毒細胞適應毒免疫原性及致弱分子基礎(chǔ)研究[D]. 章麗嬌.中國農(nóng)業(yè)大學 2017
[4]坦布蘇病毒ZC株感染性克隆的構(gòu)建和部分3’非編碼區(qū)功能的初步研究[D]. 陳浩.山東農(nóng)業(yè)大學 2015
[5]坦布蘇病毒的分離鑒定及重組腺病毒介導shRNA抑制坦布蘇病毒在體外復制的研究[D]. 唐熠.山東農(nóng)業(yè)大學 2013
碩士論文
[1]鴨坦布蘇病毒NS1蛋白互作宿主蛋白的篩選及驗證[D]. 王振忠.山東農(nóng)業(yè)大學 2018
[2]鴨坦布蘇病毒NS1蛋白的原核表達與應用[D]. 潘異哲.江西農(nóng)業(yè)大學 2014
[3]鴨坦布蘇病毒的分離、致病性及細胞適應研究[D]. 張玥.東北農(nóng)業(yè)大學 2013
[4]鴨坦布蘇病毒分離鑒定及其生物學特性的研究[D]. 顏丕熙.中國農(nóng)業(yè)科學院 2012
本文編號：3029220
本文鏈接：http://sikaile.net/shoufeilunwen/benkebiyelunwen/3029220.html
最近更新
教材專著
