光系統(tǒng)II高分辨率晶體結(jié)構(gòu)從原子水平上揭示了包括Mn₄CaO₅簇在內(nèi)的蛋白復(fù)合體的結(jié)構(gòu),特別是一些重要的氨基酸它們可能在光合水氧化過程中有著重要的調(diào)控作用。其中D1蛋白中D1-N338和D1-S268分別是供體側(cè)錳簇和受體側(cè)非血素鐵的周圍氫鍵網(wǎng)絡(luò)上的重要氨基酸殘基,很可能參與光合水氧化過程中質(zhì)子的轉(zhuǎn)運。為了研究它們在水氧化過程中的功能,本文以嗜熱藍(lán)藻Thermosynechococcus vulcanus為研究材料,以D1-N338位點和D1-S268位點為主要研究對象,采用定點突變的方法,構(gòu)建了多個嗜熱藍(lán)藻位點突變體,并運用波譜學(xué)、氧電極、葉綠素?zé)晒馑p動力學(xué)等手段對突變體功能進(jìn)行了深入研究,揭示了這些氨基酸可能對維持正常的光合水氧化功能具有重要意義（嗜熱藍(lán)藻野生型含有3個同源基因同時編碼D1蛋白,分別是psbA₁、psbA₂、psbA₃。實驗中我們選擇敲除psbA₁和psbA₂基因,獲得WT*（psbA₃–S... 

【文章來源】：河北科技大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 光合作用
    1.2 光系統(tǒng)PSⅡ結(jié)構(gòu)
4CaO₅）結(jié)構(gòu)">    1.3 放氧復(fù)合物錳簇（Mn₄CaO₅）結(jié)構(gòu)
    1.4 發(fā)生在PSⅡ中的電子傳遞和S態(tài)循環(huán)
    1.5 選題研究開展的目的和意義
第2章 材料和方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 藻種
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 藻種的培養(yǎng)
r的定點突變">        2.2.2 質(zhì)粒載體pUC18-psbA3-Sm^r的定點突變
        2.2.3 藍(lán)藻細(xì)胞中導(dǎo)入定點突變質(zhì)粒載體（自然轉(zhuǎn)化法）
        2.2.4 突變體單克隆鑒定
        2.2.5 嗜熱藍(lán)藻光系統(tǒng)Ⅱ的提取
        2.2.6 葉綠素含量測定
        2.2.7 放氧活性測定
        2.2.8 藍(lán)藻突變體細(xì)胞光合自養(yǎng)生長情況
        2.2.9 突變體藍(lán)藻細(xì)胞的光譜特征測定
        2.2.10 葉綠素?zé)晒馑p動力學(xué)測定
        2.2.11 聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）
第3章 結(jié)果與分析
3–Sm^r質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化">    3.1 pUC18-psbA₃–Sm^r質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化
    3.2 突變體生長曲線
    3.3 突變體細(xì)胞放氧活性測定
    3.4 突變體細(xì)胞pH依賴放氧活性
    3.5 室溫吸收光譜
    3.6 77K低溫?zé)晒夤庾V
    3.7 葉綠素?zé)晒夤庾V實驗
    3.8 野生型藍(lán)藻和突變體光系統(tǒng)Ⅱ核心提取及樣品放氧活性
第4章 討論
    4.1 突變位點的選擇
    4.2 生長曲線以及放氧活性測定
    4.3 閃光誘導(dǎo)葉綠素?zé)晒馑p動力學(xué)測定電子傳遞速率
    4.4 突變體PSⅡ核心的提取及分析
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
個人簡歷



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