海洋芽孢桿菌（Bacillus marinus） B-9987是從我國(guó)渤海潮間帶植物鹽地堿蓬（Suaeda salsa）的根中分離得到的內(nèi)生細(xì)菌,具有產(chǎn)生豐富次級(jí)代謝產(chǎn)物的能力,其中能夠產(chǎn)生豐富的Macrolactins化合物。該類(lèi)化合物是一系列24元大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)化合物,其骨架是由反式酰基轉(zhuǎn)移酶的聚酮合酶組裝而成,之后經(jīng)過(guò)后修飾步驟,如�；⑻腔�,形成不同的Macrolactins化合物。本論文以海洋芽孢桿菌B-9987為研究對(duì)象,采用生物信息學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、天然產(chǎn)物化學(xué)等手段,對(duì)Macrolactins生物合成相關(guān)基因及關(guān)鍵酶進(jìn)行了功能研究,具體研究工作如下：一方面,對(duì)Macrolactins生物合成相關(guān)調(diào)控基因進(jìn)行了定位與初步的功能研究。采用生物信息學(xué)手段對(duì)海洋芽孢桿菌B-9987的基因組中可能與Macrolactins生物合成相關(guān)調(diào)控基因的分析結(jié)果表明基因bm0677編碼了一個(gè)GntR家族的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。進(jìn)一步,采用雙交換同源重組和基因高表達(dá)策略研究了調(diào)控基因bm0677的功能。對(duì)野生株、突變株和高表達(dá)株進(jìn)行發(fā)酵,經(jīng)HPLC分析發(fā)現(xiàn),隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng),在同一發(fā)酵時(shí)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 研究背景
    1.2 海洋來(lái)源的芽孢桿菌產(chǎn)生的活性物質(zhì)
        1.2.1 脂肽類(lèi)化合物
        1.2.2 異香豆素類(lèi)
        1.2.3 脂肪酸類(lèi)
        1.2.4 聚酮類(lèi)化合物
        1.2.5 糖苷類(lèi)
    1.3 糖基轉(zhuǎn)移酶
        1.3.1 糖基轉(zhuǎn)移酶的結(jié)構(gòu)類(lèi)型
        1.3.2 糖基轉(zhuǎn)移酶的分類(lèi)
        1.3.3 糖基轉(zhuǎn)移酶的作用機(jī)制及糖基側(cè)鏈改造
    1.4 Macrolactins生物合成研究
    1.5 課題研究目的及意義
第二章 海洋芽孢桿菌B-9987中Macrolactins生物合成相關(guān)調(diào)控基因的研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 菌株與質(zhì)粒
        2.2.2 引物
        2.2.3 所用培養(yǎng)基和生化試劑
        2.2.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取
        2.3.2 芽孢桿菌質(zhì)粒DNA的提取
        2.3.3 芽孢桿菌總DNA的提取
        2.3.4 瓊脂糖凝膠電泳中DNA片段的膠回收（參照OMEGA試劑盒說(shuō)明書(shū)）
        2.3.5 連接反應(yīng)
        2.3.6 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及電轉(zhuǎn)化
        2.3.7 大腸桿菌中質(zhì)粒的快速抽提檢測(cè)
        2.3.8 海洋芽孢桿菌B-9987電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的制備及電轉(zhuǎn)化
        2.3.9 PCR及相關(guān)技術(shù)
        2.3.10 B-9987發(fā)酵及發(fā)酵液的HPLC分析
        2.3.11 生物膜觀察
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 bm0677基因的生物信息學(xué)分析
        2.4.2 基因bm0677的雙交換阻斷突變株的構(gòu)建
        2.4.3 基因bm0677的高表達(dá)株的構(gòu)建
        2.4.4 突變株和高表達(dá)株的表型分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 BmmGT1酶反應(yīng)條件研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        3.2.2 所用培養(yǎng)基
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 酶反應(yīng)底物的制備
        3.3.2 蛋白質(zhì)的表達(dá)純化
        3.3.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳
        3.3.4 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 酶反應(yīng)底物Macrolactin A的制備分離
        3.4.2 BmmGT1的純化表達(dá)
        3.4.3 BmmGT1的酶反應(yīng)條件的摸索
    3.5 本章小結(jié)
第四章 新穎結(jié)構(gòu)Macrolactins的制備及結(jié)構(gòu)鑒定
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 糖基化產(chǎn)物的分離方法
    4.4 結(jié)構(gòu)解析
        4.4.1 化合物10的結(jié)構(gòu)解析
        4.4.2 化合物11的結(jié)構(gòu)解析
        4.4.3 化合物12的結(jié)構(gòu)解析
        4.4.4 化合物13結(jié)構(gòu)解析
    4.5 本章小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 工作總結(jié)
    5.2 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    5.3 工作展望
參考文獻(xiàn)
致謝
符號(hào)簡(jiǎn)寫(xiě)（Abbreviation）



本文編號(hào)：2960849