蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis,簡稱Bt）,從1956年開始商業(yè)化生產(chǎn)至今,已廣泛應(yīng)用于防治農(nóng)林病蟲害,是一種應(yīng)用成功的微生物殺蟲劑,它的安全性關(guān)系到全人類的健康。而與它親緣性很近的蠟狀芽胞桿菌（Bacillus cereus,簡稱Bc）是眾人周知的條件致病菌,它所產(chǎn)生的腸毒素是引起腹瀉的重要因素之一,研究表明,Bt中也廣泛存在腸毒素基因。所以本課題以Bt腸毒素的安全性為出發(fā)點(diǎn)進(jìn)行一系列研究,為Bt的安全應(yīng)用提供一定的理論基礎(chǔ)。采用6對引物對本室保存的40株不同來源的Bt菌株腸毒素基因(ent、hblA、 bceT、nheA、nheB、nheC進(jìn)行PCR檢測。結(jié)果表明,其中30株Bt全部含有這6個(gè)基因。而在這6個(gè)被檢腸毒素基因中,nheC基因的檢出率達(dá)到100%, nheA、 nheB基因的檢出率僅低于nheC基因,達(dá)到95%,檢出率最低的是bceT基因,也達(dá)到了82.5%,此外,hblA基因及ent基因的檢出率分別為87.5%、90%,這說明腸毒素基因確實(shí)廣泛存在于Bt中。以BRC-LLP29及BRC-XQ9為模板,克隆腸毒素基因ent.hblA、hbl... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1 蘇云金芽胞桿菌
        1.1 蘇云金芽胞桿菌的發(fā)展史
        1.2 蘇云金芽胞桿菌的分布
        1.3 蘇云金芽胞桿菌的應(yīng)用
        1.4 蘇云金芽胞桿菌的生物活性成分
        1.5 蘇云金芽胞桿菌的殺蟲效果
        1.6 蘇云金芽胞桿菌對生態(tài)系統(tǒng)的影響
    2 蘇云金芽胞桿菌腸毒素研究現(xiàn)狀
        2.1 腸毒素種類
        2.2 國內(nèi)外蘇云金芽胞桿菌腸毒素的檢測情況
        2.3 蘇云金芽胞桿菌腸毒素全長基因的克隆及序列分析
        2.4 蘇云金芽胞桿菌腸毒素的活性檢測
    3 蘇云金芽胞桿菌與蠟質(zhì)芽胞桿菌
        3.1 蘇云金芽胞桿菌與蠟質(zhì)芽胞桿菌的親緣性
        3.2 蘇云金芽胞桿菌與蠟質(zhì)芽胞桿菌的安全性
    4 毒素調(diào)控因子PlcR
    5 本課題的研究目的及意義
第二章 Bt腸毒素基因檢測
    1 材料與方法
        1.1 供試菌株
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 酶與試劑
        1.4 方法和步驟
    2 結(jié)果與分析
    3 討論與小結(jié)
第三章 Bt腸毒素基因克隆與序列分析
    1 材料與方法
        1.1 供試菌株
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 酶與試劑
        1.4 方法和步驟
    2 結(jié)果與分析
        2.1 ent基因編碼的氨基酸序列比對分析
        2.2 hblA基因編碼的氨基酸序列比對分析
        2.3 hblB基因編碼的氨基酸序列比對分析
        2.4 hblD基因編碼的氨基酸序列比對分析
        2.5 nheA基因編碼的氨基酸序列比對分析
    3 討論與小結(jié)
第四章 Bt NheA蛋白表達(dá)及活性測定
    1 材料與方法
        1.1 供試菌株及小鼠
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 酶與試劑
        1.4 方法和步驟
    2 結(jié)果與分析
        2.1 NheA-pET32a融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2 Tecra BDE VIA試劑盒檢測腸毒素活性
        2.3 小鼠飼養(yǎng)觀察及體重比較
        2.4 小鼠解剖觀察
    3 討論與小結(jié)
第五章 Btplcr基因敲除
    1 材料與方法
        1.1 供試菌株
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 酶與試劑
        1.4 方法和步驟
    2 結(jié)果與分析
        2.1 Btplcr基因敲除載體構(gòu)建
        2.2 plcr基因電轉(zhuǎn)化
    3 討論與小結(jié)
第六章 討論與總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：2947208