鴨疫里默氏桿菌（Riemerellaanatipestifer,RA）是引起雛鴨傳染性漿膜炎的細菌病原,也可導致鵝、火雞、鵪鶉等多種動物發(fā)病。是養(yǎng)鴨業(yè)中最常見的疾病之一,鴨一旦發(fā)病常造成嚴重的經(jīng)濟損失。鴨傳染性漿膜炎防控是養(yǎng)鴨業(yè)中的難題,一是通過抗生素防治鴨疫里默氏桿菌,但鴨疫里默氏桿菌耐藥性日益突出;二是以疫苗免疫防控鴨疫里默氏桿菌,但現(xiàn)有研究表明鴨疫里默氏桿菌血清型眾多,各個血清型間缺乏交叉保護,進而導致絕大多數(shù)疫苗只對同種血清型間流行株具有較好的保護作用,而對不同血清型間流行株保護力作用較小甚至于完全無保護力。因此,為了有效防控該病,需要進一步開展鴨疫里默氏桿菌的生物學特性研究,為防治鴨疫里默氏桿菌提供理論依據(jù)。本試驗對重慶三個區(qū)縣鴨場來源病料,分離鑒定鴨疫里默氏桿菌流行株,采用ERIC（Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus,腸桿菌基因間保守重復序列）PCR技術(shù)進行分離株分子分型,敏感抗菌素的篩選和耐藥基因的檢測,對分離株采用CAS（Chrome azurol sulfonate,鉻天青）檢測法進行鐵載體分泌能力檢測;克隆... 

【文章來源】：西南大學重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

菌落在巧克力平板的生長形態(tài)及革蘭氏染色鏡檢結(jié)果

西南大學碩士學位論文143.2.4ERIC-PCR基因分型根據(jù)文獻[49]ERIC-1（5-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3’）和ERICR-2(5’-AAGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3’)序列送生物公司合成引物。PCR擴增條件與體系見表3-4，擴增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠電泳中檢測，對結(jié)果進行聚類分析。表3-4ERIC-PCR分型擴增條件與體系Table3-4ERIC-PCRtypingandamplificationconditionsandsystem擴增條件反應體系步驟溫度（℃）時間（min）試劑名稱體積3.3試驗結(jié)果3.3.1細菌分離結(jié)果分離株在巧克力培養(yǎng)基上生長形態(tài)、革蘭氏染色鏡檢結(jié)果如圖3-5所示。圖3-5菌落在巧克力平板的生長形態(tài)及革蘭氏染色鏡檢結(jié)果Fig3-5GrowthmorphologyofcolonyonchocolateplateandtheresultsofGramstainingmicroscopy預變性955PremixTaqTM25變性950.45上下游引物各2退火見引物報告單235個循環(huán)模板DNA4延伸723雙蒸水17終延伸7210合計50

第3章鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定153.3.216SrRNA、ompA、DnaB基因PCR擴增結(jié)果分離純化后的細菌，16SrRNA擴增結(jié)果與預期目的片段大小一致，為1500bp。部分擴增結(jié)果如圖3-6，將測序結(jié)果與GenBank收錄的基因序列進行比對，鑒定出30株鴨疫里默氏桿菌。構(gòu)建鴨疫里默氏桿菌的遺傳進化樹，結(jié)果如圖3-7。對分離株進行特異性引物（ompA、DnaB）擴增，電泳檢測，結(jié)果與預期目的片段大小一致，ompA為1164bp，DnaB為470bp，結(jié)果如圖3-8，3-9。圖3-6部分菌株16SrRNA基因擴增結(jié)果Fig3-6Amplificationresultsof16SrRNAGeneofsomestrains圖3-7分離株16SrRNA基因遺傳進化樹Fig3-7Phylogenetictreeof16SrRNAGeneofisolate


本文編號：2946819