鴨疫里默氏桿菌（Riemerellaanatipestifer,RA）是引起雛鴨傳染性漿膜炎的細(xì)菌病原,也可導(dǎo)致鵝、火雞、鵪鶉等多種動(dòng)物發(fā)病。是養(yǎng)鴨業(yè)中最常見的疾病之一,鴨一旦發(fā)病常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。鴨傳染性漿膜炎防控是養(yǎng)鴨業(yè)中的難題,一是通過抗生素防治鴨疫里默氏桿菌,但鴨疫里默氏桿菌耐藥性日益突出;二是以疫苗免疫防控鴨疫里默氏桿菌,但現(xiàn)有研究表明鴨疫里默氏桿菌血清型眾多,各個(gè)血清型間缺乏交叉保護(hù),進(jìn)而導(dǎo)致絕大多數(shù)疫苗只對同種血清型間流行株具有較好的保護(hù)作用,而對不同血清型間流行株保護(hù)力作用較小甚至于完全無保護(hù)力。因此,為了有效防控該病,需要進(jìn)一步開展鴨疫里默氏桿菌的生物學(xué)特性研究,為防治鴨疫里默氏桿菌提供理論依據(jù)。本試驗(yàn)對重慶三個(gè)區(qū)縣鴨場來源病料,分離鑒定鴨疫里默氏桿菌流行株,采用ERIC（Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus,腸桿菌基因間保守重復(fù)序列）PCR技術(shù)進(jìn)行分離株分子分型,敏感抗菌素的篩選和耐藥基因的檢測,對分離株采用CAS（Chrome azurol sulfonate,鉻天青）檢測法進(jìn)行鐵載體分泌能力檢測;克隆... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

菌落在巧克力平板的生長形態(tài)及革蘭氏染色鏡檢結(jié)果

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文143.2.4ERIC-PCR基因分型根據(jù)文獻(xiàn)[49]ERIC-1（5-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3’）和ERICR-2(5’-AAGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3’)序列送生物公司合成引物。PCR擴(kuò)增條件與體系見表3-4，擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠電泳中檢測，對結(jié)果進(jìn)行聚類分析。表3-4ERIC-PCR分型擴(kuò)增條件與體系Table3-4ERIC-PCRtypingandamplificationconditionsandsystem擴(kuò)增條件反應(yīng)體系步驟溫度（℃）時(shí)間（min）試劑名稱體積3.3試驗(yàn)結(jié)果3.3.1細(xì)菌分離結(jié)果分離株在巧克力培養(yǎng)基上生長形態(tài)、革蘭氏染色鏡檢結(jié)果如圖3-5所示。圖3-5菌落在巧克力平板的生長形態(tài)及革蘭氏染色鏡檢結(jié)果Fig3-5GrowthmorphologyofcolonyonchocolateplateandtheresultsofGramstainingmicroscopy預(yù)變性955PremixTaqTM25變性950.45上下游引物各2退火見引物報(bào)告單235個(gè)循環(huán)模板DNA4延伸723雙蒸水17終延伸7210合計(jì)50

第3章鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定153.3.216SrRNA、ompA、DnaB基因PCR擴(kuò)增結(jié)果分離純化后的細(xì)菌，16SrRNA擴(kuò)增結(jié)果與預(yù)期目的片段大小一致，為1500bp。部分?jǐn)U增結(jié)果如圖3-6，將測序結(jié)果與GenBank收錄的基因序列進(jìn)行比對，鑒定出30株鴨疫里默氏桿菌。構(gòu)建鴨疫里默氏桿菌的遺傳進(jìn)化樹，結(jié)果如圖3-7。對分離株進(jìn)行特異性引物（ompA、DnaB）擴(kuò)增，電泳檢測，結(jié)果與預(yù)期目的片段大小一致，ompA為1164bp，DnaB為470bp，結(jié)果如圖3-8，3-9。圖3-6部分菌株16SrRNA基因擴(kuò)增結(jié)果Fig3-6Amplificationresultsof16SrRNAGeneofsomestrains圖3-7分離株16SrRNA基因遺傳進(jìn)化樹Fig3-7Phylogenetictreeof16SrRNAGeneofisolate


本文編號(hào)：2946819