N6-甲基腺苷（m⁶A）是一種普遍存在于真核生物mRNA中的表觀遺傳學(xué)修飾,其生物學(xué)功能受到甲基轉(zhuǎn)移酶、去甲基酶和識(shí)別蛋白的調(diào)控,呈現(xiàn)一種動(dòng)態(tài)并可逆的表達(dá)模式。m⁶A對(duì)哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的成熟及早期胚胎發(fā)育有重要的作用,敲除某個(gè)m⁶A修飾相關(guān)的酶會(huì)影響的卵母細(xì)胞成熟和胚胎發(fā)育,然而許多參與m⁶A生物學(xué)功能的酶在卵母細(xì)胞成熟和胚胎發(fā)育中的作用仍然未知。因此,m⁶A修飾在卵母細(xì)胞和胚胎發(fā)育過程中的調(diào)控作用成為近幾年研究的熱點(diǎn)。YTHDF2是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的m⁶A識(shí)別蛋白,可以與m⁶A結(jié)合并影響mRNA的穩(wěn)定性,促進(jìn)mRNA的降解。Ythdf2可以通過調(diào)節(jié)母體轉(zhuǎn)錄物的劑量來影響卵母細(xì)胞的發(fā)育能力以及合子基因組的激活過程。miRNA是一種長度約為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA,在基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中有廣泛的作用。在癌癥中已經(jīng)報(bào)道m(xù)iRNA調(diào)控YTHDF2來影響細(xì)胞的增殖和遷移,而miRNA是否可以調(diào)控Ythdf2來影響配子發(fā)生和胚胎發(fā)育至今未有報(bào)道。... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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Ythdf2對(duì)卵母細(xì)胞成熟和質(zhì)量的影響

第二篇研究內(nèi)容第一章MiR-145-5p調(diào)控Ythdf2對(duì)小鼠卵母細(xì)胞成熟的影響22注：（A）注射si-Ythdf2后卵母細(xì)胞中Ythdf2的mRNA表達(dá)水平。（B）抑制Ythdf2后卵母細(xì)胞的成熟率。（C-D）抑制Ythdf2表達(dá)的卵母細(xì)胞孤雌激活后的胚胎卵裂率和囊胚率。***或ns都是與Con組比較，n代表每組統(tǒng)計(jì)的胚胎數(shù)量。2.2miR-145-5p調(diào)控卵母細(xì)胞中Ythdf2的表達(dá)miR-145-5p調(diào)控Ythdf2在肝癌細(xì)胞中已經(jīng)得到驗(yàn)證，為了驗(yàn)證在卵母細(xì)胞中也存在同樣的調(diào)控作用，將GV期卵母細(xì)胞分四組，以未處理的的卵母細(xì)胞作為Con組，其余的卵母細(xì)胞分別注射miR-145-5pNegative、miR-145-5pmimics和miR-145-5pinhibitor，培養(yǎng)卵母細(xì)胞至成熟，用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測Ythdf2mRNA水平以及miR-145-5p表達(dá)情況。結(jié)果顯示，卵母細(xì)胞注射miR-145-5pmimics后顯著提高了miR-145-5p的表達(dá)水平，注射miR-145-5pinhibitor后顯著降低了miR-145-5p的表達(dá)水平（圖1.2A）。miR-145-5pmimics顯著抑制了Ythdf2的mRNA表達(dá)水平，相反，miR-145-5pinhibitor顯著提高了Ythdf2的mRNA表達(dá)水平（圖1.2B）。這表明在小鼠卵母細(xì)胞中miR-145-5p對(duì)Ythdf2為負(fù)調(diào)控作用。圖1.2miR-145-5p調(diào)控卵母細(xì)胞中Ythdf2的表達(dá)Figure1.2miR-145-5pregulatesYthdf2expressioninoocytes注：（A-B）卵母細(xì)胞中注射miR-145-5pNegative、miR-145-5pmimics和miR-145-5pinhibitor后miR-145-5p和Ythdf2的表達(dá)水平。***或ns都是與Con組比較。2.3miR-145-5p調(diào)控Ythdf2影響卵母細(xì)胞發(fā)育能力已經(jīng)確定抑制Ythdf2會(huì)降低卵母細(xì)胞的質(zhì)量，并損害早期胚胎的發(fā)育，為了研究miR-145-5p調(diào)控Ythdf2對(duì)小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育能力的影響。將GV期卵母細(xì)胞分五組，以未處理的的卵母細(xì)胞作為Con組，其余的卵母細(xì)胞分別注射

顯著差異（圖1.3A）。與si-Ythdf2組相比，si-Ythdf2+miR-145-5pinhibitor組的胚胎卵裂率（53.84±2.88%和87.36±2.10%）和囊胚率（10.40±1.21%和19.96±1.67%）顯著提高，與Con組、NC組和miR-145-5pinhibitor組相比，胚胎卵裂率（89.98±2.21%，89.74±1.45%，87.12±2.33%和87.36±2.10%）和囊胚率（21.06±1.05%，20.88±1.06%，21.52±1.74%，和19.96±1.67%）則沒有顯著的差異（圖1.2B,C）。這表明小鼠卵母細(xì)胞缺乏Ythdf2的表達(dá)時(shí)，抑制miR-145-5p可以使Ythdf2的表達(dá)恢復(fù)到正常水平，并且提高了卵母細(xì)胞的發(fā)育能力。圖1.3miR-145-5p調(diào)控Ythdf2影響卵母細(xì)胞發(fā)育能力Figure1.3miR-145-5paffectsoocytedevelopmentalabilitybytargetingYthdf2注：（A）卵母細(xì)胞中注射NegativesiRNA、Ythdf2siRNA、miR-145-5pinhibitor、si-Ythdf2與miR-145-5pinhibitor的混合物后Ythdf2的mRNA表達(dá)水平。（B-C）卵母細(xì)胞中注射NegativesiRNA、Ythdf2siRNA、miR-145-5pinhibitor、si-Ythdf2與miR-145-5pinhibitor的混合物后進(jìn)行孤雌激活，激活后胚胎的卵裂率和囊胚率。***或ns都是與Con組比較，n代表每組統(tǒng)計(jì)的胚胎數(shù)量。2.4抑制miR-145-5p對(duì)胚胎凋亡的影響胚胎囊胚率的降低可能是由于胚胎發(fā)生凋亡引起的，為了研究miR-145-5p調(diào)控Ythdf2對(duì)胚胎凋亡的影響。將GV期卵母細(xì)胞分五組，以未處理的的卵母細(xì)胞作為Con組，其余的卵母細(xì)胞分別注射NegativesiRNA、Ythdf2siRNA、miR-

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]敲低MGC-803胃癌細(xì)胞YTHDF2抑制其增殖并促進(jìn)其凋亡[J]. 張杰,皮靜楠,劉越,余佳,馮濤.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2017(12)
[2]Liquid biopsies for liquid tumors: emerging potential of circulating free nucleic acid evaluation for the management of hematologic malignancies[J]. Jay Hocking,Sridurga Mithraprabhu,Anna Kalff,Andrew Spencer.  Cancer Biology & Medicine. 2016(02)



本文編號(hào)：2932221