發(fā)布時間：2020-12-11 05:59

　　鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer,RA）屬接觸類傳染性疾病,感染多數(shù)禽類,發(fā)病后造成纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎和腦膜炎等癥狀。侵害1-8周齡鴨,對養(yǎng)鴨業(yè)造成極大威脅。本研究旨在建立一種高效疫苗菌株篩選方法,和傳統(tǒng)疫苗菌株篩選方法相比大幅度降低了工作量和成本,為疫苗研制工作提供有力的技術(shù)手段。具有強致病力的菌株通常免疫保護效果較好,在某種細菌研究背景知識模糊,毒力因子尚不明確時,疫苗菌株的篩選方法通常的是,依次對各個分離株進行毒力的測定,常用不同劑量的細菌感染動物,通過測定最小致死量（MLD）或半數(shù)致死量(LD₅₀),還可以用最小感染量（MID）或半數(shù)感染量(EID₅₀)來評價。這些方法都需要將臨床分離的細菌一一測定,工作量較大,比較費時費力,限制了對比菌株的數(shù)量。因此建立一種高效疫苗菌株篩選方法對疫苗研制工作有舉足輕重的影響。本研究方法以鴨疫里默氏桿菌為例,以某集團實驗室保存的若干RA菌株為樣本,利用鴨疫里默氏桿菌的CRISPR序列作為識別標簽,設(shè)計引物RAC2-F/RAC2-R并能夠成功擴增不同血清型RA... 

【文章來源】：河北科技師范學(xué)院河北省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RA菌落形態(tài)

第二章RA培養(yǎng)鑒定142.3.2結(jié)晶紫染色對鴨疫里默氏桿菌進行結(jié)晶紫染色，鏡檢如圖2-2所示，RA為短小的桿狀，多呈單個散在排列，或呈雙或短鏈狀排列。在RA培養(yǎng)過程中，一般易受大腸桿菌污染，結(jié)晶紫染色圖像可較為粗略地驗證RA在培養(yǎng)過程中是否被污染，區(qū)別常見的大腸桿菌污染。但準確鑒定其細菌的單一性，還是依靠于PCR鑒定。圖2-2RA結(jié)晶紫染色圖FIG.2-2RAcrystalvioletstaining2.3.3PCR鑒定對鴨疫里默氏桿菌利用兩對引物（190F/843R、gyrbp1/gyrbp2）進行PCR驗證，如圖2-3所示，在644bp和194bp處出現(xiàn)明顯的雙條帶，并且沒有非特異性條帶的出現(xiàn)。圖2-3PCR擴增RA片段FIG.2-3PCRamplificationofRAfragmentM：DNAMarkerDL2000；RA：鴨疫里默氏桿菌

第二章RA培養(yǎng)鑒定142.3.2結(jié)晶紫染色對鴨疫里默氏桿菌進行結(jié)晶紫染色，鏡檢如圖2-2所示，RA為短小的桿狀，多呈單個散在排列，或呈雙或短鏈狀排列。在RA培養(yǎng)過程中，一般易受大腸桿菌污染，結(jié)晶紫染色圖像可較為粗略地驗證RA在培養(yǎng)過程中是否被污染，區(qū)別常見的大腸桿菌污染。但準確鑒定其細菌的單一性，還是依靠于PCR鑒定。圖2-2RA結(jié)晶紫染色圖FIG.2-2RAcrystalvioletstaining2.3.3PCR鑒定對鴨疫里默氏桿菌利用兩對引物（190F/843R、gyrbp1/gyrbp2）進行PCR驗證，如圖2-3所示，在644bp和194bp處出現(xiàn)明顯的雙條帶，并且沒有非特異性條帶的出現(xiàn)。圖2-3PCR擴增RA片段FIG.2-3PCRamplificationofRAfragmentM：DNAMarkerDL2000；RA：鴨疫里默氏桿菌


本文編號：2910022