抗生素的廣泛使用使得高水平耐藥和多重耐藥病原菌大量出現(xiàn),急需開發(fā)有活性的新型化合物。從廈門杏林灣紅樹林周圍采集的海水和植物根際泥樣中,共分離得到72株海洋真菌,發(fā)酵培養(yǎng)后用乙酸乙酯提取獲得粗提物。以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、幽門螺旋桿菌和白色念珠菌為指示菌,對(duì)粗提物進(jìn)行高通量活性篩選,以乙酸乙酯粗提物的最小抑菌濃度作為參考,并結(jié)合高效液相(HPLC)指紋圖譜分析排重,共篩選出5株次級(jí)代謝產(chǎn)物豐富并有抗菌活性的潛力菌株。本研究重點(diǎn)對(duì)菌株MF180246和MF180262放大發(fā)酵培養(yǎng),通過減壓正向硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、半制備高效液相色譜等方法對(duì)粗提物分離純化,綜合利用質(zhì)譜(MS)、核磁共振波譜(NMR)、紫外光譜(UV)、圓二色譜(CD)和比旋光(OR)等方法確定化合物的結(jié)構(gòu),使用微量稀釋法對(duì)化合物進(jìn)行生物活性測(cè)試。對(duì)菌株MF180246次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究,共得到19個(gè)化合物,分別為asperbrunneo acid(1)、secalonic acid H(2)、secalonic acid D(3)、secalonic acid F(4)、secalonic acid F1(5)、penicillixanthone A(6)、chrysoxanthone C(7)、asperdichrome(8)、herbarulide(9)、大黃素(10)、tetrahydrofuranlactone derivative(11)、aspergillusol A(12)、3,4-二羥基苯乙酸(13)、4-羥基苯甲醛(14)、2-(4-羥基苯基)-乙醇(15)、vanillic acid(16)、3,4-二羥基苯甲酸(17)、2,5-二羥基苯乙酸甲酯(18)和1-苯基-1,2-乙二醇(19)�；衔�1為首次分離得到的新骨架天然產(chǎn)物。對(duì)菌株MF180262次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究,共得到13個(gè)化合物,分別為3-(5-甲氧基羰基戊基)-4-甲基呋喃-2,5-二酮(20)、兩種二聚己基衣康酸衍生物(21和22)、5,5'-二甲基-4,4',7,7'-四甲氧基-8,8'-雙香豆素(23)、fonsecinone A(24)、asperpyrones B(25)、aurasperone A(26)、asperpyrone C(27)、5,5'-二甲基-7-羥基-4,4',7'-三甲氧基-6,8'-雙香豆素(28)、pyrophen(29)、orlandin(30)、aspernigrin A(31)和asperitaconic acid B(32)�；衔�20、21和22為新結(jié)構(gòu)化合物,21和22為首次發(fā)現(xiàn)的己基衣康酸衍生物的二聚體。通過生物活性篩選試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)化合物24、26和27具有抗幽門螺旋桿菌的活性,最小抑菌濃度為16μg/mL。
【學(xué)位單位】：中國地質(zhì)大學(xué)(北京)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：Q935
【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

中國地質(zhì)大學(xué)（北京）碩士學(xué)位論文29柱對(duì)餾分O進(jìn)行分離，合并得到8個(gè)組分（O1~O8）。通過分析O1~O8的HPLC指紋圖譜，對(duì)O5進(jìn)一步分離純化。O5用甲醇溶解，過濾除去不溶物用高效液相色譜儀分離純化。采用AgilentZorbaxRX-C8色譜柱（250×9.4mm，5μm），流速3.0mL/min，乙腈濃度為30%等度洗脫13min得到O5A。O5A用甲醇溶解，用高效液相色譜儀分離純化。高效液相色譜條件：采用AgilentEclipseXDB-C8色譜柱（150×4.6mm，5μm），流速1.0mL/min，乙腈濃度為10%等度洗脫15min，檢測(cè)圖譜為254nm波長下的色譜圖，收集洗脫液減壓濃縮得到化合物18和19。O8用甲醇溶解，過濾除去不溶物用高效液相色譜儀分離純化。高效液相色譜條件：采用AgilentZorbaxRX-C8色譜柱（250×9.4mm，5μm），流速3.0mL/min，乙腈濃度為30%等度洗脫10min和乙腈濃度從30%~60%梯度洗脫5min，檢測(cè)圖譜為254nm波長下的色譜圖，收集峰值時(shí)間為10.821min的洗脫液，減壓濃縮得到化合物12。MF180246的分離流程如圖3-1：圖3-1MF180246粗提物分離流程3.3.4現(xiàn)代波譜技術(shù)純化的化合物根據(jù)其溶解度分別用Acetone-d6、Chloroform-d和DMSO-d6溶解，進(jìn)行核磁共振測(cè)試。核磁共振測(cè)試項(xiàng)目包括1HNMR譜、13CNMR譜、COSY譜、HMBC譜、HSQC譜和ROESY譜。綜合利用核磁共振（NMR）、質(zhì)譜（MS）、紫外光譜（UV）、比旋光（OR）和圓二色譜（CD）等現(xiàn)代波譜技術(shù)確定化合物的結(jié)構(gòu)。

第三章海洋真菌MF180246次級(jí)代謝產(chǎn)物研究303.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.4.1菌株信息菌株MF180246是從廈門杏林灣紅樹林周圍植物根際泥樣分離得到，其在PDA培養(yǎng)基上28℃培養(yǎng)7天的菌落形態(tài)如圖3-2所示。菌落生長快，表面呈黑色粉末狀，菌落明顯凸起于培養(yǎng)基，背面呈黃色，出現(xiàn)典型的曲霉屬Aspergillus真菌的菌落特征。圖3-2MF180246菌株形態(tài)BT測(cè)序結(jié)果如下：TGGTAAGCTCCAGCCTTTATCCCCTCTCCATCCCCCGTTATGGCTAACCCCCCACCAGGCAGACCATCTCCGGCGAACATGGCCTCGACGGCGACGGCGTGTCAGTGACCCAGCTGGCCCTCGACTCCTTCCCCTTCTGACATCCATCCTAGATACAATGGCACCTCCGACCTCCAGCTGGAGCGCATGAACGTCTACTTCAACGAAGCCGGCAACAACAAGTACGTGCCCCGCGCGGTGCTGGTTGATCTGGAGCCCGGTACGATGGACGCTCTGCGCTCCGGCCCCATGGGCGGCCTCTTCCGCCCCGACAACTACGTGTTCGGCCAGTCTGGTGCGGGCAACAACTGG得到的BT序列通過NCBI的BLAST系統(tǒng)進(jìn)行序列比對(duì)，選取適量的同源性較高的模式菌株序列，利用MEGA5.1使用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，步長檢驗(yàn)值設(shè)為1000，得到菌株MF180246的系統(tǒng)發(fā)育樹（圖3-3）。BLAST結(jié)果顯示，菌株MF180246與模式菌株AspergillusbrunneoviolaceusCCF108的序列相似性為99.43%，鑒定菌株MF180246為Aspergillusbrunneoviolaceus。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋艷霞;馬強(qiáng);李捷;;海洋Penicillium sp.FJ-1中一個(gè)抗真菌活性的新橙酮苷（英文）[J];中國中藥雜志;2015年06期

2 張書軍;焦炳華;;世界海洋藥物現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)[J];中國海洋藥物;2012年02期

3 胡毅;陳堅(jiān);許江;;臺(tái)灣海峽的海洋沉積環(huán)境研究進(jìn)展[J];海洋通報(bào);2011年05期

4 馬紅艷;李德海;顧謙群;朱天驕;;南極海洋真菌Penicillium chrysogenum PR4-1-3的活性次級(jí)代謝產(chǎn)物研究[J];中國海洋藥物;2011年04期

5 王軍;馬文哲;汪夕芳;周少耿;陳文禮;何錦華;賴小敏;林永成;;來自海南紅樹林內(nèi)生真菌ZSU-H85(L.K)的新蒽醌[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2010年04期

6 韋洪娟;林貞建;李德海;顧謙群;朱天驕;;單菌多次級(jí)代謝產(chǎn)物方法及其在微生物代謝產(chǎn)物研究中的應(yīng)用[J];微生物學(xué)報(bào);2010年06期

7 史清文;霍長虹;李力更;張嫚麗;;海洋天然產(chǎn)物化學(xué)研究的歷史回顧[J];中草藥;2009年11期

8 安士影;錢士輝;蔣建勤;;三棱的化學(xué)成分研究[J];中國野生植物資源;2009年04期

9 郭躍偉;;海洋天然產(chǎn)物和海洋藥物研究的歷史、現(xiàn)狀和未來[J];自然雜志;2009年01期

10 馬鴻雁;楊莉;張勉;王長虹;王崢濤;;單麻葉千里光中的一個(gè)新化學(xué)成分(英文)[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2008年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 Najeeb Akhter;海洋微生物來源具有生物活性的天然產(chǎn)物[D];浙江大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 夏麗娟;紅樹林活性真菌的篩選及兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究[D];廣東工業(yè)大學(xué);2013年

2 林濤;紅樹林來源海洋真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物及其生物活性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2874737