目的:探討代謝型谷氨酸受體6對人角質形成細胞吞噬功能的調節(jié)作用的影響。方法:1.人角質形成細胞體外培養(yǎng)。2.蛋白免疫印跡法檢測人角質形成細胞系(HaCaT)中代謝型谷氨酸受體6(metabotropic glutamate receptor 6,mGluR6)的表達。3.慢病毒轉染。利用慢病毒轉染法下調mGluR6基因在人角質形成細胞系中的表達,建立低表達穩(wěn)轉株(Lv-shmGluR6)及陰性對照(Lv-shCon)。5.利用掃描電鏡觀察Lv-shmGluR6組和Lv-shCon組細胞表面形態(tài),觀察細胞表面葉狀偽足數(shù)量的變化。6.用免疫熒光染色法處理各組細胞,用共聚焦顯微鏡觀察細胞微管蛋白的分布及變化。7.利用熒光微球模擬人角質形成細胞吞噬黑素小體的模型,并用共聚焦顯微鏡觀察吞噬情況。9.用流式細胞儀檢測Lv-shmGluR6組和Lv-shCon組細胞吞噬熒光微球能力。結果:1.HaCaT細胞中存在mGluR6的表達且表達量豐富。2.慢病毒轉染后HaCaT細胞中mGluR6蛋白水平明顯降低,mGluR6下調穩(wěn)轉株構建成功。3.mGluR6下調后HaCaT細胞表面葉狀偽足數(shù)量明顯減少。4.mGluR6下調后HaCaT細胞微管蛋白在細胞內的分布明顯變化,向細胞周邊聚集,靠近核周部位明顯減少,靠近細胞膜部位密集增多。5.mGluR6下調后HaCaT細胞吞噬熒光微球的量明顯減少。6.用熒光微球模擬HaCaT細胞吞噬黑素小體的模型,流式細胞儀檢測出mGluR6下調后其吞噬熒光微球的量減少。結論:1.HaCaT細胞中有mGluR6的表達。2.下調mGluR6后HaCaT細胞表面?zhèn)巫銛?shù)量減少。與此同時細胞的骨架蛋白分布也發(fā)生明顯變化,在核周的分布減少,多向細胞邊緣聚集。3.利用熒光微球成功模擬出HaCaT細胞吞噬黑素小體的模型。證明了HaCaT吞噬作用可能是黑素小體轉運的一個重要機制。4.利用激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀分別定性和定量的檢測出下調mGluR6后HaCaT吞噬熒光微球的能力下降。證明了mGluR6可能是影響HaCaT細胞吞噬作用的因素,發(fā)現(xiàn)了一個影響黑素小體轉運的可能的新機制,為色素性疾病的基因治療提供一個新的思路。
【學位單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R329.2
【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
材料和方法
結果
討論
結論
參考文獻
病例報告
    摘要
    Abstract
    前言
    病例資料和研究內容
    討論
    結論
    參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝

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本文編號：2860828