發(fā)布時(shí)間：2020-02-09 05:22

【摘要】：中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)和南極磷蝦(Euphausia superba)是具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的甲殼動(dòng)物。甲殼動(dòng)物體液內(nèi)無(wú)免疫球蛋白,也缺乏抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng),但是甲殼類動(dòng)物具有先天性免疫防御系統(tǒng),可預(yù)防病原微生物的侵襲。組織蛋白酶是一類溶酶體蛋白酶,主要分為絲氨酸類組織蛋白酶(如組織蛋白酶A,CatA)、半胱氨酸類組織蛋白酶(如組織蛋白酶B,CatB;組織蛋白酶H CatH;組織蛋白酶L,CatL)、天冬氨酸類組織蛋白酶(組織蛋白酶D,Cat D),參與蛋白質(zhì)水解、先天免疫防御反應(yīng)、抗原遞呈、細(xì)胞凋亡等生理活動(dòng)。本研究通過(guò)設(shè)置了一系列的影響中華絨螯蟹組織蛋白酶進(jìn)行酶促反應(yīng)的因素(浸提時(shí)間、pH、溫度、金屬離子以及激活劑與抑制劑),來(lái)探究各組織蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)。(1)中華絨螯蟹肝胰腺組織浸提時(shí)間達(dá)到120 min時(shí),Cat A和CatD的酶活達(dá)到最高,Cat B、CatH、CatL各自的最佳浸提時(shí)間分別為30 min、60 min、90 min。(2)CatA、CatB、CatL、CatD反應(yīng)的最適pH都為5,CatH的最適反應(yīng)pH為7,說(shuō)明組織蛋白酶主要為酸性蛋白酶。(3)CatA和CatB最適反應(yīng)溫度為45℃,CatH和CatD的最適反應(yīng)溫度55℃,CatL最適反應(yīng)溫度為65℃,說(shuō)明CatL耐高溫。(4)Mg2+對(duì)CatA無(wú)明顯作用,對(duì)CatB激活作用,對(duì)Cat H、CatL和CatD有抑制。而Ca2+、Mn2+、Pb2+、Cu2+、Zn2+對(duì)CatA、CatB、CatH、CatL和CatD均有不同程度的抑制作用。(5)DTT對(duì)CatA和CatD的活性具有一定的抑制作用,對(duì)CatB、Cat H和CatL有一定的激活作用。EDTA、E-64和亮抑蛋白酶肽則抑制CatA、CatB、CatH、CatL和Cat D活性,其中E-64和亮抑蛋白酶肽對(duì)半胱氨酸蛋白酶(CatB、CatH、CatL)的抑制作用較顯著。(6)中華絨螯蟹在注射Escherichia coli、Staphylococcus aureus和Saccharomyces cerevisiae12 h后,CatB、CatH、CatL和CatD的活性都顯著提高,CatA的活性顯著減低,說(shuō)明Cat A、CatB、CatH、Cat L和Cat D參與自身免疫防御反應(yīng)。南極磷蝦(E.superba)自身內(nèi)源性組織蛋白酶可以高效降解蛋白質(zhì),嚴(yán)重影響南極磷蝦(E.superba)的貯藏、運(yùn)輸與保鮮。研究南極磷蝦組織蛋白酶的一些基本性質(zhì),旨在為南極磷蝦的貯藏、運(yùn)輸與保鮮以及組織蛋白酶的應(yīng)用提供理論指導(dǎo)。因此通過(guò)研究南極磷蝦不同自溶條件(自溶時(shí)間、自溶pH、自溶溫度、金屬離子以及激活劑與抑制劑)的變化來(lái)探究CatB、CatH、Cat L、Cat D的酶活變化,從而達(dá)到控制自身蛋白降解的目的。(1)南極磷蝦在自溶30 min時(shí),Cat B和CatD的剩余酶活較高;自溶60 min時(shí),Cat H和CatL的剩余酶活較高。(2)南極磷蝦自溶緩沖液pH為5時(shí),CatB剩余酶活最高;自溶緩沖液pH為6時(shí),CatH剩余酶活最高;自溶緩沖液pH為4時(shí),CatL剩余酶活最高;自溶緩沖液pH為8時(shí),CatD剩余酶活最高。CatB、CatH、CatL、CatD在各自最適自溶緩沖液pH時(shí),均具有較高顯著性。(3)南極磷蝦在不同溫度(-20℃,0℃,20℃,40℃,60℃)下自溶,自溶溫度為0℃時(shí),Cat B和CatL的剩余酶活最高;自溶溫度為20℃時(shí),CatD的剩余酶活最高;自溶溫度為40℃時(shí),CatL的剩余酶活最高。(4)在南極磷蝦自溶緩沖液中加入濃度為5 mmol/L的Mg2+,Cat B、CatH和CatL被激活,Ca2+、Mn2+、Pb2+、Cu2+、Zn2+(濃度均為5 mmol/L)對(duì)其有抑制作用,且Mg2+相較于其他金屬離子顯著性差異較大。Mg2+和Zn2+對(duì)CatD無(wú)顯著性作用,Ca2+、Mn2+、Pb2+和Cu2+對(duì)Cat D具有抑制作用,Cu2+的抑制作用較為顯著。(5)在南極磷蝦自溶緩沖液中加入2 mmol/L的DTT和L-Cys可激活CatB、Cat H、Cat L和CatD的活性,EDTA(2 mmol/L)、E-64(0.1 mmol/L)和亮抑蛋白酶肽(0.1 mmol/L)則使CatB、CatH、CatL和CatD的活性受到抑制,E-64和亮抑蛋白酶肽對(duì)半胱氨酸蛋白酶(CatB、CatH和Cat L)的抑制較為顯著。
【學(xué)位授予單位】：青島科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q55

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2577716