【摘要】：哺乳動物的胚胎在體外早期發(fā)育過程中會發(fā)生發(fā)育阻滯、降低胚胎發(fā)育率并影響胚胎質(zhì)量,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,而活性氧類物質(zhì)(如H2O2)是造成這種現(xiàn)象的原因之一。目前被人們熟知的主要細(xì)胞凋亡通路是死亡受體通路、線粒體通路及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路,但Caspase-12是否參與活性氧引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所誘導(dǎo)胚胎凋亡過程仍不是很清楚,另一方面活性氧誘導(dǎo)小鼠早期胚胎發(fā)育凋亡過程中起主要作用的凋亡通路不明。因此本試驗的目的是證實活性氧誘導(dǎo)通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路的胚胎凋亡是否有Caspase-12參與,并探討不同活性氧水平及不同時期中凋亡通路的主次關(guān)系。試驗設(shè)置了小鼠早期胚胎內(nèi)部ROS水平低、中、高水平3個組,首先利用DCFH-DA法、TUNEL法驗證分組的正確性(檢測2-cell、4-cell及囊胚期),其次檢測Caspase-12基因的表達(dá),證實ROS誘導(dǎo)的小鼠早期胚胎凋亡是否有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路參與,最后檢測死亡受體通路的關(guān)鍵基因Caspase-8,線粒體凋亡通路的關(guān)鍵基因Caspase-9及Caspase-3的mRNA表達(dá)水平,探討ROS誘導(dǎo)的胚胎凋亡過程中不同凋亡通路的主次關(guān)系。實驗結(jié)果表明:體外組2-cell、4-cell及囊胚期胚胎的活性氧水平均高于體內(nèi)組的胚胎,H2O2處理組的胚胎均顯著高于其他兩組(P0.05),驗證了分組的正確性。H2O2處理組的凋亡指數(shù)顯著高于其他兩組、總細(xì)胞數(shù)顯著低于其他兩組(P0.05),進(jìn)一步驗證了隨著ROS水平的升高不僅影響了影響了凋亡指數(shù),從而影響了胚胎的質(zhì)量,為后續(xù)更好的研究提供基礎(chǔ)。其次檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路的啟動基因Caspase-12的表達(dá),證實了 Caspase-12參與活性氧引起的應(yīng)激過程。另外,無論ROS水平的高低,2-cell、4-cell期H2O2組誘導(dǎo)凋亡基因表達(dá)上調(diào)且死亡受體通路中的Caspase-8基因mRNA表達(dá)量最高;囊胚期基因表達(dá)雖然隨活性氧水平升高而增強(qiáng),但mRNA表達(dá)量上并無主次之分。而相同活性氧水平下,體內(nèi)組、體外組及H2O2組的caspase-8基因表達(dá)量最高。綜上所述,Caspase-12參與活性氧引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路應(yīng)激過程;在相同活性氧水平條件下各時期均以死亡受體通路為主。在不同活性氧水平條件下,2-cell期及4-cell期以死亡受體通路誘導(dǎo)胚胎凋亡為主,而囊胚期三條凋亡通路并無主次之分。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q132

【參考文獻(xiàn)】

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2 吳偉;徐蔚;;線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔結(jié)構(gòu)和功能的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)信息(上旬刊);2011年03期

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本文編號：2547613