發(fā)布時間：2018-10-22 13:41

【摘要】：藥用植物資源因其獨特的生物學(xué)性質(zhì)及豐富性,常用于人類和動物疾病的治療,在醫(yī)療衛(wèi)生保健方面發(fā)揮著非常重要的功能。有文獻報道,藥用植物中的中藥多糖在其生物學(xué)活性方面發(fā)揮著十分顯著的作用。從藥用植物組織和器官來源的內(nèi)生菌,它們作為非常豐富的細菌類群,通常與藥用宿主植物存在共生或共棲的關(guān)系。其能夠合成同宿主植物本身相似或相同的一些代謝物。因此,從藥用植物中分離純化內(nèi)生菌,研究其分泌的胞外多糖與宿主(藥用植物)多糖的結(jié)構(gòu)組成和功能差異是本論文研究的重點。黃精多糖和黃芪多糖本身具有獨特的生物學(xué)特性。本文對黃芪的根和黃精的根狀莖進行內(nèi)生菌分離鑒定,并在此基礎(chǔ)上分離純化出藥用植物內(nèi)生菌中產(chǎn)胞外多糖糖含量高的胞外多糖,并測定其結(jié)構(gòu)性質(zhì)和生物特性。通過對藥用植物的多糖與內(nèi)生菌的胞外多糖在結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性方面的比較,發(fā)現(xiàn)內(nèi)生菌胞外多糖與其宿主植物多糖在結(jié)構(gòu)和單糖組成上具有差異性,但具有許多相似的生物活性。本論文分為三部分內(nèi)容。第一部分是藥用植物黃精和黃芪內(nèi)生菌的分離、篩選及鑒定(第二章);第二部分是藥用植物黃精內(nèi)生菌B3和黃芪內(nèi)生菌Z7胞外多糖的分離純化及性質(zhì)的研究(第三章);第三部分是藥用植物多糖和內(nèi)生菌胞外多糖生物活性的研究(第四章)。第一部分:首先,采用組織分離法從黃精和黃芪的塊根中共分離出17株內(nèi)生菌,并對內(nèi)生菌的菌落形態(tài)特征進行鑒定。然后對17株藥用植物內(nèi)生菌的生理生化和16S rDNA測序分析。結(jié)果顯示,黃精內(nèi)生菌A2、A3為腸桿菌屬;黃精內(nèi)生菌A1、B1、B2、B2為芽孢桿菌屬;黃芪內(nèi)生菌Z1、Z2、Z3、Z4、Z6、M1、M2、M3為芽孢桿菌屬;黃芪內(nèi)生菌Z5和M4為葡萄球菌屬;黃芪內(nèi)生菌Z7為節(jié)細菌屬。從藥用植物中分離到的內(nèi)生菌大多數(shù)為芽孢桿菌屬。對其抗菌活性進行測定,結(jié)果顯示,黃精內(nèi)生菌B3的發(fā)酵處理液對三種指示菌有較弱的抑制作用。黃芪內(nèi)生菌M1和M2對大腸桿菌有較弱的抑制作用。黃芪內(nèi)生菌Z1、Z2、Z3、Z5、Z7、M1和M3對枯草芽孢桿菌有較弱的抑制作用,其中黃芪內(nèi)生菌M1的抑制作用最強。黃芪內(nèi)生菌Z6、M2和M4對金黃色葡萄球菌有較弱的抑制作用。最后對17株藥用植物內(nèi)生菌產(chǎn)胞外多糖的測定,結(jié)果顯示,17株內(nèi)生菌均能夠產(chǎn)生胞外多糖,而黃精內(nèi)生菌B3和黃芪內(nèi)生菌Z7產(chǎn)生的胞外多糖總糖含量最高。綜合以上分析,本實驗選擇菌株B3和Z7作為后續(xù)的研究對象。第二部分:首先,通過除蛋白、脫色和層析對黃精內(nèi)生菌EPS-B3和黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7分離純化。然后,通過十八角度及光光散射儀測定多糖的分子量。結(jié)果顯示,黃精內(nèi)生菌EPS-B3的分子量為1.863×104Da;黃精多糖(PSP)的分子量為2.791×104Da;黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7的分子量為5.001×104Da;黃芪多糖(APS)的分子量為6.004×105Da。采用離子色譜測定多糖的單糖組分,結(jié)果顯示,黃精內(nèi)生菌EPS-B3和黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7主要有Gal、Glc和Man三種單糖組成;黃精多糖主要有Fru、Rha、Gal、Glc、Man和Fru六種單糖組成;黃芪多糖主要的單糖組分包含F(xiàn)ru、Rha、Gal和Glc。黃精內(nèi)生菌EPS-B3與黃精多糖的單糖組分區(qū)別在于Fru、Rha和Fru單糖只存在于黃精多糖中;黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7與黃芪多糖的單糖組分區(qū)別在于黃芪多糖中含有Fru和Rha單糖,而黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7中含有Man。同時結(jié)合紅外光譜分析結(jié)果可知,內(nèi)生菌胞外多糖與其宿主植物多糖在結(jié)構(gòu)和單糖組成上具有差異性,宿主植物多糖可能來源于植物本身產(chǎn)生。第三部分:首先抑菌能力的測定結(jié)果顯示,分離的藥用植物多糖與藥用植物內(nèi)生菌胞外多糖均沒有抑菌活性。其次抗氧化的測定結(jié)果顯示,黃精多糖和黃精內(nèi)生菌EPS-B3相比其DPPH的清除能力接近,黃芪多糖和黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7相比清除能力也接近。黃精多糖和黃精內(nèi)生菌EPS-B3相比其超氧陰離子的清除能力接近,黃芪多糖和黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7的清除能力也接近。黃精內(nèi)生菌EPS-B3的還原能力高于黃精多糖的還原能力,黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7的還原能力高于黃芪多糖的能力。黃精多糖對羥基的清除能力高于黃精內(nèi)生菌EPS-B3的清除能力,而黃芪多糖與黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7的清除能力相近。最后是體內(nèi)抗腫瘤的測定結(jié)果顯示,黃精多糖、黃芪多糖、黃精內(nèi)生菌EPS-B3和黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7與PBS組相比,抑制腫瘤的活性顯著。體外抗腫瘤的結(jié)果顯示,黃精多糖PSP的體外抗腫瘤活性高于黃精內(nèi)生菌EPS-B3的體外抗腫瘤活性,而黃芪多糖APS體外抗腫瘤能力低于黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7的體外抗腫瘤能力�？苟嗵莑gG的抗體滴度測定結(jié)果顯示,黃精多糖、黃精內(nèi)生菌EPS-B3、黃芪多糖和黃芪內(nèi)生菌EPS-Z7能夠顯著的刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)的抗多糖的lgG的抗體�？傊�,藥用植物內(nèi)生菌胞外多糖具有同藥用植物多糖相同或相似的生物學(xué)特性,可以作為藥用植物多糖的替代品用于人類和動物疾病的治療和預(yù)防。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q93

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孟凡佳;孟憲文;吳春艷;;淺析植物內(nèi)生菌的發(fā)展[J];科技資訊;2014年01期

2 元超;郭玉華;李剛;吳長生;李銘;王海英;趙遵田;;地衣內(nèi)生菌Elaphocordyceps sp.的代謝產(chǎn)物[J];微生物學(xué)通報;2014年05期

3 戴傳超,余伯陽,趙玉婷,楊啟銀,蔣繼宏;大戟內(nèi)生菌的抑菌活性及其與宿主相關(guān)性研究[J];應(yīng)用生態(tài)學(xué)報;2005年07期

4 楊本壽;苗翠蘋;張建華;姜國銀;楊德;虞泓;;飛龍斬血內(nèi)生菌種群分布及抑菌活性檢測[J];微生物學(xué)報;2014年03期

5 黎萬奎,胡之璧;內(nèi)生菌與天然藥物[J];中國天然藥物;2005年04期

6 李琦;孫廣宇;;沙棘內(nèi)生菌的分離與初步鑒定[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2006年10期

7 馬峗;索菲婭;王傲立;黃羅冬;葉星;張琳;李萍;龔健;;一株阿爾泰蟲草內(nèi)生菌的分離及抑菌活性[J];生物技術(shù);2012年02期

8 劉麗;;小麥內(nèi)生菌的分離與鑒定[J];沈陽師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版);1998年04期

9 劉穎;魏希穎;;內(nèi)生菌對植物次生代謝產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2014年02期

10 阿依乃再·孜亞克;吾甫爾·米吉提;阿布都卡地爾·阿布力孜;阿力木江·阿合約力;古麗祖熱·佐努尼;;駱駝刺內(nèi)生菌分離及代謝物活性成分分析[J];西北植物學(xué)報;2012年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 秦曉婧;王琦;;冬棗內(nèi)生菌的分離與鑒定[A];第四屆中國植物細菌病害學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

2 李文華;李樂;吳云鋒;;澤漆內(nèi)生菌的分離及其抗病毒活性測定[A];中國植物病理學(xué)會2007年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2007年

3 朱育菁;陳璐;藍江林;蘇明星;劉波;;茶葉內(nèi)生菌的分離鑒定及其生防功能初探[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2008年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

4 方新;;番茄內(nèi)生菌的篩選極其生防功能初步研究[A];2006中國微生物學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

5 朱育菁;陳璐;藍江林;蘇明星;劉波;;茶葉內(nèi)生菌的分離鑒定及其生防功能初探[A];第四屆中國植物細菌病害學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

6 曾慶桂;楊澤良;曹理想;譚紅銘;周世寧;;抗病性內(nèi)生菌接種香蕉組培苗對內(nèi)生菌群和生長的影響[A];中國微生物學(xué)會《第二屆全國農(nóng)業(yè)微生物研究及產(chǎn)業(yè)化研討會》和《第十一屆全國殺蟲微生物學(xué)術(shù)研討會》暨《湖北省暨武漢市微生物學(xué)會和內(nèi)蒙古微生物學(xué)會2008年會》論文摘要[C];2008年

7 劉士平;曹亞男;涂璇;郭金玲;胡為民;;金銀花內(nèi)生菌生防作用及綠原酸類似物的篩選[A];2012年中國菌物學(xué)會學(xué)術(shù)年會會議摘要[C];2012年

8 李昆太;彭衛(wèi)福;周佳;黃林;程新;;一株產(chǎn)紫杉醇的南方紅豆杉內(nèi)生菌的分離與鑒定[A];第四屆全國微生物資源學(xué)術(shù)暨國家微生物資源平臺運行服務(wù)研討會論文集[C];2012年

9 田小曼;吳云鋒;;青蒿內(nèi)生菌的分離及其抑菌活性研究[A];中國植物病理學(xué)會2009年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

10 羅蘭;毛鎣滎;劉俊彥;宋永春;譚仁祥;;內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物對大鼠離體主動脈的舒張作用[A];中國生理學(xué)會第六屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2003年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 記者　胡兆珀;內(nèi)生菌技術(shù)孕育出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)水稻[N];科技日報;2006年

2 閻新華 過國忠;全程公證下的水稻播種[N];科技日報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 楊志軍;甘草內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的藥效學(xué)及相關(guān)物質(zhì)研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2017年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張文豪;側(cè)柏內(nèi)生菌抑菌活性研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

2 趙宇;海帶內(nèi)生菌DNN7蛋白的分離及抗腫瘤活性研究[D];大連海洋大學(xué);2015年

3 趙智靈;人參內(nèi)生菌多樣性及其可利用菌株的篩選[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 李明;白茅內(nèi)生菌C.globosum的次生代謝產(chǎn)物研究[D];揚州大學(xué);2015年

5 張海龍;產(chǎn)黃酮銀杏內(nèi)生菌的分離、鑒定與發(fā)酵條件優(yōu)化研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 張丹;紫花苜蓿內(nèi)生菌的分離鑒定及特性分析[D];哈爾濱師范大學(xué);2016年

7 董金香;甘肅野生與栽培甘草內(nèi)生菌有效菌株發(fā)酵物與宿主抗炎作用的對比研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2016年

8 趙妮;甘肅野生與栽培甘草內(nèi)生菌有效菌株發(fā)酵物與宿主及藥效成分抑菌活性對比研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 何雯雯;基于內(nèi)生菌的新型包衣麥種的研發(fā)[D];南陽師范學(xué)院;2015年

10 盧占慧;人參內(nèi)生菌群落多樣性及拮抗菌株的抑菌作用研究[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

，

本文編號：2287314