本文選題：L-谷氨酰胺 + 高通量篩選方法��； 參考：《內蒙古農業(yè)大學》2017年碩士論文

【摘要】：本研究首先通過分子克隆、大腸桿菌表達和蛋白純化獲得了BPSA蛋白,對BPSA蛋白進行動力學表征顯示,測定其Km值和Kcat值。然后利用BPSA蛋白催化谷氨酰胺合成藍色化合物indigoidine的特性構建了 L-谷氨酰胺高通量檢測方法。以此為基礎,成功構建了谷氨酰胺高產菌株的高通量篩選方法,為今后高產菌株的篩選和工業(yè)化生產提供理論基礎。研究結果如下:動力學實驗完成了BPSA蛋白的表征,其Km值為0.79±0.667mM,Kcat值為5.658mM。當發(fā)酵液中L-谷氨酰胺濃度在0.2mM至5mM時,可以通過該方法準確檢測到L-谷氨酰胺的含量。本課題通過克隆及在谷氨酸棒桿菌中共表達bpsA和sfp基因,首次實現(xiàn)了在谷氨酸棒桿菌中生產新型靛藍染料indigoidine。通過對L-谷氨酰胺的添加量(0、0.73、4.38、11.68)g/L、IPTG 添加量(0.1、0.2、0.4、0.8、1.5、2)mM、誘導時間(48、72)小時及誘導溫度(18℃、25℃、30℃)的條件優(yōu)化,最終確定,當L-谷氨酰胺添加為11.68g/L,IPTG濃度為0.8mM,18℃誘導48小時后indigoidine產量最高可達到 1.75g/L。
[Abstract]:In this study, BPSA protein was obtained by molecular cloning, expression of Escherichia coli and protein purification. The kinetic characterization of BPSA protein showed that the Km value and Kcat value were determined. Then, the high throughput assay method of L- glutamine was constructed by using BPSA protein to catalyze the synthesis of blue compound indigoidine from glutamine. Based on this, it was formed. A high throughput screening method for high yield strain of glutamine was constructed to provide a theoretical basis for the screening and industrial production of high-yielding strains in the future. The results were as follows: the kinetic experiment completed the characterization of BPSA protein, its Km value was 0.79 + 0.667mM, and the Kcat value was 5.658mM. when the concentration of L- glutamine in the fermentation liquid was from 0.2mM to 5mM. The content of L- glutamine was accurately detected by this method. By cloning and expressing bpsA and SFP genes in Corynebacterium glutamibacillus, the production of new indigo dye indigoidine. in Corynebacterium glutamias was first realized through the addition of L- glutamine (0,0.73,4.38,11.68) g/L, IPTG addition (0.1,0.2,0.4,0.8,1.5,2) mM. The conditions were optimized for time (48,72) hours and induction temperature (18 C, 25 C, 30 C). Finally, when L- glutamine was added to 11.68g/L, IPTG concentration was 0.8mM, and 18 C was induced for 48 hours, the highest indigoidine yield could reach 1.75g/L.
【學位授予單位】：內蒙古農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q78;Q936

【參考文獻】

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本文編號：2104690