本文選題：L-谷氨酰胺 + 高通量篩選方法��； 參考：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：本研究首先通過分子克隆、大腸桿菌表達(dá)和蛋白純化獲得了BPSA蛋白,對BPSA蛋白進行動力學(xué)表征顯示,測定其Km值和Kcat值。然后利用BPSA蛋白催化谷氨酰胺合成藍(lán)色化合物indigoidine的特性構(gòu)建了 L-谷氨酰胺高通量檢測方法。以此為基礎(chǔ),成功構(gòu)建了谷氨酰胺高產(chǎn)菌株的高通量篩選方法,為今后高產(chǎn)菌株的篩選和工業(yè)化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:動力學(xué)實驗完成了BPSA蛋白的表征,其Km值為0.79±0.667mM,Kcat值為5.658mM。當(dāng)發(fā)酵液中L-谷氨酰胺濃度在0.2mM至5mM時,可以通過該方法準(zhǔn)確檢測到L-谷氨酰胺的含量。本課題通過克隆及在谷氨酸棒桿菌中共表達(dá)bpsA和sfp基因,首次實現(xiàn)了在谷氨酸棒桿菌中生產(chǎn)新型靛藍(lán)染料indigoidine。通過對L-谷氨酰胺的添加量(0、0.73、4.38、11.68)g/L、IPTG 添加量(0.1、0.2、0.4、0.8、1.5、2)mM、誘導(dǎo)時間(48、72)小時及誘導(dǎo)溫度(18℃、25℃、30℃)的條件優(yōu)化,最終確定,當(dāng)L-谷氨酰胺添加為11.68g/L,IPTG濃度為0.8mM,18℃誘導(dǎo)48小時后indigoidine產(chǎn)量最高可達(dá)到 1.75g/L。
[Abstract]:In this study, BPSA protein was obtained by molecular cloning, expression of Escherichia coli and protein purification. The kinetic characterization of BPSA protein showed that the Km value and Kcat value were determined. Then, the high throughput assay method of L- glutamine was constructed by using BPSA protein to catalyze the synthesis of blue compound indigoidine from glutamine. Based on this, it was formed. A high throughput screening method for high yield strain of glutamine was constructed to provide a theoretical basis for the screening and industrial production of high-yielding strains in the future. The results were as follows: the kinetic experiment completed the characterization of BPSA protein, its Km value was 0.79 + 0.667mM, and the Kcat value was 5.658mM. when the concentration of L- glutamine in the fermentation liquid was from 0.2mM to 5mM. The content of L- glutamine was accurately detected by this method. By cloning and expressing bpsA and SFP genes in Corynebacterium glutamibacillus, the production of new indigo dye indigoidine. in Corynebacterium glutamias was first realized through the addition of L- glutamine (0,0.73,4.38,11.68) g/L, IPTG addition (0.1,0.2,0.4,0.8,1.5,2) mM. The conditions were optimized for time (48,72) hours and induction temperature (18 C, 25 C, 30 C). Finally, when L- glutamine was added to 11.68g/L, IPTG concentration was 0.8mM, and 18 C was induced for 48 hours, the highest indigoidine yield could reach 1.75g/L.
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q78;Q936

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊斌;黃立新;何敏;劉斐;韋世錄;;谷氨酰胺對運動員Th1/Th2細(xì)胞平衡影響的研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年03期

2 張艷;趙麗麗;仝其根;;辣椒紅色素的提取與分離[J];北京工商大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2011年06期

3 盧文彪;;運動應(yīng)激后血漿谷氨酰胺的變化及機制分析[J];中國醫(yī)藥指南;2011年21期

4 王麗麗;張春曉;劉曉紅;陳曉波;;青霉素高產(chǎn)菌株高通量檢測和篩選方法的研究[J];中國抗生素雜志;2011年03期

5 錢帥偉;丁樹哲;;補充谷氨酰胺對運動機體的生理功效研究[J];四川體育科學(xué);2011年01期

6 柳欣欣;于健春;;免疫營養(yǎng)素應(yīng)用于腫瘤治療的研究進展[J];腸外與腸內(nèi)營養(yǎng);2010年03期

7 羅莉斯;李能威;李麗;郭偉群;郁建平;張曉琳;;96孔板高通量篩選多殺菌素高產(chǎn)菌株的研究[J];中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報;2010年02期

8 蔣宗勇;鄭衛(wèi)川;林映才;鄭春田;黃琳;陳芳;;谷氨酰胺對新生仔豬生長性能、血清激素水平及小腸黏膜酶活性的影響[J];動物營養(yǎng)學(xué)報;2010年01期

9 崔艷華;張?zhí)m威;;谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶研究進展[J];生物技術(shù)通報;2009年01期

10 丁邦琴;邱鑫;周烽;;L-谷氨酰胺生化性質(zhì)、用途及生產(chǎn)方法概述[J];氨基酸和生物資源;2008年04期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 陳群英;基因工程酶法結(jié)合酵母能量耦聯(lián)高效合成L-谷氨酰胺的研究[D];南京師范大學(xué);2004年

，

本文編號：2104690