發(fā)布時間：2018-05-14 18:28

  本文選題：神經(jīng)嵴(干)細(xì)胞 + 細(xì)胞分化��； 參考：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：蕾狀期后的小鼠牙胚間充質(zhì)具有成牙潛能,能與非牙源性上皮重組形成牙齒,因此常被用于誘導(dǎo)具有干細(xì)胞特性的上皮細(xì)胞參與再生牙齒的構(gòu)建。已知牙胚間充質(zhì)是由神經(jīng)嵴干細(xì)胞遷移到第一鰓弓發(fā)育而來的,我們已建立人iPS向神經(jīng)嵴細(xì)胞分化的平臺,但如何將iPS衍生的神經(jīng)嵴細(xì)胞誘導(dǎo)成具有成牙潛能的成牙間充質(zhì)細(xì)胞尚不明確。基于人與鼠在牙齒發(fā)育過程中的相似性,本研究將對鼠源神經(jīng)嵴干細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)及其成牙潛能的研究。本研究將從8.5天的胎鼠中分離獲得神經(jīng)嵴干細(xì)胞,在體外建立合適的培養(yǎng)環(huán)境后,通過特異基因表達(dá)和表面標(biāo)記分子分析對所獲得的神經(jīng)嵴干細(xì)胞進(jìn)行評價,同時對神經(jīng)嵴干細(xì)胞進(jìn)行礦化成骨的誘導(dǎo),檢測神經(jīng)嵴干細(xì)胞是否具有分化成骨的能力,為神經(jīng)嵴干細(xì)胞成牙分化能力提供基礎(chǔ)和保障。通過CCK8實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步對第三代神經(jīng)嵴干細(xì)胞的增殖能力進(jìn)行評價。將神經(jīng)嵴干細(xì)胞與小鼠胚胎14.5天(E14.5)的牙胚上皮重組、移植等實(shí)驗(yàn),探索神經(jīng)嵴干細(xì)胞是否具有成牙潛能。本研究發(fā)現(xiàn),將8.5天胎鼠分離的出的神經(jīng)管貼到細(xì)胞培養(yǎng)皿中,神經(jīng)干細(xì)胞從神經(jīng)管中遷移出來,圍繞神經(jīng)管的四周,細(xì)胞呈梭狀型。通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示這些細(xì)胞在P0代時,E-Caherin、Pax3、P75和HNK1上呈陽性表達(dá),Pax6的陰性表達(dá);而在P3時期的細(xì)胞顯示在P75、HNK1和Ap2α上的呈陽性表達(dá),而在Pax6上呈陰性表達(dá)。P0代細(xì)胞和P3代細(xì)胞都分別表達(dá)了神經(jīng)嵴的特性,并且沒有表達(dá)神經(jīng)干的特性。說明在體外的環(huán)境下利用無血清條件培養(yǎng)基來培養(yǎng)小鼠神經(jīng)嵴干細(xì)胞,可以保持小鼠神經(jīng)嵴干細(xì)胞的特性;通過qPCR實(shí)驗(yàn)檢測不同代數(shù)的神經(jīng)嵴干細(xì)胞,結(jié)果表明:雖然神經(jīng)嵴基因在傳代的過程中有缺失,但是其神經(jīng)嵴基因水平仍比較高。牙源基因雖然有表達(dá)但是表達(dá)水平比較低。神經(jīng)干細(xì)胞基因在后期傳代的神經(jīng)嵴細(xì)胞中少量表達(dá);通過CCK8實(shí)驗(yàn)檢測,結(jié)果表明:隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加,神經(jīng)嵴干細(xì)胞呈逐漸增長的形式。說明神經(jīng)嵴干細(xì)胞可以在我們所提供的培養(yǎng)基中穩(wěn)定的生長,維持細(xì)胞的繁殖;將神經(jīng)嵴干細(xì)胞在體外成骨誘導(dǎo)分化后,通過茜素紅染液染色,出現(xiàn)桔色沉積。通過qPCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),礦化后的神經(jīng)嵴干細(xì)胞在四組成骨基因中其表達(dá)均有增高,尤其在Ocn、Bmp3和Bmp2三組的其表達(dá)遠(yuǎn)高于其他三組對照,檢測結(jié)果表明,神經(jīng)嵴干細(xì)胞可以分化成骨;將神經(jīng)嵴干細(xì)胞與牙胚上皮重組、移植等實(shí)驗(yàn),通過HE染色我們可以觀察到在P3和P5中顯示存在牙齒結(jié)構(gòu),證明神經(jīng)嵴干細(xì)胞是具有成牙潛能。綜述所述,通過神經(jīng)嵴干細(xì)胞體外的培養(yǎng)、鑒定、檢測等實(shí)驗(yàn),證明神經(jīng)嵴干細(xì)胞具有成牙潛能。這個結(jié)果為尋找神經(jīng)嵴干細(xì)胞在體外誘導(dǎo)獲得牙源間充質(zhì)細(xì)胞的途徑提供了良好的基礎(chǔ),進(jìn)而為人iPS衍生的神經(jīng)嵴細(xì)胞向成牙間充質(zhì)細(xì)胞的分化提供重要的參考依據(jù),從而推動干細(xì)胞體外定向分化為成牙間充質(zhì)細(xì)胞的實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:In this study , the neural crest stem cells were cultured in vitro . The neural crest stem cells were cultured in vitro . The neural crest stem cells were cultured in vitro . The neural crest stem cells were cultured in vitro . It is shown that the neural crest stem cells have the potential for odontoblasts . The results provide a good basis for finding the way to obtain the mesenchymal cells in vitro by culturing , identifying and detecting the neural crest stem cells in vitro , and then provide important reference bases for the differentiation of the neural crest cells derived from the neural crest stem cells into the odontoblasts , thus promoting the in vitro orientation differentiation of the stem cells into the realization of the mesenchymal cells .

【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R329.2

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本文編號：1888992