本文選題：紡錘體組裝 + 泛素化　； 參考：《深圳大學》2017年碩士論文

【摘要】：高等真核細胞通過有絲分裂復(fù)制后的兩條染色體通過染色體分離的方式精確分配到兩個子代細胞中,對維持基因組穩(wěn)定性起著常重要的作用。有絲分裂依賴于微管為基礎(chǔ)的雙極紡錘體的組裝和功能。細胞內(nèi)多種蛋白翻譯后修飾參與了這個過程的嚴密調(diào)控,包括磷酸化、泛素化和ADP核糖基化等。其中,泛素化是最為重要的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾,可調(diào)控蛋白質(zhì)分子的定位、轉(zhuǎn)運和相互作用,參與包括有絲分裂在內(nèi)的諸多生物學過程。與其它翻譯后修飾一樣,泛素化是一個動態(tài)可逆的過程,泛素分子或泛素鏈可以被去泛素化酶水解,從而調(diào)控蛋白分子的泛素化水平和功能。BRISC是一個K63連接特異的去泛素化酶,由MERIT40、BRCC36、BRCC45和ABRO1組成,參與細胞內(nèi)多個生物過程,如抗病毒免疫調(diào)控、炎性反應(yīng)和紡錘體組裝等。但它在紡錘體組裝中的作用和機制還不是十分清楚。我們通過免疫熒光、免疫共沉淀、Pull Down、western blot等實驗研究發(fā)現(xiàn):(1)Tankyrase 1與MERIT40、BRCC36相互作用并定位于紡錘極;(2)RXXPEG是MERIT40紡錘極定位、MERIT40與Tankyrase 1相互作用必需的;(3)Tankyrase 1的亞結(jié)構(gòu)域ARC V在Tankyrase 1與MERIT40-BRCC36相互作用中起主要作用;(4)MERIT40的RXXPEG突變體R28A呈現(xiàn)有絲分裂表型缺陷(5)Tankyrase 1在有絲分裂期可以被K63連接泛素化修飾,其修飾水平受MERIT40去泛素化酶復(fù)合物負性調(diào)控。RXXPEG突變削弱或破壞MERIT40與Tankyrase 1的相互作用,引起Tankyrase 1的K63連接泛素化水平顯著增高,這可能進一步導(dǎo)致其PAR修飾酶活性失調(diào),最終影響細胞紡錘體組裝功能。
[Abstract]:The higher eukaryotic cells are divided into two progenies precisely by chromosome separation after mitotic replication, which plays an important role in maintaining genomic stability. Mitosis depends on the assembly and function of microtubulo-based bipolar spindles. Many protein posttranslational modifications are involved in this process, including phosphorylation, ubiquitin and ADP ribonucleylation. Ubiquitin is the most important post-translational modification of proteins, which regulates the localization, transport and interaction of protein molecules, and participates in many biological processes, including mitosis. Like other post-translational modifications, ubiquification is a dynamic reversible process in which the ubiquitin molecule or the ubiquitin chain can be hydrolyzed by diubiquitin, thereby regulating the level and function of ubiquitization of protein molecules. BRISC is a K63 linked specific diubiquitin enzyme. MERIT40 BRCC36 BRCC45 and ABRO1 are involved in many biological processes, such as anti-viral immune regulation, inflammatory response and spindle assembly. However, its role and mechanism in spindle assembly is not very clear. We use immunofluorescence, The results of immunoprecipitation with pull blot and other experimental studies have found that the interaction of 1 / 1 / 1 Tankyrase 1 with MERIT40 / BRCC36 / RXXPEG is the essential subdomain of the interaction between MERIT40 and Tankyrase 1. ARC V plays a major role in the interaction between Tankyrase 1 and MERIT40-BRCC36. The subdomain ARC V plays a major role in the interaction between MERIT40 and Tankyrase 1, and its subdomain ARC V plays a major role in the interaction between MERIT40 and ARC 1, which is the main subdomain of the interaction between MERIT40 and Tankyrase 1. The RXXPEG mutant R28A, which acts on MERIT40, showed mitotic phenotypic defects and Tankyrase 1 could be modified by K63 ligation ubiquification during mitosis. Its modification level was weakened or destroyed by the negative regulation of MERIT40 desuginase complex. RXXPEG mutation, which resulted in a significant increase in the K63 ligand ubiquitin level of Tankyrase 1, which may further lead to the imbalance of PAR modifying enzyme activity. Finally, the function of cell spindle assembly is affected.
【學位授予單位】：深圳大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q253

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本文編號：1834513