本文關(guān)鍵詞：相容性溶質(zhì)在大腸桿菌中的合成和抗逆研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《福建師范大學(xué)》 2015年

相容性溶質(zhì)在大腸桿菌中的合成和抗逆研究

高超  

【摘要】：為了獲得能夠感應(yīng)壓力脅迫條件,開啟相容性溶質(zhì)(如本研究中用到的四氫嘧啶和海藻糖)的合成,從而提高對壓力脅迫的耐受性的E.coli底盤細(xì)胞,本研究收集了七種不同的啟動子(pCP6、Ibp、pHe、Fic、Gron、Degp和sta69)用來調(diào)節(jié)相容性溶質(zhì)的合成。當(dāng)選擇四氫嘧啶作為相容性溶質(zhì)的時候發(fā)現(xiàn),四氫嘧啶的合成會降低E.coli的耐鹽性,與外源添加四氫嘧啶可以提高E.coli耐鹽性的結(jié)果相違背,從蛋白表達(dá)、中間產(chǎn)物的毒性和代謝流分析三個角度分析,發(fā)現(xiàn)因代謝競爭而導(dǎo)致的DAP缺失是其中的一個因素；當(dāng)選擇海藻糖作為相容性溶質(zhì)的時候發(fā)現(xiàn),當(dāng)使用Ibp、pHe和Fic三個啟動子調(diào)控海藻糖合成時,相比于傳統(tǒng)的Tac啟動子,E.coli獲得了更好的鹽耐受性,表現(xiàn)在延滯期縮短,對數(shù)期生長速率更快,穩(wěn)定期OD600更高。為了獲得適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)高純度海藻糖以滿足醫(yī)藥行業(yè)的需求,本研究嘗試著結(jié)合合成生物學(xué)和全細(xì)胞催化的方法,獲得一株海藻糖高產(chǎn)的E.coli重組菌株。從代謝工程的角度研究發(fā)現(xiàn),敲除海藻糖降解途徑(ATreA- TreC- TreF)有利于海藻糖的積累,同時敲除葡萄糖磷酸脫氫酶(△Zwf)也可以顯著提高海藻糖的合成水平,使最終海藻糖的合成量達(dá)到7g/L。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q93
【目錄】：

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