本文選題：富血小板血漿 + Tubex　； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的富血小板血漿(Platelet-Rich Plasma,PRP)為自體全血利用梯度離心原理離心獲得的血小板濃縮物,由激活劑或物理因素激活后能釋放多種細(xì)胞因子,如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、血小板源性生長(zhǎng)因子、胰島素樣生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。以上這些細(xì)胞因子在特定條件下能夠誘導(dǎo)促進(jìn)多種細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生遷移、分化和增殖,參與傷口愈合中新生血管的形成以及骨的再生;而激活后的PRP呈凝膠狀,纖維黏連蛋白、富含纖維蛋白等蛋白質(zhì),可以作為天然的三維支架材料供細(xì)胞生長(zhǎng),為組織的再生創(chuàng)造優(yōu)良的局部微環(huán)境。目前關(guān)于PRP的制備方法的文獻(xiàn)報(bào)道很多,研究發(fā)現(xiàn)不同的制備方法會(huì)影響到最終PRP中血小板以及生長(zhǎng)因子的濃度,影響其作用效果的發(fā)揮。脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)為近年來(lái)由脂肪組織中分離出的一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞,在特定條件誘導(dǎo)下可以向成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和心肌細(xì)胞分化。自體ADSCs由于其取材方便,體外擴(kuò)增速度快等特點(diǎn),可以作為組織工程技術(shù)中優(yōu)秀的種子細(xì)胞,用于組織器官的修復(fù)再生。盡管以往的研究證實(shí)PRP可以對(duì)多種細(xì)胞起作用,但關(guān)于PRP對(duì)ADSCs的研究較少。本研究采用三種不同方法制備PRP,比較PRP產(chǎn)物中血小板濃度以及生長(zhǎng)因子釋放量的差別;并將PRP和ADSCs共培養(yǎng),分析PRP對(duì)ADSCs增殖和成骨分化的影響,探討PRP+ADSCs復(fù)合材料用于組織工程技術(shù)的可能性,為以后的臨床研究打下基礎(chǔ)。方法1.本研究采用了傳統(tǒng)的二次離心法、三次離心法以及Tubex改良法制備PRP,通過(guò)血小板計(jì)數(shù)比較三種方法制備PRP的血小板采集率的大小;2.通過(guò)酶消化組織塊法分離出兔脂肪干細(xì)胞,并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)、茜素紅染色和油紅O染色方法鑒定細(xì)胞;3.將三種方法制備的PRP激活后配成5%濃度的細(xì)胞培養(yǎng)液,與上述的脂肪干細(xì)胞共培養(yǎng),通過(guò)CCK-8試劑盒檢測(cè)PRP對(duì)細(xì)胞增殖的影響;4.將三種方法制備的5%PRP培養(yǎng)液處理細(xì)胞,通過(guò)茜素紅染色、堿性磷酸酶染色和定量、RT-PCR檢測(cè)PRP對(duì)脂肪干細(xì)胞成骨分化能力的影響。結(jié)果1.血小板計(jì)數(shù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)Tubex改良法制備的PRP血小板回收率顯著高于其他兩種方法,PRP中的生長(zhǎng)因子濃度也明顯高于二次離心法和三次離心法。2.本實(shí)驗(yàn)中經(jīng)過(guò)酶消化法獲得的細(xì)胞表面特定抗原的表達(dá)與脂肪干細(xì)胞一致,且具備成骨分化和成脂分化能力,符合脂肪干細(xì)胞特征。3.在培養(yǎng)21d后,所有PRP處理組的脂肪干細(xì)胞均觀察到了礦化結(jié)節(jié)的形成,細(xì)胞的堿性磷酸酶活性也顯著高于礦化誘導(dǎo)液處理的細(xì)胞,通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR觀察到脂肪干細(xì)胞成骨分化標(biāo)記基因的表達(dá)也明顯高于礦化誘導(dǎo)組。通過(guò)比較三種PRP對(duì)脂肪干細(xì)胞成骨分化的影響,我們發(fā)現(xiàn)Tubex法制備的PRP對(duì)脂肪干細(xì)胞成骨分化的促進(jìn)作用要強(qiáng)于其他兩種方法制備的PRP。結(jié)論:綜合以上研究結(jié)果,我們發(fā)現(xiàn)Tubex法制備的PRP中血小板的含量以及生長(zhǎng)因子的濃度均要高于二次離心法和三次離心法,其對(duì)兔脂肪干細(xì)胞的增殖、成骨分化具有明顯的促進(jìn)作用,且其作用效果優(yōu)于其他兩種方法。通過(guò)Tubex密閉裝置制備PRP操作簡(jiǎn)單,同時(shí)能夠提高血小板的采集率,其內(nèi)豐富的細(xì)胞因子有利于脂肪干細(xì)胞的增殖和分化。
[Abstract]:Platelet - rich plasma ( PRP ) is a kind of platelet concentrate which is obtained by centrifugation with autologous whole blood by gradient centrifugation . It can release various cytokines , such as transforming growth factor - 尾 , platelet - derived growth factor , insulin - like growth factor , epidermal growth factor , epithelial growth factor , vascular endothelial growth factor and so on . The results showed that the expression of platelet in PRP was significantly higher than that of the other two methods . The results showed that the expression of platelet in PRP was significantly higher than that of the other two methods .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1792054