本文選題：p21 + ROS��； 參考：《山東大學》2017年碩士論文

【摘要】：[研究背景]p21蛋白是細胞周期依賴性蛋白激酶抑制因子(CDKI),可以與多種通路的不同信號分子相互作用,在整個細胞調控系統(tǒng)起到重要作用,同時p21作為一種重要的癌癥相關基因,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中也有重要作用�；钚匝�(ROS)是細胞內化學性質活潑、氧化能力強的各種含氧離子或分子的總稱,主要包括超氧陰離子自由基、單線激發(fā)態(tài)氧、羥自由基、過氧化氫和過氧化物等物質。近年來大量的研究數據都能表明,活性氧作為一種重要的信號分子,可以參與細胞中多種生命活動的調控,包括細胞分裂、分化、腫瘤等生理和病理變化。在正常生命活動的氧化代謝過程中產生的ROS,可以由組織內的防御機制來維持平衡。但在一些損傷因素的作用。下,細胞內的氧化代謝物增加,超過細胞自我修復能力,使活性氧堆積并對細胞產生毒害作用。目前對p21在ROS水平調控中的作用存在爭議,p21對ROS的調節(jié)機制也有不同報道:有文獻報道p21具有抗氧化作用,這種功能主要是由轉錄因子Nrf2介導的。Nrf2是抗氧化基因,其下游也有一系列的抗氧化基因。Keap1驅動Nrf2的泛素化降解,而p21可以和Keap1結合,與Nrf2形成競爭關系,使Nrf2更穩(wěn)定,可以更好地發(fā)揮抗氧化的作用,在這種情況下敲除p21的細胞的ROS會比正常細胞要高,在受刺激的時候更為明顯。而另有文獻報道p21可以起到促氧化的效果,當敲除p21后,敲除細胞的ROS在壓力刺激下明顯減少,之后用了生物信息學的分析軟件找到了 一個最為可能的p21調控ROS的通路:DNA損傷-p53-p21-GADD45A-MAPK14-GRB2-TGFβ-線粒體功能障礙-DNA 損傷,這證明存在于一個引發(fā)ROS升高的正反饋環(huán)上,敲除p21相當于阻礙了環(huán)的運行,可以降低ROS,p21起到促氧化作用的。我們推測,p21在ROS水平調控中的作用及其機制可能是細胞類型特異的。我們以多種細胞包括NHF(人成纖維細胞)、MSF(小鼠耳朵成纖維細胞)、MRC5(人成纖維細胞)、FTE187(人輸卵管上皮永生化細胞)為研究對象,通過敲除或干擾p21后測定ROS水平,之后還檢測了 NHF和MSF細胞的增殖與衰老情況。[研究目的]1.探討p21對ROS的調控是否有細胞類型特異性;2.探討p21介導的ROS調節(jié)對細胞命運的影響。[研究方法]3.通過RNA干擾敲低NHF等人類細胞p21的表達。4.通過小鼠耳朵成纖維細胞原代培養(yǎng)獲得MSF細胞。5.利用流式細胞術檢測敲除或干擾p21后各細胞的ROS水平在本底及IR處理后ROS的水平。6.利用Real-time PCR方法技術MSF細胞在p21缺失后,與p21作用的相關基因Nrf2及其靶基因NQO-1、HO-1等的表達。7.利用Western blotting檢測敲除或干擾p21后各細胞中Nrf2與p-p38的變化。8.利用SA-β-gal染色技術檢測NHF、MSF細胞在p21缺失或下調后的衰老情況。9.利用EdU插入法檢測NHF、MSF細胞在p21缺失或下調后的增殖情況。[實驗結果]1.MSF細胞在p21缺失后的ROS水平在本底及用IR處理后都有所降低,p38磷酸化下降,Nrf2及其靶基因基本不變,細胞衰老減少,增殖加快。2.NHF細胞在p21下調后短期內ROS水平在本底及IR處理后都有所升高,p38磷酸化升高,Nrf2下調。而細胞在長期低表達p21后,ROS水平在本底及IR處理后均出現降低,p38磷酸化降低,Nrf2上調,更長期的篩選后,p21低表達細胞Nrf2水平明顯降低,細胞在p21下調后都出現衰老減少,增殖加快的現象。3.在MRC5和FTE187在p21下調后的ROS水平分別各有上調和下降,其中MRC5細胞中Nrf2與p38磷酸化的變化與MSF細胞相似,而在FTE187細胞中Nrf2與p38磷酸化的變化與我們實驗所用另幾種細胞都不一致。[結論]1.p21短期下調對細胞ROS的影響具有細胞特異性(在MSF、MRC5中p21缺失或下調ROS下降,在NHF、FTE187中p21下調ROS上升)。2.p21長期缺失或下調導致細胞ROS下降(NHF、MRC5、MSF)。3.p21缺失或下調引起的ROS上升經由Nrf2途徑介導(NHF),p21缺失或下調引起的ROS下調經由p38途徑介導(MSF)。4.p21缺失或下調導致的細胞衰老減少,增殖加快不依賴ROS(MSF、NHF)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q25

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張傳茂;;細胞分化 中國科學家談科學[J];科學觀察;2007年06期

2 《世界科學前沿發(fā)展態(tài)勢分析》課題組;張望;;細胞分化 數據聚焦分析[J];科學觀察;2007年06期

3 許智宏;;第十講 植物的細胞分化[J];植物生理學通訊;1979年03期

4 利容千;植物細胞學專題講座——第六講 植物的細胞分化及其實踐應用[J];湖北農業(yè)科學;1980年12期

5 張乃群，趙麗英;植物細胞分化的研究綜論[J];南都學壇;1996年06期

6 杜玲;影響細胞分化的因素[J];生物學教學;2003年05期

7 David　Tenenbaum,饒新華;細胞之源[J];世界科學;2000年11期

8 閆貴新;干細胞研究的重大進展[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2000年11期

9 趙志力;修復細胞分化的調控機制與鑒別[J];中國危重病急救醫(yī)學;2002年02期

10 黃紹勤;曹惠珍;;生命的基本單位——細胞[J];廣醫(yī)通訊;1980年03期

相關會議論文 前10條

1 徐志彥;;《細胞分化》教學案例(教學內容安排1課時)[A];河北省教師教育學會第二屆中小學教師教學案例展論文集[C];2013年

2 尹青;張雷;李莉;謝丹丹;龔淼;;體外心肌樣環(huán)境對P19細胞向心肌細胞分化的誘導作用[A];中國解剖學會2012年年會論文文摘匯編[C];2012年

3 丁建東;;圖案化表面與干細胞分化[A];2013年全國高分子學術論文報告會論文摘要集——大會邀請報告[C];2013年

4 陳思;黃欣;陳少華;楊力建;鄭海濤;李揚秋;;BCL11B基因在T細胞分化和增殖中調節(jié)作用的研究[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術會議論文摘要[C];2010年

5 江鍵;崔黎麗;宋誠榮;王小平;宋茂海;;負極性駐極體誘導3T3細胞表面電荷和游離鈣濃度的變化[A];第四屆中國功能材料及其應用學術會議論文集[C];2001年

6 梁冀;于會梅;傅繼東;郭昂;楊黃恬;;內質網鈣離子釋放受體對干細胞分化的調控[A];中國病理生理學會受體、腫瘤和免疫專業(yè)委員會聯合學術會議論文匯編[C];2010年

7 羅家江;;TH17細胞的研究進展[A];全國中西醫(yī)結合血液學學術會議論文匯編[C];2010年

8 項盈;金潔;沈丹;鄭強;謝純剛;賈冰冰;黃國平;王金福;;復蘇的人骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)及向多系細胞分化的誘導[A];第10屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2005年

9 汪洋;朱椰凡;余華軍;符竣惠;徐啟綱;曾其強;吳建波;張啟瑜;;三種全肝臟去細胞化流程對細胞外基質的影響及細胞組分殘留量的研究[A];2013年浙江省外科學學術年會論文匯編[C];2013年

10 常平安;陳瑞;李薇;伍一軍;;神經病靶標酯酶的增強表達抑制哺乳動物細胞的增殖[A];中國環(huán)境誘變劑學會抗誘變劑和抗癌劑專業(yè)委員會第三次全國學術會議、中國毒理學會生化與分子毒理專業(yè)委員會第五屆學術交流會、貴州省環(huán)境誘變劑學會成立大會暨首屆學術交流會論文集[C];2004年

相關重要報紙文章 前10條

1 徐榮祥;人類生命細胞 再生物質的發(fā)現與研究[N];健康報;2007年

2 張佳星;干細胞分化路徑存在差異性[N];中國礦業(yè)報;2008年

3 史軍;剝開黏合的細胞之書[N];健康報;2012年

4 常麗君;美生物學家打造出“細胞黑客”[N];科技日報;2010年

5 張佳星;分化之路 殊途同歸[N];科技日報;2008年

6 記者 施嘉奇　通訊員 王姿英;探索中藥對干細胞分化的作用[N];文匯報;2009年

7 記者陳超;日開發(fā)細胞間隔離培養(yǎng)技術[N];科技日報;2003年

8 陳超;科學家發(fā)現引發(fā)細胞分化的分子通道[N];科技日報;2010年

9 記者 白毅;我國科學家用iPS細胞首獲克隆豬[N];中國醫(yī)藥報;2013年

10 記者 錢錚;日本用人類iPS細胞首次制成血小板[N];新華每日電訊;2009年

相關博士學位論文 前10條

1 唐紹燦;IL-27、Th1及Th17細胞在MS中的表達及其作用機制研究[D];山東大學;2015年

2 常凱凱;子宮內膜異位灶微環(huán)境IL-10~+Th17細胞的形成及作用機制[D];復旦大學;2014年

3 高華嵩;細胞重編程技術和移植治療視神經損傷的實驗研究[D];復旦大學;2014年

4 李艷明;Hsa-miR-200a調控紅細胞分化的功能及分子機制研究[D];中國科學院北京基因組研究所;2015年

5 張林;C-反應蛋白通過對T細胞分化的直接調控參與后天免疫應答[D];蘭州大學;2015年

6 蔣云秋;樹突狀細胞Notch信號在1，，25-二羥維生素D3調節(jié)Th17分化中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

7 史莉瑾;急性腦出血患者外周血調節(jié)性T細胞與腦相關抗原的特征及其相關性研究[D];鄭州大學;2015年

8 陳博;可注射細胞微球明膠復合物聯合血小板裂解液在牙組織工程中的應用研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

9 章麗雅;血紅素加氧酶-1調抑Th17細胞在炎癥性腸病中的作用及機制研究[D];上海交通大學;2013年

10 曹際森;miR-146a調控Treg細胞抑制小鼠心臟移植免疫排斥的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 丁佳敏;芪藍制劑對人舌鱗癌Tca8113細胞的抗增殖和促凋亡作用的機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 張卓亞;間充質干細胞對B6.MRL-Fas~(lpr)小鼠濾泡輔助T細胞的調節(jié)作用及機制研究[D];南京大學;2015年

3 周明;As_2O_3聯合γ分泌酶抑制劑影響肝癌HepG_2細胞耐藥性的研究[D];石河子大學;2015年

4 劉冰慧;凋亡細胞對巨噬細胞IL-12家族細胞因子調控的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

5 韓青青;Th22細胞及其效應因子IL-22與類風濕關節(jié)炎及合并間質性肺病相關性的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 張騰飛;吉西他濱與AMD3100聯合應用于膽管癌RBE細胞株對CXCR4/CXCL12軸的作用[D];河北醫(yī)科大學;2015年

7 王們X ;EAAL細胞聯合全反式維甲酸對人肺腺癌細胞株A549體內外作用的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

8 李超楠;兩種典型OPFRs對PC12細胞的神經毒性及其機制探究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

9 楊明;促腎上腺皮質激素釋放因子1型受體經cAMP/PKA信號通路對U87MG細胞凋亡機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 李廣康;RNAi沉默Rap2B基因對惡性轉化BEAS-2B細胞的作用[D];鄭州大學;2015年

本文編號：1733202