本文關(guān)鍵詞： 新型 鵝細(xì)小病毒 VP3蛋白 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 血清學(xué)檢測(cè)　出處：《河北大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：近年來,一種新型鵝細(xì)小病毒(GPV)在我國(guó)北方各省鴨群中出現(xiàn)并流行,導(dǎo)致發(fā)病鴨群出現(xiàn)短喙凸舌,生長(zhǎng)遲緩等癥狀,命名為鴨短喙侏儒綜合征(BADS)。本研究建立了一種基于新型GPV病毒VP3結(jié)構(gòu)蛋白的間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),檢測(cè)血清中的GPV抗體。大腸桿菌表達(dá)的GPV-VP3衣殼蛋白經(jīng)包涵體粗純化及鎳柱純化,Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示純化后的蛋白可與GPV抗體反應(yīng)。通過條件優(yōu)化:抗原包被最適濃度為100 ng/孔,4℃過夜包被;使用復(fù)合封閉液封閉2 h;最佳一抗稀釋倍數(shù)為1:640,作用時(shí)間為1 h;辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗體稀釋倍數(shù)為1:10000,二抗反應(yīng)時(shí)間為1 h;TMD顯色時(shí)間為15 min,建立了一種基于VP3蛋白檢測(cè)新型GPV抗體的間接ELISA方法。特異性檢測(cè)顯示,該方法不與新城疫病毒、鴨肝炎病毒、鴨源呼腸孤病毒、禽流感病毒和傳染性法氏囊病毒有交叉反應(yīng);靈敏性檢測(cè)結(jié)果顯示:待測(cè)血清10240倍稀釋后,仍可良好檢出GPV特異性抗體;臨床樣品檢測(cè)評(píng)價(jià)顯示:80份血清樣本用血清中和試驗(yàn)(SN)和建立的ELISA方法平行檢測(cè)。結(jié)果顯示兩種方法檢測(cè)都為陽性的有32份,陰性的有48份,符合率為88.75%。該VP3-ELISA方法有高靈敏度和特異性,是一種檢測(cè)血清中GPV抗體的有效的血清學(xué)檢測(cè)方法。
[Abstract]:In recent years, a new type of goose parvovirus (GPVV) has been found and prevalent in duck populations in northern provinces of China, resulting in symptoms such as short beak protruding tongue and growth retardation. This study established an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) based on a novel GPV virus VP3 structural protein. Detection of GPV antibody in serum. The GPV-VP3 capsid protein expressed by Escherichia coli was purified by inclusion body and purified by nickel column. The results showed that the purified protein could react with GPV antibody. The degree is 100ng / pore 4 鈩，

本文編號(hào)：1509024