本文關(guān)鍵詞：桃柁酚抗金黃色葡萄球菌的活性及機(jī)制研究　出處：《吉林大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：據(jù)報(bào)道,食源性致病菌如金葡菌(金葡菌)引起的食品污染對(duì)人類的身體健康造成了嚴(yán)重的威脅。金葡菌能夠引起食源性疾病和食物中毒,這與社會(huì)公共健康密切相關(guān),并且這一領(lǐng)域在近年來受到越來越多的關(guān)注。此外,金葡菌還能夠引起一系列的感染,這也是全球主要關(guān)心的問題。金葡菌產(chǎn)生多種毒力蛋白,進(jìn)而導(dǎo)致感染和食物中毒。這些毒性蛋白包括透明質(zhì)酸酶,蛋白酶,凝固酶,脂酶,脫氧核糖核酸酶以及腸毒素等。在這些由金葡菌產(chǎn)生的毒力蛋白中,外毒素α-溶血素,葡萄球菌腸毒素A(SEA)和葡萄球菌腸毒素B(SEB)在一定意義上被認(rèn)為是導(dǎo)致致病性的主要原因。桃柁酚,一種從羅漢松中提取出來的傳統(tǒng)的中草藥,是一種新穎的抗菌酚二萜,有報(bào)道發(fā)現(xiàn)桃柁酚能夠有效地抑制一些病原體的擴(kuò)散。然而,并沒有報(bào)告指出桃柁酚對(duì)金葡菌產(chǎn)生的α-溶血素,SEA和SEB分泌的影響,且桃柁酚抗金葡菌的抗菌機(jī)制也尚未清楚。因此,在這項(xiàng)研究中,我們的第一個(gè)目的就是評(píng)估桃柁酚這三個(gè)外毒素分泌的影響,另外,桃柁酚對(duì)金葡菌的抗菌活性和抗菌機(jī)制-膜破損機(jī)制也被探究出來。桃柁酚能夠在低劑量的條件下抑制金葡菌的生長(zhǎng)繁殖,并且可以抑制的外毒素的分泌產(chǎn)生。此外,桃柁酚通過破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜的作用方式進(jìn)行抗菌,破壞菌體細(xì)胞膜,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。桃柁酚對(duì)金葡菌的MIC值已經(jīng)通過實(shí)驗(yàn)確定,我們得出的結(jié)論是,桃柁酚對(duì)對(duì)金葡菌菌株的MIC值為2 4μg/m L。而對(duì)于金葡菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC 29213,桃柁酚對(duì)其MIC值是2μg/m L。時(shí)間-殺菌曲線的實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表明,桃柁酚能夠在實(shí)驗(yàn)室條件下和食品模型中抑制金葡菌的生長(zhǎng),且呈現(xiàn)劑量依賴性。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn),在0.25μg/m L的桃柁酚濃度下,金葡菌的菌落數(shù)并沒有明顯減少,然后在0.5μg/m L的桃柁酚濃度下金葡菌的菌落數(shù)開始明顯減少,在1μg/m L的桃柁酚濃度下金葡菌的菌落數(shù)開始最大幅度的減少。在溶血試驗(yàn)中,與空白對(duì)照組相比較,當(dāng)加入終濃度為0.25、0.5和1μg/m L的桃柁酚時(shí),溶血的比例分別降低至95.6%,81.5%和26.5%。桃柁酚抑制金葡菌菌上清的溶血能力呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)western blot的結(jié)果表明亞抑菌濃度下的桃柁酚能夠有效地抑制外毒素α-溶血素,SEA和SEB的分泌,并呈現(xiàn)劑量依賴性的方式。如我們預(yù)期一樣,桃柁酚也能夠顯著降低金葡菌ATCC 29213外毒素基因Sar A,agr A,hla,sea和seb的轉(zhuǎn)錄水平,也呈現(xiàn)出劑量依賴性。此外,隨著亞抑菌濃度下桃柁酚對(duì)金葡菌菌懸液的劑量不斷增加,RAW 264.7細(xì)胞中TNF-α釋放的水平也逐漸減少。菌體細(xì)胞內(nèi)胞質(zhì)內(nèi)容的泄漏是一個(gè)典型的證據(jù)能夠表明細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)膜已經(jīng)受到破壞。因此,電導(dǎo)率測(cè)定實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)結(jié)果表明,桃柁酚處理金葡菌菌懸液之后,上清液的電導(dǎo)率有了不同程度的增加,進(jìn)而說明,不同濃度的桃柁酚對(duì)金葡菌菌體細(xì)胞膜產(chǎn)生了破壞作用,嚴(yán)重的影響了都細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性。此外,我們發(fā)現(xiàn)桃桃柁酚能夠減少金葡菌細(xì)胞質(zhì)中β-半乳糖苷酶的產(chǎn)生。而SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)和瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的結(jié)果分析表明,桃柁酚能夠?qū)鹌暇w細(xì)胞質(zhì)膜造成不可逆的損害,并通過滲透和破壞細(xì)胞膜,使得菌體內(nèi)的細(xì)胞可溶性蛋白質(zhì)和核酸減少,最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。當(dāng)金葡菌菌體遇到合適的抗菌劑的時(shí)候,金葡菌細(xì)胞壁表面惡化,金葡菌菌體的生理變化和形態(tài)也隨之發(fā)生變化。SEM實(shí)驗(yàn)觀察表明當(dāng)桃柁酚作用于細(xì)菌細(xì)胞時(shí),在不同的作用時(shí)間,細(xì)胞變得畸形,產(chǎn)生褶皺,凹凸不平,甚至有些細(xì)胞腫脹,從而引起營養(yǎng)物質(zhì)和遺傳物質(zhì)的浸出。經(jīng)TEM分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,桃柁酚造成金葡菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的重大損害包括細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì),這也最終導(dǎo)致了細(xì)菌細(xì)胞快速溶解和死亡。從這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中可得出結(jié)論,我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不僅提供了額外的證據(jù)支持桃柁酚是一種天然的抗菌劑,清楚了桃柁酚抗金葡菌的抑菌機(jī)制。因此,我們建議桃柁酚可能作為一種很有前途的天然化合物應(yīng)用于在食品工業(yè)和制藥工業(yè)。
[Abstract]:鎹姤閬，

本文編號(hào)：1382156