本文關(guān)鍵詞：出芽短梗霉轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析及普魯蘭糖合成相關(guān)基因功能研究　出處：《沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 出芽短梗霉 普魯蘭糖合成 轉(zhuǎn)錄水平 載體構(gòu)建 基因敲除

【摘要】：普魯蘭糖是一種由出芽短梗霉產(chǎn)生的線性胞外多糖。由于其獨(dú)特的化學(xué)性質(zhì)和物理結(jié)構(gòu)被廣泛應(yīng)用于食品、工業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域。出芽短梗霉合成普魯蘭糖是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。為了研究普魯蘭糖的生物合成機(jī)理,本試驗(yàn)測(cè)定了出芽短梗霉轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。篩選出普魯蘭糖合成相關(guān)基因,同時(shí)測(cè)定其轉(zhuǎn)錄水平,完成進(jìn)一步篩選。此外通過(guò)構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子P1的表達(dá)載體獲取純化蛋白,探索與普魯蘭糖合成相關(guān)候選基因的互作。最后通過(guò)構(gòu)建P1敲除體系進(jìn)一步驗(yàn)證其基因功能。本試驗(yàn)得出以下結(jié)論:(1)對(duì)本課題組保藏的一株出芽短梗霉野生型菌株NG進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,結(jié)果顯示,NG共有13,705個(gè)Unigenes,平均長(zhǎng)度為1457bp。此外,對(duì)NG的Unigenes進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,通過(guò)對(duì)GO、KOG和KEGG的功能注釋,篩選出與普魯蘭糖合成相關(guān)的基因,包括7個(gè)葡糖基轉(zhuǎn)移酶基因和1個(gè)焦磷酸化酶基因。為研究普魯蘭糖的生物合成和分子生物學(xué)機(jī)理提供理論參考。(2)利用RT-qPCR測(cè)定NG中的7個(gè)葡糖基轉(zhuǎn)移酶候選基因和1個(gè)焦磷酸化酶候選基因在YAD、YPD、YND三種培養(yǎng)條件下的表達(dá)水平,結(jié)果顯示與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)一致,并驗(yàn)證了轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的可靠性。利用RT-qPCR測(cè)定UVMU3-1不同時(shí)間段8個(gè)候選基因的轉(zhuǎn)錄水平,最終篩選出5個(gè)葡糖基轉(zhuǎn)移酶基因(comp5913、comp8271、comp8503、comp11697和comp6663)和1個(gè)焦磷酸化酶基因(comp6817)與多糖合成呈正相關(guān),進(jìn)一步推測(cè)6個(gè)候選基因與普魯蘭糖合成相關(guān)。(3)本試驗(yàn)成功構(gòu)建與出芽短梗霉細(xì)胞分化及多糖合成相關(guān)基因P1(comp14856,1164bp)的表達(dá)載體,并成功誘導(dǎo),獲得純化的P1蛋白。為探索P1蛋白與6個(gè)候選基因之間的互作關(guān)系,驗(yàn)證其轉(zhuǎn)錄因子功能打下了基礎(chǔ)。(4)通過(guò)構(gòu)建P1基因上下游同源臂片段,成功獲得P1敲除載體,但農(nóng)桿菌侵染并沒(méi)有成功,可能是質(zhì)粒選取不當(dāng)或侵染條件不合適導(dǎo)致的,有待進(jìn)一步試驗(yàn)。轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的獲得和普魯蘭糖合成相關(guān)基因的篩選為研究普魯蘭糖的代謝調(diào)控和合成機(jī)理提供了有價(jià)值的數(shù)據(jù),P1蛋白的成功表達(dá)為研究出芽短梗霉的細(xì)胞分化和多糖合成提供了重要信息,以上試驗(yàn)結(jié)果為從分子水平提高普魯蘭糖的產(chǎn)量奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q93

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