本文關(guān)鍵詞：FOXQ1過(guò)表達(dá)對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的抗衰老作用及其機(jī)制探究　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： FOXQ1 過(guò)表達(dá) 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 抗衰老作用 衰老相關(guān)分泌表型

【摘要】：干細(xì)胞是一類(lèi)具有自我更新能力與多向分化潛能的重要細(xì)胞群體。并且,在阿爾茨海默癥、帕金森癥等研究領(lǐng)域干細(xì)胞轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的研究已經(jīng)取得了豐碩的成果。其中,臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)具有取材方便,低免疫原性,分化能力強(qiáng)等等優(yōu)勢(shì),成為轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究的重要實(shí)驗(yàn)對(duì)象。但是,hUC-MSCs在體外培養(yǎng)條件下,隨著操作中不可避免的機(jī)械損傷、化學(xué)處理,使得細(xì)胞增殖分化能力也隨之減弱,最為重要的是干細(xì)胞的干性也隨之降低,這成為嚴(yán)重限制hUC-MSCs臨床實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的關(guān)鍵點(diǎn)。FOXQ1是叉頭框蛋白家族(Forkhead box Family,FOX)中一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。近年的腫瘤學(xué)研究發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤組織中,FOXQ1均呈高表達(dá),且其表達(dá)量與病患的腫瘤惡性程度呈現(xiàn)正相關(guān)。同時(shí),在眾多腫瘤細(xì)胞系中,FOXQ1可以調(diào)控癌細(xì)胞增殖、周期、遷移等過(guò)程,進(jìn)而調(diào)控腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移。體外實(shí)驗(yàn)證明,通過(guò)過(guò)表達(dá)或敲除FOXQ1,腫瘤細(xì)胞的增殖能力也隨之增強(qiáng)或減弱。以上結(jié)果提示,FOXQ1在腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移中的具有重要意義,可能成為未來(lái)腫瘤學(xué)研究中的基因靶點(diǎn)。鑒于FOXQ1的生物學(xué)功能,研究其能否延緩hUC-MSCs的衰老,促進(jìn)增殖,能否引起細(xì)胞癌變成為實(shí)驗(yàn)研究的重點(diǎn),同時(shí),相對(duì)眾多腫瘤學(xué)研究,此項(xiàng)研究亦是FOXQ1首次在正常體細(xì)胞中研究,而且,hUC-MSCs中FOXQ1的作用機(jī)制尚不明確,需要深入的實(shí)驗(yàn)探究。目的通過(guò)慢病毒介導(dǎo),過(guò)表達(dá)FOXQ1基因后,在衰老的hUC-MSCs中,探究體外體內(nèi)條件下,過(guò)表達(dá)FOXQ1是否會(huì)對(duì)hUC-MSCs產(chǎn)生促進(jìn)增殖、延緩衰老的作用,以及研究FOXQ1在hUC-MSCs中的內(nèi)在調(diào)控機(jī)制。方法1、構(gòu)建FOXQ1過(guò)表達(dá)的慢病毒載體并在hUC-MSCs中驗(yàn)證過(guò)表達(dá)效果首先,分離臍帶細(xì)胞并進(jìn)行表面抗原鑒定。之后,通過(guò)PCR擴(kuò)增FOXQ1的CDS序列,將其插入慢病毒載體EcoR I與Xba I酶切位點(diǎn)之間,包裝提取純化病毒液。感染hUC-MSCs并通過(guò)藥篩建立穩(wěn)定細(xì)胞系。通過(guò)western blot與qPCR檢測(cè)過(guò)表達(dá)組與空載對(duì)照組的FOXQ1表達(dá)量差異。2、體外實(shí)驗(yàn)研究FOXQ1過(guò)表達(dá)對(duì)hUC-MSCs增殖、衰老等相關(guān)指標(biāo)的影響及其機(jī)制探究首先,檢測(cè)不同代數(shù)的hUC-MSCs衰老程度與FOXQ1的蛋白表達(dá)量。其次,具體細(xì)胞分組分為P3-hUC-MSCs,P15-hUC-MSCs,P15-Vector-hUC-MSCs(病毒空載對(duì)照組),P15-FOXQ1-hUC-MSCs(病毒過(guò)表達(dá)組)。通過(guò)CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖,SA-β-gal檢測(cè)細(xì)胞衰老。western blot與qPCR檢測(cè)衰老相關(guān)基因(P16、P21、P53、SIRT1、PCNA)表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化。熒光法鑒定細(xì)胞凋亡情況。Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力變化。最后,qPCR檢測(cè)不同組間加入SIRT1抑制劑EX527前后的衰老相關(guān)分泌表型(SASP,senescence associated secretory phenotype)水平變化(主要是IL-6、IL-8)。3、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)FOXQ1過(guò)表達(dá)后的hUC-MSCs對(duì)APP+鼠的治療效果,反映過(guò)表達(dá)后hUC-MSCs在體內(nèi)條件下的存活與增殖能力的變化首先,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分組,共計(jì)6組,分別是WT組(C57BL/6鼠,非治療對(duì)照組),APP+(非治療對(duì)照組),P3(P3代干細(xì)胞治療組),P15(P15代干細(xì)胞治療組),P15-Vector(P15代病毒空載干細(xì)胞治療組),P15-FOXQ1(P15代過(guò)表達(dá)FOXQ1干細(xì)胞治療組)。PCR鑒定APP+和WT鼠。取五月齡SPF級(jí)小鼠,每組10只,共計(jì)60只。經(jīng)過(guò)一個(gè)月干細(xì)胞注射治療后,通過(guò)莫氏水迷宮檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化。處死小鼠后,取血清檢測(cè)SOD含量。取全腦,免疫組化檢測(cè)小鼠海馬MAB1281表達(dá)情況。提取海馬蛋白,檢測(cè)衰老相關(guān)基因P16、P21、P53、SIRT1、SIRT2、PCNA,以及AD致病相關(guān)蛋白tau、p-tau(ser396),p-tau(ser235)的表達(dá)變化。結(jié)果1、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,符合hUC-MSCs表面抗原表達(dá)情況,不表達(dá)CD29(99.8%),CD90(99.5%),HLA-ABC(99.6%);高表達(dá)CD34(99.2%),CD45(99.9%),HLA-DR(99.6%)。FOXQ1過(guò)表達(dá)慢病毒重組載體構(gòu)建成功,FOXQ1過(guò)表達(dá)組hUC-MSCs的FOXQ1蛋白及mRNA表達(dá)水平較病毒空載組有極顯著升高(P0.01)。2、通過(guò)western blot與SA-β-gal檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著干細(xì)胞的衰老,FOXQ1的表達(dá)也隨之下降。CCK-8結(jié)果顯示,FOXQ1過(guò)表達(dá)組較空載組細(xì)胞增殖能力有顯著增強(qiáng)(P0.05),SA-β-gal染色結(jié)果提示,過(guò)表達(dá)組的藍(lán)染率較空載組明顯下降(P0.01)。蛋白水平檢測(cè)結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)組的衰老正相關(guān)蛋白p16(P0.01)、p21(P0.05)、p53(P0.05)表達(dá)均低于空載組,衰老負(fù)相關(guān)蛋白SIRT1(P0.01)、PCNA(P0.05)均明顯高于對(duì)照組。mRNA表達(dá)水平上P16(P0.05)、P21(P0.01)、P53(P0.05),SIRT1(P0.05)、PCNA(P0.05)的表達(dá)呈現(xiàn)出相同趨勢(shì)。FOXQ1過(guò)表達(dá)后,hUC-MSCs其增殖能力增強(qiáng),但細(xì)胞仍會(huì)隨著代數(shù)增加而衰老,細(xì)胞分裂能力增強(qiáng),并未達(dá)到無(wú)限增殖能力,傳代過(guò)程中未出現(xiàn)癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。在細(xì)胞遷移能力方面,FOXQ1過(guò)表達(dá)可以顯著促進(jìn)細(xì)胞遷移能力。通過(guò)熒光法分析,FOXQ1可以顯著減少細(xì)胞凋亡。在SASP探究中,FOXQ1過(guò)表達(dá)組較空載組,其IL-6(P0.01),IL-8(P0.05)表達(dá)水平明顯較低。當(dāng)FOXQ1過(guò)表達(dá)組加入SIRT1抑制劑EX527后,其SASP表達(dá)水平上升,接近至空載組水平(P0.05)。3、各組小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,FOXQ1過(guò)表達(dá)治療組的小鼠學(xué)習(xí)記憶能力有著顯著提升,其逃避潛伏期,穿越平臺(tái)次數(shù),平臺(tái)象限停留時(shí)間均有明顯高于對(duì)照組(P0.05)。小鼠海馬MAB1281免疫組化染色結(jié)果顯示,FOXQ1過(guò)表達(dá)組的海馬區(qū)域細(xì)胞遷移率較對(duì)照組有顯著提升(P0.05),血清SOD含量明顯升高(P0.05)。小鼠海馬部分western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,衰老正相關(guān)蛋白P21、P53,過(guò)表達(dá)組明顯低于對(duì)照組(P0.05),P16差異不顯著。衰老負(fù)相關(guān)蛋白SIRT1、SIRT2、PCNA,過(guò)表達(dá)組明顯高于對(duì)照組(P0.05)。AD致病相關(guān)蛋白,tau蛋白差異不顯著,對(duì)于磷酸化tau蛋白水平p-tau(ser396),p-tau(ser235)(P0.05),FOXQ1過(guò)表達(dá)組表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組水平。結(jié)論1、臍帶分離的細(xì)胞符合hUC-MSCs表面抗原表達(dá)。FOXQ1慢病毒過(guò)表達(dá)載體系統(tǒng)可以有效提高其在hUC-MSCs中的表達(dá),蛋白水平及mRNA水平均有顯著提高。2、FOXQ1過(guò)表達(dá)后,使hUC-MSCs在體外增殖能力,遷移能力,抗衰能力明顯增強(qiáng),未出現(xiàn)癌細(xì)胞特征;FOXQ1可通過(guò)SIRT1調(diào)節(jié)細(xì)胞衰老相關(guān)分泌表型,進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞衰老進(jìn)程。3、體內(nèi)條件下,FOXQ1過(guò)表達(dá)促進(jìn)了hUC-MSCs在小鼠腦內(nèi)的的存活能力與遷移能力。亦間接說(shuō)明,FOXQ1過(guò)表達(dá)增強(qiáng)了hUC-MSCs抗衰能力。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 仵敏娟,劉善榮,劉厚奇;間充質(zhì)干細(xì)胞特性與應(yīng)用前景[J];生命科學(xué);2004年03期

2 史春夢(mèng);;間充質(zhì)干細(xì)胞表述中需要注意的幾個(gè)問(wèn)題[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年14期

3 吳清法,王立生,吳祖澤;間充質(zhì)干細(xì)胞的來(lái)源及臨床應(yīng)用[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2002年03期

4 鄭春梅,孫昭,曹瑩,孫琪云,馬麗,馬冠杰,姜學(xué)英,趙春華;胎兒肺臟來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定與損傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)生物工程雜志;2004年03期

5 余國(guó)建;間充質(zhì)干細(xì)胞分化成骨的研究[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè);2004年S1期

6 宮立眾,田小波,鐘永明,夏順中;間充質(zhì)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2004年11期

7 王蓓,汪維偉;間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2005年06期

8 陳莉娜;王穎;張艷艷;關(guān)偉軍;;間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年28期

9 ;科技動(dòng)態(tài)[J];大眾科技;2008年03期

10 王瑛;李寧麗;;間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)趨化因子及受體的相關(guān)生物學(xué)功能[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2008年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陳可;王丁;韓之波;朱德林;韓忠朝;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外發(fā)揮免疫活性的研究[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

2 金明順;張毅;賈秀芬;周燕華;閆妍;劉慧雯;;小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)以及多潛能分化的研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

3 李爭(zhēng)艷;劉楊;翟麗麗;楊迷玲;王立峰;;間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤發(fā)展過(guò)程中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

4 張彥;李尚珠;;間充質(zhì)干細(xì)胞在血管工程中的機(jī)制及應(yīng)用[A];2009全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合周?chē)芗膊W(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2009年

5 石玉;戴\戎;;周期性拉應(yīng)力對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化影響的研究[A];第九屆全國(guó)生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

6 黎嬌;朱爭(zhēng)艷;杜智;駱瑩;王鵬;高英堂;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌物對(duì)肝細(xì)胞增殖和凋亡的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第30次學(xué)術(shù)年會(huì)暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 譚遠(yuǎn)超;Kevin;姜紅江;黃相杰;周紀(jì)平;;間充質(zhì)干細(xì)胞在骨傷疾病治療中的應(yīng)用[A];首屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合骨科微創(chuàng)學(xué)術(shù)交流會(huì)暨專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2011年

8 唐佩弦;;間充質(zhì)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用前景[A];第三屆全國(guó)血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2003年

9 戴育成;;間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性和應(yīng)用[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

10 胡琳莉;王昕榮;錢(qián)坤;李舟;楊薇;朱桂金;;小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜分化的實(shí)驗(yàn)研究[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)、中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)生殖生物學(xué)分會(huì)聯(lián)合年會(huì)論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 滿學(xué)杰;天津?yàn)I海新區(qū)建最大間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)基地[N];新華每日電訊;2008年

2 滿學(xué)杰;津昂賽打造間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)基地[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

3 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院輸血科 李忠俊 整理 吳劉佳;間充質(zhì)干細(xì)胞研究又見(jiàn)新方法[N];健康報(bào);2013年

4 上海生科院 上海交大醫(yī)學(xué)院健康科學(xué)研究所 曹楷;間充質(zhì)干細(xì)胞：干細(xì)胞中的孫悟空[N];上�？萍紙�(bào);2014年

5 記者　陳建強(qiáng);首家間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)在津建成[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

6 記者　馮國(guó)梧;細(xì)胞產(chǎn)品國(guó)家工程中心建設(shè)方案獲準(zhǔn)[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

7 實(shí)習(xí)生 劉霞;間充質(zhì)干細(xì)胞有望用于面部整形[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

8 本報(bào)記者 王新佳;我國(guó)“原始間充質(zhì)干細(xì)胞”注射液進(jìn)入臨床研究[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2005年

9 馮國(guó)梧;全球首個(gè)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)規(guī)�；\(yùn)營(yíng)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

10 劉瑩清;全球首個(gè)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)泰達(dá)規(guī)模運(yùn)營(yíng)[N];北方經(jīng)濟(jì)時(shí)報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王皓;五指山小型豬OCT-4、SOX-2基因在骨髓間充質(zhì)與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

2 孔德曉;間充質(zhì)干細(xì)胞及胰島素分泌細(xì)胞治療糖尿病的臨床及應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];山東大學(xué);2015年

3 董苑;SDF-1復(fù)合PDPBB的構(gòu)建及對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞趨化影響的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王磊;誘導(dǎo)胎盤(pán)來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞向成牙骨質(zhì)細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

5 房賀;連接黏附分子A在促進(jìn)MSC修復(fù)CC14肝損傷中的作用及其機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 陳潔;間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì)急性肺損傷小鼠的影響及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

7 許婷;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1在蟑螂過(guò)敏原誘導(dǎo)的哮喘中對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞募集遷移的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

8 周雅麗;攜氧間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胃癌化療效果的影響及其機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

9 沈舒寧;CKIP-1負(fù)調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 朱鎮(zhèn);外源性骨礦化蛋白1轉(zhuǎn)染人胎盤(pán)源間充質(zhì)干細(xì)胞及其蛋白質(zhì)組研究[D];吉林大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張濤;FOXQ1過(guò)表達(dá)對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的抗衰老作用及其機(jī)制探究[D];鄭州大學(xué);2017年

2 李超;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中AC基因亞型的表達(dá)及AC3對(duì)其纖毛長(zhǎng)度的影響[D];河北大學(xué);2015年

3 林濤;殼聚糖水凝膠復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

4 彭龍英;心肌營(yíng)養(yǎng)素1促進(jìn)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)分化存活及PI3K/Akt信號(hào)通路機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

5 喬曉慧;酸性環(huán)境對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

6 張紅霞;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定及其對(duì)人肺癌細(xì)胞惡性表型的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

7 顧立超;BTK抑制劑對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞miR-21的調(diào)節(jié)作用[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

8 王文杰;鴨胚間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其移植修復(fù)肝損傷研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

9 張猛;血管內(nèi)皮前體細(xì)胞對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化潛能的影響[D];石河子大學(xué);2015年

10 馬麗媛;利用MyoD基因誘導(dǎo)綿羊臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成肌細(xì)胞的研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1336499