本文關鍵詞：新疆南部地方品種綿羊毛囊KAP7基因的多克隆抗體制備與真核表達　出處：《塔里木大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 綿羊 角蛋白關聯(lián)蛋白 KAP7基因 多克隆抗體 熒光定量PCR 真核表達

【摘要】：和田羊羊毛是制作著名“和田地毯”的優(yōu)良原料,卡拉庫爾羊是羔皮品種羊,羊毛品質的提高有利于支撐地方經濟的可持續(xù)發(fā)展。本研究旨在為新疆南部3個地方品種綿羊平原型和田羊、山區(qū)型和田羊與卡拉庫爾羊毛囊角蛋白關聯(lián)基因KAP7基因對半粗毛綿羊羊毛的產量與質量的影響提供一些理論支持和方法借鑒。本試驗以平原型和田羊、山區(qū)型和田羊與卡拉庫爾羊的皮膚毛囊為試驗材料,提取皮膚毛囊總RNA,反轉錄獲得cDNA第一鏈;(1)用原核引物PCR擴增毛囊角蛋白KAP7基因,構建pMD18-T-KAP7重組克隆質粒,進行雙酶切鑒定后構建p ET28a(+)-KAP7原核表達重組質粒,在BL21(DE3)大腸桿菌中表達,做SDS-PAGE電泳檢測,經提取、純化、回收得到目的蛋白,加弗氏佐劑免疫家兔得到多克隆抗體血清,使用間接的ELISA檢測抗體效價;(2)用熒光定量PCR檢測平原型和田羊、山區(qū)型和田羊與卡拉庫爾羊在m RNA水平上毛囊角蛋白KAP7基因表達量的差異;(3)用真核引物PCR擴增毛囊角蛋白KAP7基因,構建pMD18-T-KAP7重組克隆質粒,進行雙酶切鑒定后構建pEGFP-N1-KAP7真核表達重組質粒,轉染COS-7細胞,檢測熒光,并做Western Blot檢測。結果表明:(1)毛囊角蛋白KAP7基因原核表達重組質粒pET28a(+)-KAP7可以在BL21大腸桿菌中表達大小約為10 Ku的蛋白;(2)通過實時熒光定量PCR得到毛囊角蛋白KAP7基因在和田羊與卡拉庫爾羊之間在mRNA水平上表達量存在差異;(3)成功構建p EGFP-N1-KAP7真核表達重組質粒,可以在COS-7細胞中表達蛋白。結論:(1)毛囊角蛋白KAP7蛋白免疫家兔得到的多克隆抗體的陽性血清具有很高的免疫活性和特異性;(2)通過熒光定量PCR得到毛囊角蛋白KAP7基因在平原型和田羊與山區(qū)型和田羊皮膚毛囊mRNA水平上表達量差異不顯著(P0.05),而在兩個品種的和田羊與卡拉庫爾羊皮膚毛囊mRNA水平上表達量差異顯著(P0.05);(3)KAP7基因在COS-7細胞中能夠表達出大小約為39 Ku的蛋白。
【學位授予單位】：塔里木大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q78;S826

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9 武麗敏,江千濤,李琴,魏育明,鄭有良;LMW-GS16基因表達載體的構建[J];吉林農業(yè)大學學報;2005年04期

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1 蒲小勇;王行環(huán);王懷鵬;徐戰(zhàn)平;羅耀雄;胡禮泉;吳一龍;;人胰島素樣生長因子1基因表達載體的構建[A];第5次全國中西醫(yī)結合男科學術會議論文匯編暨男科提高班講義[C];2007年

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