本文關(guān)鍵詞：埃博霉素糖基轉(zhuǎn)移酶的初步探究

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【摘要】：埃博霉素(Epothilones)于1993年首次報(bào)道,是16元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類的天然產(chǎn)物,而且僅來源于纖維堆囊菌,它具有與紫杉醇類似的抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用機(jī)制,對(duì)多重耐藥的癌細(xì)胞展現(xiàn)出比紫杉醇更好的抑制活性。埃博霉素的抗癌機(jī)制是作用于微管蛋白的β亞單位,促進(jìn)微管蛋白的聚合,防止解聚,使細(xì)胞不能進(jìn)行正常的分裂,抑制細(xì)胞的生命活動(dòng),進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。2008年,埃博霉素B的類似物伊沙匹隆已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)進(jìn)行乳腺癌的治療,但埃博霉素的作用機(jī)制是建立在有毒性的化合物殺死癌細(xì)胞的基礎(chǔ)之上的,由于正常分裂的細(xì)胞和癌細(xì)胞在生理上的相似性,這使得埃博霉素對(duì)正常分裂的細(xì)胞組織仍具有很高毒性,臨床應(yīng)用時(shí)受到限制。根據(jù)已有的糖基化大環(huán)內(nèi)酯類化合物的性質(zhì),我們認(rèn)為埃博霉素的糖基化將可能有效地降低化合物的毒副作用,為埃博霉素的實(shí)際應(yīng)用提供更為廣泛的前景。實(shí)驗(yàn)室前期在一株纖維堆囊菌So0157-2的發(fā)酵液中檢測(cè)到了糖基化的埃博霉素A,這是在纖維堆囊菌中首次發(fā)現(xiàn)糖基化的埃博霉素。我們推測(cè)纖維堆囊菌So0157-2中潛在的糖基轉(zhuǎn)移酶催化了糖基化反應(yīng)。據(jù)此,我們的研究工作主要集中于發(fā)掘能夠?qū)Π２┟顾剡M(jìn)行糖基化修飾的糖基轉(zhuǎn)移酶。我們通過Cazy網(wǎng)站分析確定了纖維堆囊菌So0157-2擁有64個(gè)潛在的糖基轉(zhuǎn)移酶,實(shí)驗(yàn)初期,我們?cè)诎２┟顾睾诵幕虼氐纳舷掠晤A(yù)測(cè)了相關(guān)的糖基轉(zhuǎn)移酶,并對(duì)其進(jìn)行了克隆,構(gòu)建載體以及異源表達(dá),但體外糖基化實(shí)驗(yàn)并沒有發(fā)現(xiàn)對(duì)埃博霉素具有轉(zhuǎn)糖基功能的糖基轉(zhuǎn)移酶。于是,我們又在全基因組的范圍內(nèi)對(duì)潛在的糖基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行發(fā)掘,并且將目標(biāo)轉(zhuǎn)向外源糖基轉(zhuǎn)移酶對(duì)埃博霉素的修飾上。芽孢桿菌是產(chǎn)生糖基轉(zhuǎn)移酶的豐富類群,這些糖基轉(zhuǎn)移酶對(duì)廣泛的底物具有適應(yīng)性,它們對(duì)化合物的修飾更多的是一種配向性,而不是嚴(yán)格的底物專一性。至今,已經(jīng)有多種來自于芽孢桿菌的糖基轉(zhuǎn)移酶對(duì)化合物進(jìn)行糖基化修飾的報(bào)道。來源于地衣芽孢桿菌糖基轉(zhuǎn)移酶1家族的一個(gè)編號(hào)為YjiC的蛋白對(duì)埃博霉素具有轉(zhuǎn)糖基的活性,通過對(duì)這個(gè)酶的體外糖基化實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)YjiC對(duì)埃博霉素A和埃博霉素B都有轉(zhuǎn)糖基的能力。據(jù)此,研究工作如下展開:一方面,通過獲取目的片段,構(gòu)建載體,異源表達(dá)以及體外糖基化實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證糖基轉(zhuǎn)移酶YjiC的功能;另一方面,通過蛋白的純化,對(duì)糖基轉(zhuǎn)移酶YjiC的最適溫度,最適pH等酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行探究。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q55;R915

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 朱麗萍;黎志鳳;韓魁;李曙光;李越中;;新穎的黏細(xì)菌模塊化天然產(chǎn)物裝配線[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年06期

2 吳斌輝,李越中,胡瑋;纖維堆囊菌活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)通報(bào);2002年02期

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本文編號(hào)：1305567