本文關(guān)鍵詞：過表達(dá)CFLAP1基因擬南芥耐鹽性分析

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【摘要】：全世界受到鹽漬化影響的陸地面積已達(dá)到10%,鹽脅迫給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成的損失僅次于干旱,使現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)生產(chǎn)損失嚴(yán)重。利用基因工程進(jìn)行品種改良成為提高植物耐鹽性的快速有效方法,克隆植物耐鹽相關(guān)基因,通過基因工程方法將耐鹽基因轉(zhuǎn)入植物,改良甜土植物的耐鹽性,為培育耐鹽植物新品種,充分利用鹽漬化土壤提供借鑒。CFLAP1屬于bHLH類轉(zhuǎn)錄因子,在依賴于ABA信號(hào)通路的高滲脅迫中,ABA和PYR/PYLs形成的復(fù)合物促進(jìn)下游PP2C磷酸激酶的活化,PP2C活化SnRK2,SnRK2可以磷酸化CFLAP1,CFLAP1激活下游轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)而適應(yīng)脅迫壓力等。論文擬克隆擬南芥CFLAP1基因,并驗(yàn)證其在耐鹽性中的作用。利用Gateway技術(shù)構(gòu)建2×35S-CFLAP1-GFP-Nos過表達(dá)載體,通過蘸花法對(duì)擬南芥進(jìn)行轉(zhuǎn)化,經(jīng)潮霉素(37.5μg/ml)抗性篩選T1代、T2代、T3代轉(zhuǎn)基因株,最終獲得純合過表達(dá)CFLAP1轉(zhuǎn)基因擬南芥植株。通過分子水平檢測(cè),該融合基因成功整合至擬南芥基因組中,Western blot結(jié)果分析表明融合蛋白得以穩(wěn)定表達(dá),熒光顯微鏡觀察顯示該融合蛋白定位在擬南芥根部細(xì)胞膜上。通過表型觀察發(fā)現(xiàn),過表達(dá)CFLAP1轉(zhuǎn)基因擬南芥的分支數(shù)目要多于野生型。通過鹽處理轉(zhuǎn)基因和野生型兩種擬南芥幼苗(鹽濃度分別為0 mM、100 mM、150 mM、200 mM),檢測(cè)結(jié)果如下:(1)4種鹽濃度處理下,隨著鹽濃度的升高,兩組擬南芥的干重、鮮重均下降,但同一鹽濃度下轉(zhuǎn)基因擬南芥的鮮重、干重均大于對(duì)照組擬南芥(2)轉(zhuǎn)基因擬南芥在4種鹽處理下的根長(zhǎng)均大于對(duì)照組,當(dāng)鹽濃度為150 mM、200 mM時(shí),根長(zhǎng)差異顯著,在150 m M下轉(zhuǎn)基因擬南芥比對(duì)照增加34%,在200 mM下轉(zhuǎn)基因擬南芥比對(duì)照組擬南芥增加30%。(3)4種鹽濃度處理下轉(zhuǎn)基因擬南芥和對(duì)照組擬南芥脯氨酸含量均增加,4種處理下轉(zhuǎn)基因擬南芥脯氨酸含量均高于對(duì)照組擬南芥,在150 mM、200 mM時(shí)鹽濃度下有差異,在150 mM轉(zhuǎn)基因和對(duì)照組的脯氨酸含量分別為28.70μg/g、22.40μg/g,轉(zhuǎn)基因較對(duì)照組增加了28.10%,在200 mM鹽濃度下,轉(zhuǎn)基因和對(duì)照組的脯氨酸含量分別為89.19μg/g、52.84μg/g,轉(zhuǎn)基因較對(duì)照組增加了68.70%。(4)4種鹽濃度處理下轉(zhuǎn)基因擬南芥和對(duì)照組擬南芥丙二醛含量均增加,4種處理下轉(zhuǎn)基因擬南芥丙二醛含量均小于對(duì)照組擬南芥。在150 mM和200mM鹽濃度下有差異,在150 mM鹽濃度下,轉(zhuǎn)基因和對(duì)照組的丙二醛含量分別為16.89 nmol/g、21.47 nmol/g,轉(zhuǎn)基因較對(duì)照組降低了21.30%。在200 mM鹽濃度下,轉(zhuǎn)基因和對(duì)照組的丙二醛含量分別為23.85 nmol/g、35.65 nmol/g,轉(zhuǎn)基因較對(duì)照組降低了33.08%。鹽脅迫下過表達(dá)CFLAP1轉(zhuǎn)基因擬南芥的根長(zhǎng)、干重、鮮重大于對(duì)照組野生型,脯氨酸和丙二醛含量測(cè)定表明過表達(dá)CFLAP1轉(zhuǎn)基因擬南芥耐鹽性要高于野生型擬南芥。因此可說明過表達(dá)CFLAP1可提高擬南芥耐鹽性。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q943.2

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